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Why are you need this Exosome-Depleted FBS?

胎牛血清以其能为细胞生长提供重要的营养及生长物质，而成为细胞完全培养基中必不可少的添加成分。然而，普通胎牛血清中因含有大量的牛源外泌体，会对体外培养的组织或细胞分泌的外泌体研究造成干扰，影响科学实验结果。

因此我们在总结大量外泌体相关文献并对比各种血清外泌体去除方法后，优化出了一种最佳的去除胎牛血清外泌体的处理方法。普通胎牛血清经该方法处理后，不仅能够去除血清中95%以上的牛源外泌体及95%以上的牛源miRNAs，同时保持了良好的细胞生长及维持功能。

How about this Exosome-Depleted FBS？

去除外泌体血清每一个批次都是经过严格的外泌体相关检测和细胞培养测试，确保每一批次产品的质量稳定可靠。我们的去外泌体胎牛血清具有如下特点：

√去掉FBS中95%以上的牛源外泌体！

√无菌、无支原体、无外源病毒污染！

√无任何其他成分添加！

√每一批次血清产品均经过严格的细胞培养测试！

√转为外泌体相关的组织及细胞培养研制！

Tips：

根据我们的研究结果，在培养悬浮细胞时，可直接使用Exosome-Depleted FBS单品，也可同时做Source FBS的对比，二者培养效果相当。

在培养贴壁细胞时，为尽可能多地收集细胞释放的外泌体，方便科研人员研究，我们建议可以先使用Source FBS将细胞培养至对数生长期/单层细胞，再更换为含10%Exosome-Depleted FBS的细胞完全培养基进行维持培养，到一定时间后收集培养上清中的细胞外泌体进行相关研究。若直接使用去外泌体的血清进行培养，需适当增大细胞接种浓度。

Supporting Data

以下是关于我们的去外泌体胎牛血清的部分检测结果：

A.SDS-PAGE血清电泳及外泌体特征蛋白CD63的Western Blot检测结果

Panel a：

通过SDS-PAGE凝胶电泳分析，由上图可以发现，处理前4个批次的源血清与处理后（经优化的超离处理方式）的4个批次的去外泌体血清均可见清晰的蛋白电泳条带（源血清中的蛋白含量略高于处理后的外泌体血清），说明该处理方法保留了血清中大部分的营养蛋白成分。

Panel b：

Western Blot检测不同FBS中外泌体特征性蛋白CD63的含量：实验室中阳性对照为普通FBS经超离处理后收集的外泌体浓缩液。通过普通超离和经优化的超离处理（4个不同批次）结果对比，普通超离不能完全去除FBS中的外泌体，我们的4个不同批次的去外泌体血清中均检测不到CD63，显示了卓越的外泌体去除效果。

B.FBS外泌体miRNA的检测

我们采用Trizol法和实际合法（QIAGEN，ExoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit）分别提取Source FBS、Exosome-Depleted FBS和经过PEG沉淀法处理的FBS中的RNA，将所有的RNA进行逆转录然后用qPCR的方法检测外泌体特征性miRNA，包括miR21、miR23a、miR34c、miR122、miR150c。

检测结果显示，阳性对照miR34c和miR150c有扩增，miR23a和miR122 Ct值均大于33，miR21未检测到Ct值。通过与阴性对照组比较，Exosome-Depleted FBS样本检测不到miRNAs。显示Exosome-Depleted FBS卓越的miRNA去除效果。另有文献报道，经适当的超离处理即可除去FBS中95%以上的miRNA。

qPCR扩增曲线及分析曲线如下所示：

C.细胞培养检测

我们分别采用Source FBS和Exosome-Depleted FBS培养293T、Beas2B和THP-1等细胞，对比两种血清的差异。

在细胞培养过程中我们发现，对于贴壁细胞293T、Beas2B，Source FBS和Exosome-Depleted FBS均能使细胞正常贴壁生长，但当细胞接种密度低时，随着培养时间延长，Exosome-Depleted FBS组稍显细胞增殖能力略显不足，以293T细胞表现较明显。实验过程中发现Beas2B细胞能在去外泌体FBS中生长良好，但细胞形态较在Source FBS中略显差异。

文献报道，Exosome-Depleted FBS存在刺激细胞生长的不足的情况，因此建议，对于贴壁细胞的培养，先使用Source FBS将细胞培养至对数生长期/单层细胞，再更换为含10%Exosome-Depleted FBS的细胞完全培养液。对于比较容易培养的细胞，也可直接使用去外泌体胎牛血清进行培养，但须注意的是在直接使用外泌体的血清进行贴壁细胞培养时，需要适当增大细胞接种密度。

实验中，我们测试了单层细胞的维持情况，正常情况下，使用含Exosome-Depleted FBS的完全培养液可使已长成单层的细胞维持正常形态至少72小时以上。

悬浮细胞THP-1的测试结果显示，Source FBS和Exosome-Depleted FBS细胞增殖趋势一致，均在同一天达到增殖高峰。当达到细胞增殖高峰时，Source FBS的细胞数量略比Exosome-Depleted FBS高，但二者并无显著差异。

且在细胞达到峰值前（下图中 Day3），Source FBS 组和Exosome-Depleted FBS组的细胞活率均在98%以上，当细胞进入衰退期以后，Exosome-Depleted FBS组显示了更高的细胞活率，说明Exosome-Depleted FBS显示了更好的细胞维持效果，其细胞维持能力优于Source FBS 组。