EcoRI |
产品编号: D6330 |
产品包装: 5000U |
产品价格: 168.00元 |
产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
D6330 | EcoRI | 5000U | 168.00元 |
EcoRI内切酶为进口分装,基本信息如下:
识别序列 | 缓冲液兼容性(%) | 酶切温度 | 失活条件 | 甲基化干扰? | ||||||
G^AATTC CTTAA^G |
1X EcoRI | 1X B | 1X G | 1X O | 1X R | 1X Y | 2X Y | 37℃ | 65℃ 20min |
有时有干扰 |
100 | 0-20 | NR | 100 | 100* | NR | 100 |
*,Star activity,当酶量5倍或以上过量时会产生星号活性,即产生非特异性酶活性。
NR,不推荐使用这种缓冲液,因为会产生很高的星号活性。
根据识别序列邻近序列的不同,酶切效果受CG methylase导致的DNA甲基化的影响。
酶储存液组成为:10mM potassium phosphate(pH7.4 at 25℃),300mM NaCl,1mM EDTA,1mM DTT,0.2mg/ml BSA,0.15% Triton X-100 and 50% glycerol。
1X Buffer EcoRI组成为:50mM Tris-HCl(pH7.5 at 37℃),10mM MgCl2,100mM NaCl,0.02% Triton X-100,0.1mg/ml BSA。
1X Buffer Y组成为:33mM Tris-acetate(pH7.9 at 37℃),10mM magnesium acetate,66mM potassium acetate,0.1mg/ml BSA。
酶切和连接效率:50倍过量的本内切酶消化1小时,>95%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(recut)。
活性单位定义:在37℃,50微升反应体系中反应1小时,将1微克的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位,即1U。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6330-1 | EcoRI(10U/μl) | 5000U |
D6330-2 | 10X Buffer EcoRI | 1ml |
D6010Y | 10X Buffer Y | 1ml |
- | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明
使用说明:
1. 单酶切时可以参考如下反应体系进行:
待酶切DNA | 不超过1μg |
双蒸水或Milli-Q水 | 适量 |
10X Buffer EcoRI | 2μl |
EcoRI | 0.5-1μl |
总体积 | 20μl |
37℃孵育1小时或更长时间 |
说明:请注意把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶,加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。通常参考上述条件孵育1小时已经足够,但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果酶切较长时间甚至酶切过夜,可以使用更少量的酶。待酶切DNA量较大时,可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。
2. 双酶切或多酶切时,需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液,然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择,可以在一种酶消化完毕后进行纯化,纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。
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