利用Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量检测氨基酸饮料的氨基酸

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	产品价格

产品特性
相关资料
Q&A
参考文献

利用Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量检测氨基酸饮料的氨基酸 利用Wakopak^®Ultra APDSTAG^®定量

检测氨基酸饮料的氨基酸

和光纯药工业株式会社试剂化学实验室須藤　勇紀

◆前言

　　自从天冬酰胺在1806年从芦笋汁中分离成功以来，人们开始发现氨基酸，并将其大致分为四类，即作为营养物质的利用，作为味道成分的利用，生理作用的利用，反应性的利用，这些功能在我们生活中是不可缺少的 ^1）。另外，在动物体内无法合成的氨基酸既是动物的必需氨基酸，也是很重要的食物营养素。

　　在日本实施的1991年特定保健食品体系、2002年保健功能食品体系、2015年功能性食品体系过程中，也是期待着将氨基酸作为保健品用于国民自我治疗药物的实践中 ^2,3）。功能性标示食品制度因其呈报制度更便于新企业参与。2017年3月特定保健用食品的数量为1,127件，功能性标示食品从以往的815件正在急剧增加中。从而可预计保健食品市场将迅速扩大。氨基酸作为营养素的功能已被广泛认可，以饮料，健康饮料，果冻等多种形态的氨基酸的食品流通于市场中 ^1），未来也将继续推出更多含有氨基酸的新型食品。

◆3-氨基吡啶-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯（APDS）衍生化

　　高效液相色谱法（HPLC）中的氨基酸分析衍生化技术是很久以前便存在的，因此市面上也存在许多种类的衍生剂，其中包括茚三酮和邻苯二甲醛。本次介绍的APDS氨基酸衍生化技术是一种具有高疏水性，且因其高电离效率更有利于反相LC/MS（/MS）的方法。

　　该方法不仅用于味之素株式会社的“Amino index^®癌症风险筛选”（AICS）^7）。在食品分析中也用于氨基酸分析专用装备（UF-Amino Station）的分析案例 ^8）。

　　Wakopak^®Ultra APDSTAG^®是一种专用分析柱，可利用LC / MS / MS仪器对APDS-氨基酸衍生物进行分离分析。本次我们介绍的是使用该柱分析市售氨基酸饮料中的氨基酸种类。

利用Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量检测氨基酸饮料的氨基酸

◆实验方法和结果分析

　　样品前处理和衍生化的流程如图1所示，LC / MS / MS条件如表1所示。定量采用内标法进行。在这次实验的饮料中，据材料记载氨基酸种类含有甘氨酸（Gly），丙氨酸（Ala），缬氨酸（Val），亮氨酸（Leu），异亮氨酸（Ile）和精氨酸（Arg）这六种种类，但市售饮料中都不含表1的No.13〜20的氨基酸类。图2显示的是市售饮料中的6种氨基酸的MRM色谱分析图。接下来，将氨基酸标准品加入到获得该色谱的样品中，并进行回收实验。图3显示的是添加标准品后饮料的MRM色谱图，而图4则是加标回收实验的结果显示图。回收率高达99-103％。

　　根据这次研究的结果显示，使用Wakopak^®Ultra APDS TAG^®进行APDS衍生化的氨基酸定量检测是有效的。虽然这次推出的结果仅限于饮料，但对于分析其他食品和培养液等样品也是有用的，欢迎采购此产品用于定量分析氨基酸。

表１．LC/MS/MS条件

设备	Prominence LC-20A XR（岛津公司）
柱	Wakopak^® Ultra APDS TAG® φ2.1×100 mm（W）
防护过滤器	SunShell RP防护过滤器（Cromanic Technologies）
流动相A	APDS TAG^®洗脱液
流动相B	60％乙腈
梯度条件	0min（. A：B=94：6）→0.05min.（. 92：8）→1.70min.（92：8） →1.71min.（88：12）→4.95min.（70：30）→5.95min.（40：60）→5.96min.（5：95）→6.70min.（5：95）→6.71min.（94：6）→12min.（94：6）
流量	0.3 mL/min.
柱温	40 ℃
注射量	1μL

设备	LCMS-8030 Plus（岛津公司）
电离	ESI positive
测量模式	MRM
DL温度	250 ℃
雾化器气体流量	1.5 L/min.
加热块温度	250 ℃
干燥气体流量	10 L/min.

No.	组件名称（简称）	分子量	监测因子（m / z）
No.	组件名称（简称）	分子量	前体	制品
1	甘氨酸（Gly）	75.1	196.1	121.0
2	甘氨酸-13C2，15N（Gly-IS）	78.1	199.1	121.1
3	丙氨酸（Ala）	89.1	210.1	121.0
4	丙氨酸-13C3（Ala-IS）	92.1	213.1	121.1
5	缬氨酸（Val）	117.2	238.1	121.0
6	缬氨酸-13C5, 15N（Val-IS）	123.1	244.1	121.1
7	亮氨酸（Leu）	131.2	252.1	121.0
8	异亮氨酸（Ile）	131.2	252.1	121.0
9	亮氨酸-5,5,5-d3（Leu-IS）	134.2	255.1	121.1
10	异亮氨酸-13C6,15N（Ile-IS）	138.1	259.1	121.1
11	精氨酸（精氨酸）	174.2	295.1	175.1
12	精氨酸-15N4（Arg-IS）	178.2	299.1	179.1
13	肌氨酸（Sar）	89.1	210.0	121.0
14	羟脯氨酸（Hypro）	131.1	252.1	121.0
15	天冬酰胺（Asn）	132.1	253.1	121.0
16	天冬氨酸（Asp）	133.1	254.1	121.0
17	谷氨酰胺（Gln）	146.1	267.1	121.0
18	谷氨酸（Glu）	147.1	268.1	121.0
19	α-氨基己二酸（α-AAA）	161.2	282.1	121.0
20	瓜氨酸（Cit）	175.2	296.3	121.0

图2.市售饮料中6种氨基酸成分的MRM色谱图

图3.添加标准品后饮料的MRM色谱图

图4.加标回收实验的结果显示图

<致谢>感谢味之素股份有限公司的每一位同仁对本产品的合作。

Wako Pack^®Ultra APDS Tag^®通用LC / MS可以实现高灵敏度和高速氨基酸分析。

◆产品列表

产品编号	产品名称	包装
235-63973	Wakopak^® Ultra APDS TAG^® φ2.1mm × 100mm（ W）	1支

◆相关产品

产品编号	产品名称	标准/制造商	规格
014-23841	Amino Acid Analysis Reagent (for LC/MS) (AminoTag(R)) 氨基酸分析试剂（用于LC/MS）	用于氨基酸自动分析	100mg
011-14463	Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2 氨基酸混合标准溶液, AN-2型	用于氨基酸自动分析	1mL×5A 5mL
015-14461		用于氨基酸自动分析	1mL×5A 5mL
012-08643	Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B 氨基酸混合标准溶液, B型	用于氨基酸自动分析	1mL×5A 5mL
016-08641		用于氨基酸自动分析	1mL×5A 5mL
019-08393	Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H 氨基酸混合标准溶液, H型	用于氨基酸自动分析	1mL×5A 5mL
013-08391		用于氨基酸自动分析	1mL×5A 5mL
293-73701	APDS TAG^® Wako Amino Acids Internal Standard Mixture Solution	用于氨基酸自动分析	1套
010-23061	APDS Tag Wako Eluent APDS标签洗提液	用于氨基酸自动分析	1L
019-23151	APDS Tag Wako Borate Buffer APDS标签硼酸盐缓冲液	用于氨基酸自动分析	1L
380-04131	SunShell RP Guard Filter Starter kit （a holder, a cartridge, a tubing）	Cromic技术	1套

[参考文献]

[1]　味の素株式会社編：「アミノ酸ハンドブック」（工業調査会）（2003）.

[2]　大澤俊彦：化学と生物，44 （6），406 （2006）.

[3]　和田他：分析化学，65 （6），301 （2016）.

[4]　湯田直樹：健康・栄養食品研究，16 （1），1 （2017）.

[5]　特許第 4453363 号．

[6]　宮野博：和光純薬時報，79 （1），2 （2011）.

[7]　今泉明：化学と生物，53 （3），192 （2015）.

[8]　渡邊他：島津評論，69 （1・2），47 （2012）.

Amresco官网

Biolabs（NEB)酶 |Sigma-aldrich VWR 代理商Amresco中国代理商

利用Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量检测氨基酸饮料的氨基酸