上海金畔生物科技有限公司提供凝胶回收试剂盒(含柱) ,欢迎访问官网了解更多产品信息。
产品编号 |
C6203 |
英文名称 |
DNA Extraction Kit |
中文名称 |
凝胶回收试剂盒(含柱) |
别 名 |
Gel Extraction Kit (with column); DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒; |
保存条件 |
室温干燥可保存一年,4℃保存可更长时间。 使用时如发现结晶,可于 37~55˚C水浴加热助溶。离心吸附柱不建议低温或大于 30˚C 保存,否则可能影响吸附效率。 |
注意事项 |
This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. |
产品介绍 |
产品简介 胶回收试剂盒利用硅基质材料在高盐缓冲系统对 DNA 高效、专一吸附的原理,配备聚合美自主研发的膜结合液(又称溶胶液)和高性能的硅胶膜离心吸附柱,可在 15 分钟内清除凝胶、核酸染料及其他杂质,高效回收 DNA 片段。本试剂盒配套的膜结合液和离心吸附柱的最大吸附量为 20µg,对 100-10000 bp 线性双链 DNA 片段的回收效率可高达 50-90%,也可用于单链 DNA 片段和质粒 DNA 的纯化。因回收率受 DNA 片段大小、浓度等因素的综合影响,故应尽量加大电泳的 DNA 片段浓度,以提高回收率。回收后的 DNA 片段可以直接用于酶切、连接、测序、标记、杂交和体外转录等多种分子生物学实验。
回收效率 50 bp 回收效率:30-50% 100-200 bp 回收效率:50-70% 200-5000 bp 回收效率:70-90% 5 kb-10 kb 回收效率:50-70%
产品组份 膜结合液(MB):25ml (50T) 膜漂洗液(MW):15ml (50T) 初次使用前请按瓶标说明加入无水乙醇混匀 洗脱缓冲液(EB):10ml (50T) 平衡液(BL):25ml (50T) 请使用当天平衡液处理过的吸附柱 离心吸附柱及收集管:50(50T) 室温密闭干燥保存
实验准备 用户需自行准备的材料:含 DNA 样品的琼脂糖凝胶,无水乙醇,异丙醇, 55ºC 水浴,切胶设备,台式离心机。 初次使用本试剂盒,请按瓶标说明向膜漂洗液(MW)中加入相应体积的无水乙醇(用户自备),并在试剂瓶上做标记。
操作步骤 1. 柱平衡:向吸附柱中(吸附柱放入收集管中)加入 400 μl 的平衡液 BL,12,000 rpm (-13,400×g ) 离心 1 min,弃收集管中滤液,将吸附柱重新放回收集管中。(请使用当天处理过的柱子,这一步很重要,试剂盒放置时间长不用,处理一下效果如新,减少浪费。如果新开封马上用,可以不做柱平衡) 2. 切胶:用干净刀片将目的 DNA 条带切下,尽量切除不含 DNA 的凝胶。注意:紫外线对 DNA 片段有损坏作用,切胶要迅速,避免长时间照射,同时做好眼睛及皮肤的防护。 3. 称重:将切下的含有目的 DNA 条带的凝胶切成小块,放入已称重的 1.5 ml 塑料离心管中,再称重(总重-空重=净重)。 4. 溶胶:加入等体积膜结合液(MB),60℃水浴,每隔 2-3 min 上下振荡,直到凝胶完全溶解。注意:如凝胶重量为 100 mg,其体积可视为 100 ul,则加入 100 ul 膜结合液;如凝胶浓度大于 2%,所用膜结合液体积加倍;对于 回收<300 bp 的小片段或者大于 3000bp 的大片段,可在凝胶完全溶解后再加入 1> 5. 吸附:待溶液冷却后加入离心吸附柱中,室温静置 2 min,让 DNA 片段与吸附柱中的硅胶膜充分结合,然后 12,000 rpm 离心 1 min,弃收集管中滤液。注意:如总体积超过 750 ul 可分 2 次将溶液加入同一离心吸附柱中;为增加目的 DNA 片段的洗脱浓度,也可将多管溶胶液加入到同一离心吸附柱中。 6. 清洗:加入 600 ul 的膜漂洗液(MW),12,000 rpm 离心 1 min,弃收集管中废液。注意:膜漂洗液(MW)按要求加入乙醇,用后应立即盖紧瓶盖,以防酒精挥发; 如后续实验要求纯度较高,可再清洗一次。 7. 干燥:将离心吸附柱于 12,000 rpm 离心 2 min,甩干残留漂洗液。注意:此步不能省略,否则残留乙醇会影响后续实验。 8. 洗脱:将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管中,在吸附柱中央加入 30-50 ul 洗脱缓冲液(EB),室温放置 2 min。12,000 rpm 离心 1 min 收集 DNA 片段。注意:为增加回收效率,可将洗脱液在 60℃预热,也可将得到的溶液重新加入到离心管中,室温放置 2 min,再次离心收集。如需使 用去离子水洗脱,可用 NaOH 调整其 pH 值在 7.0-8.5 之间)。
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