使用说明：
1. 用生理盐水、磷酸缓冲液等适当缓冲液把抗原稀释至适当浓度。具体抗原用量及注射量请根据免疫要求确定或参考附录。
2. 根据所需注射量和注射点数量确定配制量。一般情况，抗原和佐剂的比例是1:1。抗原的用量也可以在30-50%之间自行调整。抗原含量为30%时后续乳化后会特别粘稠；含量为50%时后续乳化后粘稠度相对较低，后续注射等操作会比较方便。
3. 佐剂与抗原必须混合均匀，使抗原充分乳化，制备成“油包水”乳状液。混合乳化后会比较粘稠，滴加到生理盐水表面时，不会散开。混合乳化的方法有如下几种：
a. Vortex法：吸取与抗原相同体积的弗氏佐剂到离心管内或容器中，边vortex边滴加抗原，使抗原和佐剂充分混匀, 直至形成粘稠的乳剂为止。本方法适用于少量制备。
b. 注射器混合法：将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内(最好不超过注射器的一半容量)，两注射器之间以一细胶管相连，注意排净空气，先将抗原推入佐剂中，然后交替推动针管，直至形成粘稠的乳剂并很难推动为止。本方法容易做到无菌操作，抗原损失少，适用于少量或中量制备。
c. 搅拌法：抗原和佐剂分别加入乳化管，抗原会慢慢沉入底部，并和佐剂分层，然后用搅拌器自上而下慢慢搅拌佐剂入抗原层，慢慢下移，这时会发现混合液很快变成乳白色，且越来越粘。本方法适用于少量或中量制备。
d. 研磨法：取适量佐剂放入无菌的研钵，缓慢滴加等体积的抗原溶液，边滴边按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，继续研磨一段时间，使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。本方法适用于大量制备，缺点是研钵壁上易粘附大量乳剂，抗原损失较大。
e. 超声：如果有超声破碎仪可选择超声混匀法，但是要控制超声频率和时间，超声容易激发一些自由基，对抗原有未知损害。
4. 选择合适的注射器吸入1:1混合均匀的抗原和佐剂，排除气泡后进行免疫注射。不同物种进行皮下或肌肉注射时，每个注射点的最大用量请参考下表：

附录：制备抗体时免疫方案的制定
1. 多抗制备的免疫方案：
a. 免疫部位。常见的免疫部位有皮下、肌肉、腹腔、脚垫、静脉、脾脏。大型动物多为皮下或肌肉免疫，小型动物可采用腹腔等其它的免疫部位。制备多抗时，整个流程可采用同一种免疫部位，也可以多种部位联合使用，但是初次免疫都建议在皮下进行。免疫方法可采用背部多点注射法或颈部淋巴结较多的部位，如兔子脊柱两旁选4-6点皮下注射，每点注射0.1ml，加强免疫时再于上述部位选不同点注射(不要选择临近位点，否则溃疡不易愈合)。
b. 免疫形式。抗原通常需要与佐剂混合充分后才进行免疫。
c. 免疫剂量。免疫剂量根据被免疫的动物、免疫部位以及抗原的本身的特性相差很远。如果用兔制备多抗，首次免疫(皮下)的抗原一般在200-1000μg之间，对于大鼠，首次免疫(皮下)为100-500μg，对于小鼠， 首次免疫(皮下)一般在10-100μg之间，加强免疫一般为首次免疫剂量的20%-50%。尾静脉或脾内方式加强免疫则可减至几微克至十微克。对于体型比较大的动物可酌量增加(不能按照体重比增加)，具体的用量请参考文献。
d. 免疫周期。首次免疫后，一般在10-15天左右抗体的产量会达到一个峰值，但是此时抗体亲和力不够，并且大部分都是IgM，因此需要进行加强免疫。加强免疫一般在首次免疫后三至四周进行，第二次、第三次加强免疫间隔可以缩短至2-3周。这个时间不太能长也不能太短，太短起不到加强的效果，而且还容易引起免疫耐受，如果相隔太久，则前面的免疫将失去初步刺激的效果。如果是采用脾内免疫，则可以在一定程序上缩短免疫周期。加强免疫的次数一般为3次。
2. 单抗制备的免疫方案：
小鼠是制备单抗使用的主流动物，小鼠的免疫方案大部分与多抗制备相同。单抗制备中，免疫动物的方式一般第一针采用皮下免疫，后面的加强免疫采用腹腔免疫、腘内免疫、皮下免疫或者脾内直接免疫，免疫周期和多抗相似。一般皮下注射每个注射点注射30-50μl左右混有佐剂的抗原，每只小鼠注射6-8个点为宜。首次免疫和加强免疫结束后，在融合前三天一般还要进行一次冲击免疫，以增加脾脏内浆细胞的数量。

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