干细胞温和消化酶

【干细胞温和消化酶   用途与描述】

专门用于干细胞的消化，包括脐带间充质干细胞，脂肪间充质干细胞，胚胎干细胞（ES）等。
消化作用温和，对细胞的损害小。为目前干细胞临床研究与临床应用领域的新产品。

本产品特别适用于大规模生产干细胞的企业。消除了导致干细胞培养失败的重要隐患——消化过度问题。
本产品也特别适用于干细胞药物的研究与开发企业。无动物来源组分，成分明确，降低了干细胞药物申报的验证工作量与申报难度。

【干细胞温和消化酶   规格与保存】

【干细胞温和消化酶   产品特点】

1. 产品容错性好。
即便消化时间长达15分钟，对干细胞的后续传代也几乎没有影响。减少了对操作人员技能的要求。

2. 即取即用，不需等待。
4℃可稳定保存一年，不再需要-20℃保存。

3. 纯人工合成，无动物来源组分。
无感染疯牛病毒（天然牛胰酶）或口蹄疫病毒（天然猪胰酶）的可能性，成分明确。

【干细胞温和消化酶   产品性能】

新一代消化产品（温和消化酶）与传统消化产品（猪牛天然胰酶）对比表

上述数据为接种脐带来源的MSC的P2代种子细胞，T25培养瓶，接种密度8000 cells/cm2，72小时后消化所得P3代细胞的对应数据。

正常消化（未消化过度）时，温和酶 确定好于 传统胰酶。

P2代MSC种子细胞，传代培养72小时后，分别用温和酶和传统胰酶消化，得到P3代MSC细胞，检测消化后的细胞活率。
P3代MSC细胞继续培养72小时，分别用温和酶和传统胰酶消化，收获P4代MSC细胞，细胞计数。

细胞数量方面相差不大：温和酶比传统胰酶多出 7%。
细胞活率方面相差较大：温和酶比传统胰酶高出10%。

复苏P2代MSC种子细胞，连续传代3次，分别用温和酶和传统胰酶消化。
细胞数量方面：每一代温和酶均比传统胰酶多出 5%-10%。

4℃可稳定保存一年，不再需要-20℃保存。

干细胞温和消化酶在4℃环境下保存14个月，在超过有效期两个月后，酶活性仍保持在96%。

操作更便利，消化后不需终止消化，细胞培养上清稀释即可。

传统胰酶消化细胞后，需要额外添加血清，或完全培养基，或胰酶抑制剂，结合胰酶的消化位点，以达到终止消化的目的。
温和消化酶由于其设计原理，在消化细胞后，不需要终止消化，只需要添加细胞培养上清，稀释消化酶，离心去除即可。便利了操作。

成分明确，无任何动物来源组分，更安全。更适合临床研究、临床应用或药物申报用途。

传统胰酶，取自牛或猪羊的胰脏，经后期纯化结晶而得。动物来源与提取工艺决定了传统胰酶难以避免感染动物病毒，如疯牛病毒，猪口蹄疫病毒等。因此难以应用于生物制药与细胞治疗等临床相关领域。
温和消化酶，为全人工合成酶，消化位点清晰，经原核或真核系统表达，生产过程无任何动物来源组分的引入，所以安全性高，尤其适用于生物制药与细胞治疗等临床相关领域。

超时消化（消化过度）时，温和酶可多收细胞 68%。

分别超时2min消化MSC细胞，后传代培养72小时，收获细胞进行计数：
温和酶收到的细胞数量超出传统胰酶 68%。且细胞镜下形态良好。
而经传统胰酶消化的细胞，培养后镜下细胞形态杂乱。

传统胰酶延长消化2分钟，MSC的细胞照片	传统胰酶消化后，传代72h 后的细胞照片
温和酶延长消化2分钟，MSC的细胞照片	温和酶消化后，传代72h 后的细胞照片

极端消化（消化15分钟）时，温和酶基本不受影响。传统胰酶完全失败。

分别 15min消化MSC细胞，后传代培养72小时，收获细胞进行计数：
温和酶收到的细胞数量超出传统胰酶 11倍。且细胞镜下形态良好。
而经传统胰酶消化的细胞，培养后镜下细胞形态杂乱。

传统胰酶延长消化15分钟，MSC的细胞照片	传统胰酶消化后，传代72h 后的细胞照片
温和酶延长消化15分钟，MSC的细胞照片	温和酶消化后，传代72h 后的细胞照片

客户问答

Q： 为什么要开发干细胞温和消化酶产品？

A：消化过度与生长过密是干细胞培养失败的前两大原因。在生产级的大规模培养中，消化过度更是一个难以控制的工艺难题。温和消化酶就是为了解决这个问题而设计的：在该产品的消化时间挑战实验中，浸润在温和酶中长达30min的干细胞，细胞活率均能保持在90%以上，表型正常，且后续传代正常。

Q：干细胞温和消化酶的保存温度条件是2-8℃。我如果-20℃保存，会不会更好？

A：不会更好，会更差。温和酶是特殊设计的重组蛋白酶产品，蛋白结构稳定，在2-8℃条件下可稳定保存。
若放置-20℃环境，会涉及反复冻融问题，会导致该重组蛋白酶活性下降，细胞消化时间延长。

Q：温和消化酶消化细胞后，需要添加培养基或胰酶抑制剂终止消化过程吗？

A：不需要。细胞变圆后添加细胞培养上清稀释即可。体积为添加的消化酶的2倍体积，可降低用户使用成本。

Q：在消化时间方面，温和消化酶与传统胰酶有什么差别？

A：温和消化酶消化时间要稍长一些。消化干细胞需要2-5min左右的时间。

Q：添加完细胞培养上清稀释后，可不离心去除消化酶吗？

A：不可以。残留的消化酶会影响后续干细胞的培养过程，会导致干细胞的形态变化。

Q：用无血清培养基及含血清培养基培养的干细胞，在使用温和酶消化方面有什么异同？

A：相同之处是：无论使用何种培养基，在消化前均需要使用无钙镁离子的缓冲液冲洗细胞。
不同之处：如果使用无血清培养基，清洗一次即可。
如果使用血清培养基，需要连续清洗细胞三次，以确保无血清残留，否则消化时间会变长。