线性聚乙烯亚胺PEI MW40000说明书
产品描述
Jinpan 线性聚乙烯亚胺PEI MW40000 转染试剂系列是基于聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)的产品,因其较高的转染效果,已广泛应用于AAV,LV和重组蛋白等工业化生产。
聚乙烯亚胺是一种具有较高阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔两个碳原子,即每第三个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”体(proton sponge),因此,非常容易结合带负电荷的核酸分子,形成带正电荷的复合物颗粒,该颗粒与细胞表面阴离子结合,很容易通过内吞作用进入细胞;并且可抵御溶酶体的降解作用,从而提高核酸分子的表达水平。
相关货号:
货号 | 规格 | 价格 |
78PEI40000-100mg | 100mg | ¥700.00 |
78PEI40000-1g | 1g | ¥3,000.00 |
78PEI40000-5g | 5g | ¥11,000.00 |
基本信息
CAS 49553-93-7
分子式 (C2H5N)n . xHCl
分子量 40,000 (~22,000 free base)
熔点 73-75℃
溶解性 溶于冷水
不溶于 常用有机溶剂(乙醇、丙酮、四氢呋喃)
形式 白色固体粉末
生物毒性 未知
安全防护 手套,护目镜,口罩
存储 粉末至少可以保存一年, PEI内含自由氨基,建议开封后4℃干燥保存,减缓氧化过程。
运输 常温运输
特点 大量实验数据反馈,细胞通用性好,有非常好的转染效果,尤其对293,CHO细胞系有特别显著的转染效果。
配置方法
转染操作流程:(贴壁细胞转染方法)
1. 接种细胞: 转染前一天,用胶原酶(Jinpan Cat#78CL10002)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔加入的细胞量参考下图表1,一般18-24小时(sf9细胞为3-4小时)后转染。转染时细胞汇合度应至少达到 70~80%以上。转染前更换为含5%血清的生长培养基。
2. 准备 DNA-PEI 复合物: DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。用 Opti-MEM ITM或其他适合的无血清培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。 (稀释PEI和DNA的体积为培养体积的1/10-1/20, DNA浓度为1ug/ml)
3. 转染细胞: 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。转染4-6小时(sf9细胞为2小时 )后,更换为生长培养基。
4. 孵育细胞和分析结果: 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后最快 7 h 即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合的检测时间。
5. 转染 24 h 后,将细胞传代至新鲜的生长培养基中(将细胞稀释 10 倍 以上),在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可 筛选到耐药性克隆,在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。
转染操作流程:(悬浮细胞转染方法)
1. 转染前准备:悬浮细胞传代接种于适量含悬浮细胞生长培养基中,合适条件下培养。根据培养瓶大小调整细胞密度(例100mL培养瓶,1X10 6 cells/mL),然后旋紧瓶口放入摇床继续培养,2~4小时后可以进行转染。
2. 准备 DNA-PEI 复合物:DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他适合的无血清培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。
3. 转染细胞:将PEI-DNA转染复合物逐滴加入到细胞培养液中,摇匀后旋紧瓶口放回摇床合适培养条件下培养至可以分析检测。
4. 孵育细胞和分析结果:转染后一般24-72h即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合的检测时间。
5. 如果要获得更多的蛋白产量,有文献表明转染后24小时,可以适当稀释细胞,稀释比例参考范围(1:2—1:5)之间,可以增加蛋白产量,稀释效应与最佳稀释比率应根据经验确定。
产品背景
Jinpan 生产的78Bio PEI是一种优化的线性阳离子聚合物转染试剂,分子量分别为 25000 和 40000,78BioPEI40000 相比 25000 转染效率高,但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表达系统中,相比于市面上的脂质体 78BioPEI 都表现出高的蛋白表达量(无 论是 96 孔板还是 100L 的细胞反应器),以及更小的细胞毒性、更高的转染效和更高的可 重复性,并且十分经济的高性价比转染试剂。产品具有以下特点:
1.转染效率高,细胞毒性低; 蛋白表达量高;
2.节约成本:Jinpan 78 PEI转染试剂 ,进口品质,亲民价格,至少能够降 40% 的转染试剂总成本;
3.适用于 HEK293 等真核细胞的转染;
4.适用于贴壁细胞和悬浮细胞的转染;
5.适用于有血清和无血清的转染条件;
6. 无机试剂,无动物源成分;
7. 产品稳定,质控严格;
8. 工艺流程适用范围广,容易优化 适合小规模培养板,培养瓶到大规模的生物反应器。
产品反馈
注意事项
1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品主要用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
3.加热或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。当然酸可能不用加那么多,详细用量可试加一点 ,搅拌看看,足够溶解就行,不一定需要加到 pH 那么低。
4.一定要溶解充分,溶解不充分会影响后续的转染效率.
5.冷冻后可能会影响其后续转染效果。
特别提醒:初次使用 78PEI 进行不同基因转染时应先做预试,优化出适合自己实验的, 最佳 PEI 和 DNA 的比例,通常筛选范围在 1:1 到 5:1 之间,如果之前用过Polysciences品牌的 PEI,用 78BioPEI 时应适当降低使用浓度。
线性聚乙烯亚胺PEI MW40000说明书
产品描述:
Jinpan 线性聚乙烯亚胺PEI MW25000 转染试剂系列是基于聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)的产品,因其较高的转染效果,已广泛应用于AAV,LV和重组蛋白等工业化生产。
聚乙烯亚胺是一种具有较高阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔两个碳原子,即每第三个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”体(proton sponge),因此,非常容易结合带负电荷的核酸分子,形成带正电荷的复合物颗粒,该颗粒与细胞表面阴离子结合,很容易通过内吞作用进入细胞;并且可抵御溶酶体的降解作用,从而提高核酸分子的表达水平。
基本信息:
CAS: 9002-98-6
分子式: (CH2CH2NH)n
分子量: 25,000
熔点: 73-75℃
溶解性: 溶于热水,低pH值的冷水,甲醇和乙醇;
形式: 白色固体
生物毒性: 未知
安全防护 手套及口罩
存储 PEI 内含自由氨基,建议开封后 4℃干燥保存,减缓氧化过程。
效期:3年
运输: 常温
特点:大量实验数据反馈,细胞通用性好,有非常好的转染效果,尤其对293,CHO细胞系有特别显著的转染效果。
配置方法:
转染操作流程:(贴壁细胞转染方法)
1. 接种细胞: 转染前一天,用胶原酶(Jinpan Cat#78CL10002)消化细 胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置 入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。
2. 准备 DNA-PEI 复合物: DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升 至室温。依据表 1 所示,用 Opti-MEM ITM或其他适合的无蛋白培 养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线 性 PEI 转染试剂(这个需要客户自行摸索配比,每一批转染试剂和每一批 DNA 比例可 能会稍有不同)。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管,一边将稀释的线性 PEI 转染 试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI 复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。
3. 转染细胞: 直接向每个孔中加入 DNA-PEI 复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在 无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴 DNA-PEI 复合 物。转染 3 h 后,添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。
4. 孵育细胞和分析结果: 在 CO2 培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染 后最快 7 h 即可检测到转入基因的表达。
5. 转染 24 h 后,将细胞传代至新鲜的生长培养基中(将细胞稀释 10 倍 以上),在 CO2 培养箱中 37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可 筛选到耐药性克隆,在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。
转染操作流程:(悬浮细胞转染方法)
1. 转染前准备:悬浮细胞传代接种于适量含悬浮细胞生长培养基中,合适条件下培养。根据培养瓶大小调整细胞密度(例100mL培养瓶,1X10 6 cells/mL),然后旋紧瓶口放入摇床继续培养,2~4小时后可以进行转染。
2. 准备 DNA-PEI 复合物:DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他适合的无血清培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。
3. 转染细胞:将PEI-DNA转染复合物逐滴加入到细胞培养液中,摇匀后旋紧瓶口放回摇床合适培养条件下培养至可以分析检测。
4. 孵育细胞和分析结果:转染后一般24-72h即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合检测时间。
5. 如果要获得更多的蛋白产量,有文献表明转染后24小时,可以适当稀释细胞,稀释比例参考范围(1:1—1:5)之间,可以增加蛋白产量,稀释效应与最佳稀释比率应根据经验确定。
产品背景:
Jinpan 生产的78Bio PEI是一种优化的线性阳离子聚合物转染试剂,分子量分别为 25000 和 40000,78BioPEI40000 相比 25000 转染效率高,但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表达系统中,相比于市面上的脂质体 78BioPEI 都表现出高的蛋白表达量(无 论是 96 孔板还是 100L 的细胞反应器),以及更小的细胞毒性、更高的转染效和更高的可 重复性,并且十分经济的高性价比转染试剂。产品具有以下特点:
1.转染效率高,细胞毒性低; 蛋白表达量高;
2.节约成本:Jinpan 78 PEI转染试剂 ,进口品质,亲民价格,至少能够降 40% 的转染试剂总成本;
3.适用于 HEK293 等真核细胞的转染;
4.适用于贴壁细胞和悬浮细胞的转染;
5.适用于有血清和无血清的转染条件;
6. 无机试剂,无动物源成分;
7. 产品稳定,质控严格;
8. 工艺流程适用范围广,容易优化 适合小规模培养板,培养瓶到大规模的生物反应器。
产品反馈:
注意事项:
1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品主要用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
3.加热或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。当然酸可能不用加那么多,详细用量可试加一点 ,搅拌看看,足够溶解就行,不一定需要加到 pH 那么低。
4.一定要溶解充分,溶解不充分会影响后续的转染效率.
5.冷冻后可能会影响其后续转染效果。
特别提醒:初次使用 78PEI 进行不同基因转染时应先做预试,优化出适合自己实验的, 最佳 PEI 和 DNA 的比例,通常筛选范围在 1:1 到 5:1 之间,如果之前用过Polysciences品牌的 PEI,我们的活性是其1.5倍左右,用 78BioPEI 时应适当降低使用浓度。
简要描述:将外源基因导入真核细胞是分子生物学研究中的一项重要技术。转基因载体主要分为病毒载体系统和非病毒载体系统。病毒载体系统转染效率高,是体内基因治疗的主要工具,但安全性存在隐患,且有免疫原性,体内不能反复应用,制备较复杂,而且所能装载的外源DNA大小有限,使其应用受到很大限制。
详细介绍
产品咨询
将外源基因导入真核细胞是分子生物学研究中的一项重要技术。转基因载体主要分为病毒载体系统和非病毒载体系统。病毒载体系统转染效率高,是体内基因治疗的主要工具,但安全性存在隐患,且有免疫原性,体内不能反复应用,制备较复杂,而且所能装载的外源DNA大小有限,使其应用受到很大限制。非病毒载体是病毒载体的重要补充途径,一般认为安全性高,载体一般无免疫原性,而且是基于质粒的转染,易于组装[1-2]。目前已有的非病毒型载体介导基因转染的方法有裸DNA注射、磷酸钙介导、电转移法、阳离子脂质体及阳离子聚合物介导等。1995年,Boussif*报道了聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)可作为非病毒载体,其后,聚乙烯亚胺成为阳离子多聚物研究zui快的领域。为了研究PEI基因转染试剂的转染效果,本文通过PEI转染表达绿色荧光蛋白的pEGFP质粒到293T细胞,以观察其效果,并测定了多种因素对转染效率的影响。
订货信息如下:
货号 | 品名 | 价格¥ | 规格 | 品牌 | 备注 |
23966-2 | POLYETHYLENIMINE LINEAR | 2864 | 2 g | polysciences | 大量现货 |
24765-2 | POLYETHYLENEIMINE 'MAX'(40 000M.W.* | 3184 | 2 g | polysciences | 溶解性更好,毒性更小 |
78002qf01 | 线性PEI转染液 | 200 | 1ml | jinpanbio | 23966配制 |
78002qf02 | 线性PEI转染液 | 600 | 50ml | jinpanbio | 23966配制 |
78002qf03 | 线性PEI转染液 | 1800 | 500ml | jinpanbio | 23966配制 |
78003qf01 | 线性PEI转染液 | 200 | 1ml | jinpanbio | 24765配制 |
78003qf02 | 线性PEI转染液 | 700 | 50ml | jinpanbio | 24765配制 |
78003qf03 | 线性PEI转染液 | 2200 | 500ml | jinpanbio | 24765配制 |
78004qf01 | POLYETHYLENIMINE LINEAR | 1432 | 1g | jinpanbio | 23966分装 |
78005qf01 | POLYETHYLENEIMINE 'MAX'(40 000M.W.* | 1592 | 1g | jinpanbio | 24765分装 |