无血清细胞冻存液（货号：NC1001.1）用于细胞及细胞株的存储。2-8℃保存，冻存细胞无需程序降温。未添加动物血清，不含动物源组分；即取即用。

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产品描述

无血清细胞冻存液

【无血清细胞冻存液   用途与描述】

1、无血清细胞冻存液用于免疫细胞及干细胞的存储。
2、细胞保藏中心，无血清细胞冻存液用于细胞株的长期保存。
3、科研高校，无血清细胞冻存液用于细胞株冻存。
4、无血清细胞冻存液用于医院样本库细胞样本保存。

支持高密度冻存MSC细胞（1-2×107 cells/mL），为常规血清冻存液的10倍。

无血清细胞冻存液，含多种保护剂成分，一些保护剂，易于穿透细胞,避免细胞内部水分子形成冰晶损伤细胞，
同时另一些保护剂不能穿透细胞，但可以在冰晶形成之前，优先结合细胞外的水分子，降低细胞外溶液的电解
质浓度，减少阳离子进入细胞的数量。

我公司无血清细胞冻存液，为多种保护剂组合，在细胞内外进行双重保护，大大提高了细胞复苏存活率。

【无血清细胞冻存液   主要成份】

无血清细胞冻存液的主要成分：氨基酸，维生素，无机盐，白蛋白，冷冻保护剂。

【无血清细胞冻存液   使用方法】

1、细胞冻存前准备

a)要求冻存的细胞在对数生长期，且活率大于90%。
b)计算细胞密度，一般要求密度在1-3×106 cells/mL，不同细胞系请参照附表。

细胞系	冻存密度	备注
正常人成纤维细胞	1-3×106 cells/mL
杂交瘤细胞	1-3×106 cells/mL	某些hybridoma会因冷冻浓度太高 而在解冻24小时后死去。
贴壁肿瘤细胞	5-7×106 cells/mL	Hela除外, 1～3×106cells/ml即可
其他悬浮细胞	5-10×106 cells/mL	人淋巴细胞高密度冻存效果好
干细胞类	1-2×107 cells/mL	支持高密度冻存MSC细胞，为常规血清冻存液的10倍。

2、细胞冻存过程

a）将要冻存的细胞悬液，进行细胞计数，计数后离心，800转，3min即可。
b）弃去上清，将4度保存的无血清冻存液缓慢加入离心后的细胞沉淀中，根据密度调整细胞冻存液用量。
c）反复吹吸混匀后，分装于细胞冻存管中，每管500ul-1000ul（建议500ul/管）。
d）将分装好的细胞冻存管，直接置于-80度冰箱过夜保存，次日投入液氮中保存即可。

特别提醒：
1.冻存过程中，第2步和第3步在冰袋附近操作时，低温避免保护剂对细胞造成损伤。
2.细胞冻存管一定要保证完全密封，否则在复苏过程中有可能会炸裂。

3、细胞复苏过程

a）提前开启水浴锅，温度调节到37度。
b）将冻存的细胞冷冻管从液氮中取出，迅速置于水浴锅中，尽量1min内融化，时间越短对细胞影响越小。
c）将融化后的含细胞的冷冻保存液迅速析出置于新鲜培养基中充分混匀（如细胞冷冻保存液为500ul，则
加入到5ml新鲜培养基中，如细胞冷冻保存液位1ml，则加入10ml新鲜培养基中。）
d）混匀后立即离心，800转，3min即可，离心结束后弃上清，加入预温的新鲜培养液。
e）混匀后分瓶置于二氧化碳培养箱中培养。（二氧化碳浓度根据培养基要求决定，通常为5%）

【免疫细胞冻存时间与复苏活率对照表】

【MSC细胞冻存时间与复苏活率对照表】

【无血清细胞冻存液与含血清细胞冻存细胞复苏对比】

客户问答

1. 哪些细胞系适合用yocon无血清细胞冻存液冻存?

答：理论讲所有细胞冻存都适用 ，但细胞系种类繁多，无法逐一验证，需要客户冻存前进行预实验。

2. 我用我的冻存程序习惯了，可以还继续用程序降温的程序吗？

答：虽然我们产品可以无需程序降温冻存细胞，但如果用传统方法冻存的话也没有问题。对比复苏率一致，无明显差别。

3. 冻存的细胞复苏后如不离心，会有什么后果？

答：某些细胞对冻存液中的保护剂较敏感，如复苏时不离心，需传1-2代才可恢复。

4. 无血清冻存液与传统冻存液的冻存原则一样吗？

答：有些区别，主要在冻存步骤上：
传统冻存液需要程序降温，4℃30min，-20℃1h 、-80℃12h、液氮；
而无血清冻存液无需程序降温，-80℃12h后直接投入液氮。两者复苏程序一致，要保证快复苏的原则。

5. 为什么你们的细胞冻存液中不含血清，也能保存细胞？什么原理？

答：我们的无血清细胞冻存液中虽然不含血清，但是含多种保护剂成分：
一些保护剂，易于穿透细胞，避免细胞内部水分子形成冰晶损伤细胞；
另一些保护剂不能穿透细胞，但可以在冰晶形成之前，优先结合细胞外的水分子，降低细胞外溶液的电解质浓度，
减少阳离子进入细胞的数量，我公司无血清细胞冻存液，为多种保护剂组合，在细胞内外进行双重保护，大大提高
了细胞复苏存活率。

6.用你们的无血清细胞冻存液冻存细胞复苏率是多少？

答：我们用传统细胞冻存液、友康无血清细胞冻存液及日本Q冻存液对不同细胞进行冻存复苏对比实验。结果如图：

使用说明

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背景知识

2016年8月1日，友康生物的无血清细胞冻存液产品正式上市。该产品的特色是细胞冻存过程中不需要程序降温，且不含任何血清组分，无任何动物源组分。友康生物凭该产品，进入了一直被日本企业所垄断的不需程序降温、无动物源组分的细胞冻存领域。

该产品与传统的血清冻存液相比，具有冻存过程不需程序降温，减少了用户将近10小时的持续操作-等待-操作-等待的烦闷工作。细胞置入冻存液后可直接放入-80度冰箱保存。需要常年保存的可在隔夜后直接将细胞置于液氮中保存。操作便利。此外，该产品没有应用胎牛血清，而是使用了包括人血白蛋白等多种蛋白组分予以替代，产品不含任何动物源组分，因此，除了可以保存常规用途使用的细胞外，还可保存需要避免接触动物源的一些临床应用领域的细胞。

传统的冻存液，一般由胎牛血清、DMSO等组分组成。由于胎牛血清取自牛，因此，难以应用到需要避免接触动物源的应用领域。另外，传统的细胞冻存液，冻存保护的DMSO组分，只能在细胞外部保护细胞。因此，使用时必须采用程序降温的方式，方可保证细胞复苏的成功率（80%以上）。若不采用程序降温的形式，有些冻存的细胞，甚至复苏成功率为0。

友康生物的无血清细胞冻存液，采用公司冻存液配方，没有选用血清，而是用包括人白蛋白（科研用途产品选用牛血清白蛋白BSA）等蛋白组分替代了血清的用途。用包括DMSO在内的复合冻存保护剂替代了单一的DMSO的保护作用。复合保护剂中内部保护剂，易于穿透细胞膜，避免在细胞冻存过程中细胞内部的水分子形成冰晶损伤细胞。复合保护剂中的外部保护剂，可在溶液形成冰晶之前，在细胞膜外部竞争性的结合细胞膜表面的水分子，从而降低了细胞外溶液的电解质浓度，减少了阳离子进入细胞的数量。大大降低了温度迅速下降与温度迅速上升对细胞的损害。进而大大提高了细胞复苏存活率。

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