| RNase H |
| 产品编号: D7089 |
| 产品包装: 100U |
| 产品价格: 167.00元 |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D7089 | RNase H | 100U | 167.00元 |
RNase H，即Ribonuclease H，中文名为核糖核酸酶H，是一种核糖核酸内切酶，可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA。RNase H不能水解单链或双链DNA或RNA中的磷酸二酯键，即不能消化单链或双链DNA或RNA。
特点：特异性消化DNA-RNA杂合链中的RNA，常用于cDNA第二链的合成。
用途：DNA-RNA杂合链中去除RNA，例如cDNA第二条链合成前去除mRNA；通过互补的DNA序列实现对RNA的定点剪切；除去杂交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A)；体外多腺苷酸化反应(polyadenylation reaction)产物研究。
来源：E.coli MRE-600细胞。
分子量：约18.4kDa(单体)。
活性定义：37℃20分钟内，能够催化1nmol杂合双链中的RNA形成酸可溶性核糖核苷酸形式所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件：20mM Tris-HCl(pH7.8)，40mM KCl，8mM MgCl2，1mM DTT，24μM[3H]-poly(A).poly(dT)，
0.03mg/ml BSA ，4%(v/v)glycerol。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。
酶储存溶液：25mM HEPES-KOH(pH8.0)，50mM KCl，1mM DTT，1mM EDTA，0.1mg/ml BSA，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：200mM Tris-HCl(pH7.8)，400mM KCl，80mM MgCl2，10mM DTT。
失活或抑制：65℃加热10分钟可使RNase H失活。金属离子螯合剂和巯基封闭剂均能抑制RNase H活性。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7089-1 | RNase H(5U/μl) | 100U |
| D7089-2 | Reaction Buffer(10X) | 0.2ml |
| － | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明
使用说明：
1. DNA-RNA杂合链中去除RNA：
a. 用反转录酶，例如BeyoRT M-MuLV反转录酶或BeyoRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)合成cDNA第一条链，70℃孵育10分钟终止反应。
b. 在冰浴上向已经合成第一条链的20μl反应体系中依次加入如下试剂：
| Reaction Buffer(10X) | 2μl |
| 无核酸酶去离子水 | 17.8μl |
| RNase H(5U/μl) | 0.2μl |
c. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
d. 37℃孵育1小时。
e. 加入2.5μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
f. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向上海金畔生物科技有限公司订购。
说明：其他情况DNA-RNA杂合链中去除RNA的条件可以参考上述条件进行。RNase H反应的pH范围约在7.5-8.3均可。
2. 杂合链中RNA的去除和cDNA第二链的合成：
a. 用反转录酶，例如BeyoRT M-MuLV反转录酶(D7153)、BeyoRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)(D7159)或BeyoRT cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-)(D7166)合成cDNA第一条链，70℃孵育10分钟终止反应。
b. 在冰浴上向已经合成第一条链的20μl反应体系中依次加入如下试剂：
| Reaction Buffer(10X)for DNA Polymerase I | 8μl |
| 无核酸酶去离子水 | 68.8μl |
| RNase H(5U/μl) | 0.2μl |
| DNA Polymerase I, E.coli | 3μl(30U) |
c. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
d. 15℃孵育2小时。(注意：反应温度不能超过15℃)
e. 加入5μl 0.5M EDTA(pH 8.0)混匀，以终止反应。
f. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向上海金畔生物科技有限公司订购。
注：Reaction Buffer(10X)for DNA Polymerase I：500mM Tris-HCl(pH 7.5 at 25℃)，100mM MgCl2，10mM DTT。
3. 其他用途请参考上述用途或相关文献资料进行。
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