Cosmo细胞融合试剂-EX仙台病毒包膜细胞融合试剂
GenomONETM-CF含有仙台病毒包膜和专用缓冲液,可促使细胞融合。适用于贴壁或者悬浮状态的任何细胞。仅仅需要30分钟就可完成融合细胞及制造混合动力的操作。
Cosmo细胞融合试剂-EX仙台病毒包膜细胞融合试剂
GenomONETM-CF EX 仙台病毒包膜细胞融合试剂
GenomONETM-CF含有仙台病毒包膜和专用缓冲液,可促使细胞融合。适用于贴壁或者悬浮状态的任何细胞。仅仅需要30分钟就可完成融合细胞及制造混合动力的操作。
◆用途
●肿瘤疫苗·癌症免疫研究
癌细胞和树突细胞融合等
●再生医疗·细胞治疗研究
脏器来源细胞和干细胞融合等
●单克隆抗体的制备
抗原B细胞和髓过氧化物酶细胞融合
●分生·分化·育种研究
对脱核未受精卵的核移植(核置换)
●其他
PEG&电融合的使用介绍
◆HVJ Envelope(HVJ-E):
HVJ包膜(HVJ-E)是完全灭活和纯化仙台病毒(HVJ*),即只留下细胞膜融合能力的衣壳蛋白包膜。仙台病毒的HN蛋白可与细胞膜外的唾液酸受体结合,通过F蛋白的作用,引起细胞膜融合。在HVJ-E中,仙台病毒的基因组RNA已经完全失活,在人类和实验动物体内不存在感染或增殖。因而不需要特殊的操作和设备,它可以安全地在普通的实验室使用。
*HVJ:日本仙台病毒
◆HVJ-E细胞融合原理
在低温(0 – 8℃)条件下,每一个细胞与数百个以上的HVJ – E接触,HVJ – E与细胞膜上的唾液酸受体结合,通过细胞表面吸附(步骤1),细胞通过HVJ-E相互连接(步骤2),形成细胞彼此聚集的状态。当该细胞/ HVJ-E的复合物加热到37℃时,细胞膜干扰就会进一步扩大,细胞膜内膜结构也暂时改变。这种变化是短暂的,随后会立即返回到正常结构,但是在这个期间,细胞膜利用强疏水性结合力进行相互融合(步骤3)。
◆应用方法
悬浮法
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电镀法
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◆悬浮细胞融合案例
同种细胞融合
异种细胞融合
荧光标记的红(* 1)细胞和绿色荧光标记(* 2)细胞(每1.0х105个)在融合缓冲液50μL混合后,加入HVJ-E冰敷5分钟,随后37℃下反应15分钟后,融合细胞(黄色)进行了观察。
◆黏着态和悬浮态细胞融合案例
在粘合状态BHK-21(红)和在浮动状态(绿色)的P19细胞的融合
胶粘状态的HeLa S3(红)在浮动状态(绿色)的P19细胞的融合
荧光标记的(* 1)中的红,附着的细胞在12孔平板,绿色荧光标记(* 2)中,添加预先准备的HVJ-E,来处理漂浮细胞1×105个的悬浮液(融合缓冲污染),并在室温下离心(1000转),每个板5分钟。随后孵育37℃15分钟后,更换增殖用的培养基继续细胞培养。观察3个小时后的融合细胞(黄色)。
◆和PEG法的比较
红色荧光标志(* 1)的ratMSC(骨髓由来老鼠间叶系细胞)和绿色荧光标识的老鼠原代培养心肌细胞2×105个融合缓冲液50μL中混合后,添加HVJ – E,冰浴5分钟,然后37℃孵育反应15分钟,观察融合细胞(黄色)。1 – 2日培养后,观察到粘着的融合细胞。在PEG法中融合紧接之后细胞毒性强烈,融合细胞的数量很少。
◆安全性说明
HVJ-E失活的确认(确认无感染性病毒的存在)
1、 |
细胞增值实验(荧光灶单元(FFU)法)
处理LLC-MK2细胞,一到两天后,病毒生长性的HVJ融合蛋白F抗体通过荧光抗体法测定,已证实未检测到病毒蛋白。<制造阶段实验>
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2、 |
受精卵生长试验(血凝单位测定)
处理受精卵,3天后的病毒增殖,包括在HVJ表面的HN蛋白的红血细胞聚合活性(HAU)测量作为指标,已经证实,没有看到病毒的生长。<制造阶段实验>
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3、 |
小鼠感染性研究
鼻腔给药小鼠和未处理小鼠(SIX周)在相同笼中饲养,通过测定血清中的抗HVJ抗体滴度进行了个体之间感染性的检测。其结果是,在非给药的情况下未观察到抗体滴度增加,表明未感染HVJ-E。
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4、 |
动物个体的遗传基因导入实验
小鼠、大鼠等实验动物的各种药物实验(肺、气管、肝和静脉等)。已证实完全没有病毒感染或是可疑的事例。
SUETSUGU A, MATSUMOTO T, HASEGAWA K, et al. Color-coded Live Imaging of Heterokaryon Formation and Nuclear Fusion of Hybridizing Cancer Cells[J]. Anticancer Research, 2016, 36(8): 3827-3831. Abstract |
Honma R, Fujii Y, Ogasawara S, et al. Critical epitope of anti-rabbit podoplanin monoclonal antibodies for immunohistochemical analysis[J]. Monoclonal antibodies in immunodiagnosis and immunotherapy, 2016, 35(2): 65-72. Abstract |
Honma R, Fujii Y, Ogasawara S, et al. Establishment of Novel Monoclonal Antibody PMab-32 Against Rabbit Podoplanin[J]. Monoclonal antibodies in immunodiagnosis and immunotherapy, 2016, 35(1): 41-47. Abstract |
Ninomiya K, Yamashita T, Tanabe Y, et al. Targeted and ultrasound-triggered cancer cell injury using perfluorocarbon emulsion-loaded liposomes endowed with cancer cell-targeting and fusogenic capabilities[J]. Ultrasonics sonochemistry, 2016, 28: 54-61. Abstract |
Oki H, Ogasawara S, Kaneko M K, et al. Characterization of monoclonal antibody LpMab-3 recognizing sialylated glycopeptide of podoplanin[J]. Monoclonal antibodies in immunodiagnosis and immunotherapy, 2015, 34(1): 44-50. Abstract |
Quijada P, Salunga H T, Hariharan N, et al. Cardiac stem cell hybrids enhance myocardial repair[J]. Circulation research, 2015, 117(8): 695-706. Abstract |
Kaneko M K, Oki H, Hozumi Y, et al. Monoclonal antibody LpMab-9 recognizes O-glycosylated N-terminus of human podoplanin[J]. Monoclonal antibodies in immunodiagnosis and immunotherapy, 2015, 34(5): 310-317. Abstract |
Hino T, Tateno H. Developmental potential of 2n/3n mixoploid mouse embryos produced by fusion of individual second polar bodies and blastomeres of 2-cell embryos[J]. Reproduction, Fertility and Development, 2015. Abstract |
Takahashi Y, Tomotsune D, Takizawa S, et al. New model for cardiomyocyte sheet transplantation using a virus-cell fusion technique[J]. World journal of stem cells, 2015, 7(5): 883. Abstract |
产品编号 |
产品名称 |
产品规格 |
产品等级 |
产品价格 |
ISK-CF-001-EX |
GenomONE™ -CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents GenomONETM-CF EX 仙台病毒包膜(1只装)细胞融合试剂 |
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