500ml-ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-一般化学试剂-wako富士胶片和光

本产品是ES细胞和iPS细胞培养中使用的血清代替品。血清含有分化诱导因子,会导致干细胞分化。使用本产品代替血清,可在ES和iPS细胞培养的同时,保持他们的未分化状态,达到稳定培养。

ES细胞?iPS细胞培养用血清代替品

StemSure® Serum Replacement

 

500ml-ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-一般化学试剂-wako富士胶片和光

 

 

  本产品是ES细胞和iPS细胞培养中使用的血清代替品。血清含有分化诱导因子,会导致干细胞分化。使用本产品代替血清,可在ES和iPS细胞培养的同时,保持他们的未分化状态,达到稳定培养。
  本产品不含剧毒物质,将其作为普通物质处理。
  使用本产品配制培养基培养的小鼠ES细胞,可用于制备嵌合体小鼠,并确认其种系传递。

 

 

 

 

 

◆特点•优势

 

  ● 可用于嵌合体小鼠制备,并确认其种系传递。

  ● 作为血清替代品,用于小鼠ES细胞?人IPS细胞培养。

  ● 不含剧毒物质。

 

◆案例•应用

 

1、嵌合体小鼠的制备与种系传递Update!!

 

   将组装HaloTag® cDNA的目标载体导入小鼠ES细胞,用含有StemSure®  Serum Replacement(SSR)的培养基培养。确认载体导入小鼠ES细胞后,将其注入至ICR小鼠的胚盘胞,并移植至ICR小鼠的子宫。得到的嵌合体小 鼠与C57BL/6J小鼠交配,获得F1小鼠。

 

 

(1)  嵌合体小鼠

 

  收集嵌合体小鼠的血液,用TRITC(四甲基若丹明异硫氰酸盐)对HaloTag® 蛋白质染色。发现小鼠ES细胞源的HaloTag® 的血液被染色,可确认为嵌合化。

    

      500ml-ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-一般化学试剂-wako富士胶片和光500ml-ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-一般化学试剂-wako富士胶片和光

 

 

(2) F1小鼠

 

 

  F1小鼠的血液发现HaloTag® 存在,可确认用SSR培养基培养的ES细胞嵌合小鼠能够正常存活。

 

 

500ml-ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-一般化学试剂-wako富士胶片和光 500ml-ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-一般化学试剂-wako富士胶片和光

 

 

 

2、人iPS细胞201B7的培养

 

(1) 克隆形态与ALP染色 

 

  已确认可用StemSure®Serum Replacement(SSR)培养人iPS细胞201B7株。ALP染色呈阳性。

 

500ml-ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-一般化学试剂-wako富士胶片和光

 

  <培养基组成>
   D-MEM/Ham's F-12 + 20% SSR + 2mmol/l L-Glutamine +1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 5ng/ml bFGF

 

 

(2) 未分化标记的发现

 

  使用StemSure®Serum Replacement(SSR)培养的人iPS细胞201B7株,确认各种未分化标记(Sox2, Oct3/4, SSEA-3, SSEA-4, Tra-1-81)呈阳性。

 

 

500ml-ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-一般化学试剂-wako富士胶片和光

 

 

 

3、小鼠ES细胞D3的培养

 

(1) 细胞形态与ALP染色

 

  使用StemSure®Serum Replacement(SSR)培养小鼠ES细胞D3,能观察到小鼠ES细胞群特有的光泽,ALP染色呈阳性。

 

 

500ml-ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-一般化学试剂-wako富士胶片和光 

 

 

(2) 细胞增殖曲线

 

  用不同培养基培养小鼠ES细胞D3进行14继代培养,比较细胞增殖。

  如下图所示StemSure® 系列与A公司有同等的性能。

 

500ml-ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-一般化学试剂-wako富士胶片和光

 

 

  < StemSure® 系列培养基组成>
   StemSure® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1mmol/lStemSure® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure® LIF

  (使用胶原包被的12孔板)

 

(3) 细胞群倍加数*

 

  使用不同培养基对小鼠ES细胞D3进行继代培养,检查培养天数与细胞群倍加数的关系。

  下图显示StemSure® 系列与A公司产品的细胞群倍加数相同。

 

500ml-ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-一般化学试剂-wako富士胶片和光

 

 

  *细胞群倍加数 cell population doubling level,缩写PDL,指从培养开始至现在细胞群的倍增次数。

  <培养基组成>

   StemSure® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1mmol/l StemSure® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure® LIF

  (使用胶原包被的12孔板)

 

 

(4) 未分化标记的检测

 

  使用StemSure® 系列对小鼠ES细胞D3进行5代继代培养,各种未分化标记(Nanog, Oct3/4, Sox2, SSEA-1)呈阳性。

 

500ml-ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-一般化学试剂-wako富士胶片和光

 

 

  <培养基组成>
   StemSure® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure® LIF

 

 

4、畸形瘤的形成

 

  用StemSure® 系列对小鼠ES细胞D3进行继代培养。对免疫不全小鼠的皮下注射培养后细胞。在形成皮下畸形瘤,其内部检测出神经组织(外胚叶源)、软骨组织(中胚叶源)、管腔结构纤毛上皮(内胚叶源)。

 

500ml-ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-一般化学试剂-wako富士胶片和光

 

  <培养基組成 >
   StemSure® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure® LIF

 

产品编号

产品名称

产品规格

产品等级

产品价格

197-16775

StemSure® Serum Replacement

500ml

细胞培养用