日度归档:2024年6月25日
L-甲硫氨酸(蛋氨酸),L-Methionine,CAS:63-68-3,货号:M0010-25g
L-甲硫氨酸(蛋氨酸),L-Methionine,CAS:63-68-3,货号:M0010-25g
市场价: | ¥70.0 | ||
价格: |
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品牌: | solarbio | ||
规格: | 25g |
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参考文献
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DNase I(D7076)
DNase I |
产品编号: D7076 |
产品包装: 1000U |
产品价格: 473.00元 |
产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
D7076 | DNase I | 1000U | 473.00元 |
DNase I,即Deoxyribonuclease I,中文名称为脱氧核糖核酸酶I,是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物,5’端为磷酸基团,3’端为羟基。
DNase I活性依赖于钙离子,并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下,DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,DNase I可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端。
特点:不含RNase(RNase free),可以用于各种RNA样品的处理。提供了用于DNase I失活所需的EDTA。
用途:制备不含DNA的RNA样品;RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染;体外T7, T3, SP6等RNA Polymerases催化的RNA转录后去除DNA模板; DNase I footprinting研究DNA-蛋白质相互作用;缺口平移(nick translatioin);产生DNA随机片段文库;细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。
来源:从牛胰腺纯化得到。
分子量:约32kDa(单体)。
活性定义:37℃10分钟内,将能够完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件:40mM Tris-HCl(pH8.0),10mM MgSO4,1mM CaCl2,1μg of pBR322 DNA。
纯度:不含其它DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶。
酶储存溶液:50mM Tris-acetate(pH7.5),10mM CaCl2,50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X):100mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃),25mM MgCl2,1mM CaCl2。
失活或抑制:加入EDTA至终浓度为2.5mM后,65℃加热10分钟可使DNase I失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂,达到毫摩尔/升浓度的锌离子,0.1%的SDS,DTT、巯基乙醇等还原剂,50-100mM以上盐浓度均对DNase I有显著抑制作用。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7076-1 | DNase I,RNase-free(50U/μl) | 1000U |
D7076-2 | Reaction Buffer(10X) | 1ml |
D7076-3 | EDTA(25mM) | 1ml |
- | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
如需对酶进行稀释,可以用酶储存液(50mM Tris-acetate(pH 7.5),10mM CaCl2,50%(v/v)glycerol)进行稀释。
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明
使用说明:
1. RT-PCR反应前RNA样品中DNA的去除:
a. DNA模板限制性核酸内切酶作用后线性化。酚/氯仿和氯仿/异丙醇提取DNA,用乙醇沉淀后,溶于适量的无菌去离子水中。
b. 向一无RNA酶的EP管中依次加入下列试剂:
RNA | 1μg |
Reaction Buffer (10X) | 1μl |
补充经DEPC处理的去离子水 | 至9μl |
DNase I(1U/μl) | 1μl |
注意:如需处理较大量的RNA样品,可以按照比例放大上述反应体系。如果能在上述反应体系中加入适量Ribonuclease inhibitor以防止RNA降解则更佳。
c. 37℃孵育30分钟。
d. 向上述反应体系中加入1μl 25mM EDTA,65℃孵育10分钟以失活DNase I。注意:在没有鏊合剂如EDTA等存在情况下加热,RNA可被水解。
e. 上述加热处理过的RNA样品即可直接用于处理好的RNA可用作RT-PCR反应的模板。
2. 体外RNA反转录后模板DNA的去除:
a. 在每含有0.5μg模板DNA的反转录反应体系中加入1U DNase I。注意:在某些情况下,模板DNA完全消化所需的DNase I的量需通过实验进行摸索。
b. 37℃ 孵育15分钟。
c. 酚/氯仿抽提失活DNase I。
3. 缺口平移进行DNA标记:
a. 参考下表格设置反应体系:
Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I | 2.5μl |
3 dNTP Mixture (1mM each, without the labeled dNTP) * | 1.25μl |
[α-32P]-dNTP, ~110TBq/mmol (3000Ci/mmol) | 1.85-3.7MBq (50-100μCi) |
DNase I (freshly diluted to 0.002U/μl)** | 1μl |
DNA Polymerase I, E.coli | 0. 5-1.5μl (5-15U) |
Template DNA | 0.25μg |
补充无核酸酶去离子水 | 至25μl |
* 3 dNTP Mixture(1mM each, without the labeled dNTP):分别取除已经标记的dNTP外的3种dNTP(100mM)各1μl加入到97μl 的无核酸酶的去离子水中混匀即可。例如标记的为dATP,则需混合dTTP、dCTP和dGTP三种dNTP至每种的最终浓度为1mM。配制好的dNTP可存放于-20℃以备后续使用。
** DNase I可以用1X Reaction Buffer for DNA Polymerase I进行稀释。
Reaction Buffer(10X)for DNA Polymerase I:500mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃),100mM MgCl2,10mM DTT。
b. 立即15℃孵育15~60分钟。
c. 上述反应体系中加入1μl of 0.5M EDTA(pH 8.0)终止反应。
d. 从中取出少量例如1μl检测标记效率。通常标记效率至少可以达到108cpm/μg DNA。
e. 可用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60去除[α-32P]-dNTP,以纯化获得标记的DNA。
4. 其它用途可以参考上述用途进行。
产品图片
得加利tacmina涂层流体供应系统-日本得加利
产地类别 | 进口 |
---|
可以以恒定流量输送大量化学溶液
转移高粘度浆液
易于拆卸,清洁和组装卫生管道
流量监控功能
防爆规格
得加利tacmina涂层流体供应系统
- 可以以恒定流量输送大量化学溶液
- 转移高粘度浆液
- 易于拆卸,清洁和组装卫生管道
- 流量监控功能
- 防爆规格
应用实例
- 涂层溶液在光学薄膜制造过程中连续恒定供应
- 液晶显示器制造过程中的涂布液供应
- 连续供应各种涂料液体
流程图
规格能力
以下规格是一个例子。请联系我们了解详情。
坦克容量 | 50L + 20L |
---|---|
泵输送量 | ~200 mL / min |
泵输送压力 | ~1.0MPa |
重量 | 约290公斤 |
尺寸(mm) | W1200×H1650×D800 |
- 可以以恒定流量输送大量化学溶液
- 转移高粘度浆液
- 易于拆卸,清洁和组装卫生管道
- 流量监控功能
- 防爆规格
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- 防爆规格
- 得加利tacmina涂层流体供应系统得加利tacmina涂层流体供应系统
Caspase 6 活性检测试剂盒(C1135)
Caspase 6 活性检测试剂盒 |
产品编号: C1135 |
产品包装: 20次 |
产品价格: 546.00元 |
产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
C1135 | Caspase 6 活性检测试剂盒 | 20次 | 546.00元 |
Caspase 6 活性检测试剂盒(Caspase 6 Activity Assay Kit)是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中caspase 6酶活性或纯化的caspase 6酶活性的试剂盒。
Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 6也称Mch-2,有时被写作caspase-6或caspase 6,最初从人的Jurkat细胞中被发现。Caspase 6的前体被granzyme B剪切后可以形成活化的caspase 6二聚体,而活化的caspase 6被发现可以诱导细胞凋亡。Caspase 6可以剪切PARP和keratin-18,也可以剪切细胞核核被膜上的关键组成蛋白Lamin A。Caspase家族中仅caspase 6可以剪切Lamin A。Caspase 6对于Lamin A的识别位点是VEID。本试剂盒利用了caspase 6对于VEID识别的特异性,设计了相应的caspase 6特异的显色底物Ac-VEID-pNA。
本Caspase 6活性检测试剂盒是基于caspase 6可以催化底物Ac-VEID-pNA(acetyl-Val-Glu-Ilel-Asp p-nitroanilide)产生黄色的pNA(p-nitroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测caspase 6的活性。pNA在405nm附近有强吸收。
试剂盒中提供了caspase 6催化产生的黄色产物pNA,可以作为定量caspase 6酶活性的标准品。
本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测时,除标准曲线外可以检测20个样品。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
C1135-1 | 裂解液 | 8ml |
C1135-2 | 检测缓冲液 | 8ml |
C1135-3 | Ac-VEID-pNA(2mM) | 200μl |
C1135-4 | pNA(10mM) | 200μl |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存,Ac-VEID-pNA和pNA需避光保存。
注意事项:
须自备可以测定A405或A400的酶标仪或容量不超过100μl的分光光度检测杯及相应分光光度计。优先考虑测定A405,如有困难可以测定A400。
Ac-VEID-pNA需尽量避免反复冻融,请注意适当分装。
测定蛋白浓度需Bradford蛋白浓度测定试剂盒(P0006),可向上海金畔生物科技有限公司订购。建议样品用水稀释1倍后再用Bradford法测定蛋白浓度,以降低DTT对蛋白浓度测定的干扰。
pNA(中文名为4-硝基苯胺)对人体有毒,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。pNA(10mM)在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
本试剂盒的裂解液可以和上海金畔生物科技有限公司生产的其它caspase活性检测试剂盒的裂解液通用,即本试剂盒裂解液制备的蛋白样品可以用于上海金畔生物科技有限公司其它caspase活性检测试剂盒的检测。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明
使用说明: 3.样品的收集: |
空白对照 | 样品 | |
检测缓冲液 | 40μl | 40μl |
待测样品 | 0μl | 50μl |
裂解液 | 50μl | 0μl |
Ac-VEID-pNA(2mM) | 10μl | 10μl |
总体积 | 100μl | 100μl |
注意:在设置反应体系时先加检测缓冲液,再加待测样品,适当混匀,注意避免在混匀时产生气泡。随后再加入10μl Ac-VEID-pNA(2mM)。
c.加入Ac-VEID-pNA(2mM)后混匀,注意避免在混匀时产生气泡。37℃孵育60-120分钟。发现颜色变化比较明显时即可测定A405。如果颜色变化不明显,可以适当延长孵育时间,甚至可以孵育过夜。
d.样品的A405扣除空白对照的A405,即为样品中caspase 6催化产生的pNA产生的吸光度。通过同步骤1中获得的标准曲线的对比就可以计算出样品中催化产生了多少量的pNA。
e.参考Chemicon公司的caspase 6酶活力单位的定义:One unit is the amount of enzyme that will cleave 1.0nmol of the colorimetric substrate Ac-VEID-pNA per hour at 37℃ under saturated substrate concentrations。即一个酶活力单位定义为当底物饱和时,在37℃一个小时内可以剪切1nmol Ac-VEID-pNA产生1nmol pNA的caspase 6的酶量。这样就可以计算出样品中含有多少个酶活力单位的caspase 6。说明:在本试剂盒的检测体系中,底物的起始浓度为0.2mM,此时底物是饱和的,对于许多样品而言在37℃孵育2个小时以内底物都是饱和的;对于样 品中caspase 6酶活力特别高的情况,须用裂解液适当稀释样品后再进行测定。
f.用Bradford法检测待测样品中的蛋白浓度(由于裂解液中含有较高浓度的DTT,不适合采用BCA法进行蛋白浓度测定)。这样就可以计算出一个样品单位重量蛋白中所含的caspase 6的酶活力单位。
常见问题:
1.测定出的A405过低:
A.样品中蛋白含量太低,裂解样品时需设法使样品中的蛋白浓度至少达到1-3mg/ml。
B.样品中激活的caspase水平很低。首先确认凋亡现象是否明显,如果凋亡比较明显并且确认该caspase是可以被激活的,可以适当调节诱导细胞凋亡的时间,希望能找到一个caspase激活比较强的时间点,这样就可以检测出该caspase的激活。可以作一时间曲线,例如诱导凋亡0、2、4、8、16和24小时,或0、1、2、4、8和16小时,或0、1、2、4、6和8小时等。具体的诱导凋亡时间需根据具体情况而定。
2.测定出的A405过高或者样品量不足:
测定出来的A405读数过高时,可以参考下表的反应体系适当减少样品的用量;样品量不足时也可以参考下表减少样品的用量。
空白对照 | 样品 | |
检测缓冲液 | 40μl | 40μl |
待测样品 | 0μl | xμl |
裂解液 | 50μl | (50-x)μl |
Ac-VEID-pNA(2mM) | 10μl | 10μl |
总体积 | 100μl | 100μl |
说明:其中x不超过50,其余检测方法同上面的使用说明所述。
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