上海金畔生物科技有限公司生产的BeyoRT™ III M-MLV反转录酶，即BeyoRT™ III M-MLV reverse transcriptase，是一种经过改造和优化的快速高效(短至10min完成反转录)、热稳定(高达55℃)、高精确度、产物超长(长达12kb)的反转录酶，具有正常的依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶活性，能够以RNA或DNA为模板，在引物存在的情况下进行互补DNA链的合成，即可以进行cDNA(complementary DNA)的第一链合成。同时本反转录酶保留了RNase H活性，能选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA，有利于后续cDNA第二链的合成。
      本产品是最常用的优质反转录酶之一，广泛用于获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成，后续可以用于PCR、real-time PCR也称定量PCR(quantitative PCR, qPCR)、cDNA的第二链合成以及cDNA文库的构建，尤其是逆转录所得目的基因的克隆等。BeyoRT™ III M-MLV反转录酶还可以通过反转录用于DNA探针的荧光、生物素、地高辛或同位素标记等，也可以通过引物延伸(primer extension)来分析和研究RNA。
      M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus)，也称MMLV或M-MuLV；反转录酶(reverse transcriptase)也称逆转录酶或RT酶。
      本产品反转录快速高效，普通反转录仅需10min。实测小于3kb的片段，42℃反转录10min即可完成，与反转录60min相比无显著差别。大于3kb的片段，特别是大于6kb的片段，推荐反转录60min，以获得最佳的反转录效果。
      本产品反转录产物长度超长。本产品经测试可以轻松完成长度为8 kb以下基因的反转录(参考图1)，反转录的最大长度可以达到12 kb。

      图1. 使用BeyoRT™ III M-MLV反转录酶反转录总RNA后，对于不同长度的cDNA进行PCR扩增后的电泳效果图。图中可见0.2-12kb的cDNA可以非常高效地被反转录。

      本产品热稳定性好，反转录效率高。本产品最适反应温度为42℃，当温度达到50℃时仍具有很高活性，对于长度较短的cDNA反转录，温度达到55℃时也可获得较高产量的cDNA。高温反转录对于高GC含量RNA的反转录，能有效减少二级结构，提升反转录效率。本产品反转录速度快，6kb以下的cDNA反转录只需0.5h即可完成，3kb以下的cDNA反转录10min即可完成(参考图2)。

      图2. BeyoRT™ III M-MLV反转录酶在不同温度反应不同时间的反转录效果。从HEK293T细胞抽提获得的总RNA 2µg，在20μl反转录体系中按照图中所示温度、时间进行反转录。反转录后取1μl反转录产物进行目的基因(2.6kb的YWHAZ基因和6.0kb的ADAR1基因)的PCR扩增和电泳。

      本产品性价比高。BeyoRT™ III M-MLV反转录酶是一种大肠杆菌重组高表达的反转录酶，由于其表达量非常高，大大提高了本产品的性价比。本反转录酶为表达含有从Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase基因克隆的pol基因，并进行了多个突变优化以提高其热稳定性、反转录效率、反转录长度和表达量。
      酶活性定义：One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTTP into acid-precipitable material in 10 min at 37℃ using poly(A)•oligo(dT)_12-18 as template-primer。反应体系为 50 mM Tris-HCl(pH 8.3), 75 mM KCl, 3 mM MgCl₂, 10 mM DTT, 0.5mM [³H]-dTTP and 0.4 mM polyA•oligo(dT)_12-18。
      纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶，可以满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。
      酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.01%(v/v)
NP-40 and 50%(v/v) glycerol。
      失活或抑制：80℃孵育10分钟可以导致BeyoRT™ III M-MLV反转录酶失活；EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对BeyoRT™ III M-MLV反转录酶有抑制作用。
      本产品中M-MLV反转录酶的浓度为200U/µl，用于体积为20μl的反转录体系时，本试剂盒的不同包装足够分别进行50次、250次和1000次反转录反应。
包装清单：

保存条件：
      -20℃保存。
注意事项： 
      对于GC含量比较高的RNA的反转录，产品的使用说明中给予了特别说明，请予以关注。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

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