细菌基因组DNA提取试剂盒

上海金畔生物科技有限公司提供细菌基因组DNA提取试剂盒 ,欢迎访问官网了解更多产品信息。

产品编号 C6206
英文名称 Bacterial Genome DNA Extraction Kit
中文名称 细菌基因组DNA提取试剂盒
别    名 Bacteria Genomic DNA Kit;   细菌基因组提取试剂盒;
保存条件 Proteinase K保存于-20℃;其他组份室温干燥可保存一年,4℃保存可更长时间。
注意事项 This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍 产品简介
本试剂盒适用于从细菌中制备高质量的基因组 DNA。优化的缓冲液体系能迅速裂解细菌和灭活细胞内核酸酶,然后基因组 DNA 在高盐状态下选择性吸附于硅基质膜上,再通过快速的漂洗、离心步骤,去除细菌代谢物和蛋白等,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱下来。使用本试剂盒可从过夜培养的细菌培养液中快速提取高纯度的基因组 DNA,可直接进行 PCR、酶切和杂交等相关分子生物学实验。

产品组份
Buffer GTL: 12 ml Buffer GL: 12 ml Buffer GW1: 13 ml Buffer GW2: 15 ml Buffer GE: 10 ml Proteinase K: 1 ml Spin Column With Collection Tubes: 50 套

自备试剂
溶菌酶(革兰氏阳性菌用)、溶菌酶缓冲液(20 mM Tris,pH 8.0;2 mM Na2-EDTA;1.2% Triton X-100)、无水乙醇、RNase A(可选)。

操作步骤
注意:使用前请先在缓冲液 Buffer GW1 和 Buffer GW2 中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
1. 取 0.5-3 ml 过夜培养的菌液,室温 10,000 rpm 离心 1 min,弃上清。注意:根据菌液的浓度决定取液量,当 OD600=1 时,1ml 菌液浓度为 109个细胞,菌液的量不要超过 109个细胞,太多会使离心柱的膜堵塞,提取的基因组 DNA 的量减少,纯度降低。
2. 加入 200 ul Buffer GTL,用枪头充分吹打或用涡旋振荡器充分悬浮。注意:对于较难破壁的革兰氏阳性菌,可略过第 2 步骤,加入溶菌酶进行破壁处理,具体方法为:加入 180 µl 终浓度为 20 mg/ml 的溶菌酶缓冲液(20 mM Tris, pH 8.0;2 mM Na2-EDTA;1.2% Triton X-100;溶菌酶必须用溶菌酶干粉溶解在缓冲液中进行配制,否则会导致溶菌酶无活性),37 ℃处理 30 min 以上。如要去除 RNA,可加入浓度为 100 mg/ml 的 RNase A 4 ul,室温处理 5 min。
3. 加入 20 ul Proteinase K 溶液,充分混匀。
4. 加入 200 ul Buffer GL,充分混匀,56℃水浴 10 min,孵育过程中每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样本分散均匀。溶液变得清亮后短暂离心,以去除管盖内壁的水珠。注意:Buffer GL 加入时可能会产生白色沉淀,一般 56℃时会消失,不影响后续实验,如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取的 DNA 量少或者提取的 DNA 不纯。
5. 加入 200 ul 无水乙醇,充分震荡,此时可能会出现絮状沉淀,短暂离心以去除管盖内壁水珠。
6. 将一个离心吸附柱放入收集管中,将上一步所得溶液和絮状沉淀转移到吸附柱中,12,000 rpm 离心 1 min,弃收集管中的滤液。
7. 向吸附柱内加入 500 ul 的 Buffer GW1,室温 12,000 rpm 离心 30 sec,弃收集管中滤液。注意:按要求在 Buffer GW1 中加入无水乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发。
8. 向吸附柱内加入 600 ul Buffer GW2,室温 12,000 rpm 离心 30 sec,弃收集管中废液。注意:Buffer GW2 为浓缩液,按要求加入无水乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发。
9. 向吸附柱内加入 500 ul Buffer GW2,室温 12,000 rpm 离心 2 min,弃收集管中废液。注意:此步不能省略,否则残留乙醇会影响基因组 DNA 的后续使用。
10. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管(自备)中,加入 50 ~ 100 ul Buffer GE,室温放置 2 min,12,000 rpm 离心 1 min,离心管底溶液即基因组 DNA。注意:为增加洗脱效率,可将洗脱液 Buffer GE 在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱,可用 NaOH 调整其 pH 值在 7.0 – 8.5 之间,为了增加回收率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置 2 min,再次离心收集。

动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒

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产品编号 C6207
英文名称 Animal Cell/Tissue Genome Extraction Kit
中文名称 动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒
别    名   动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒;
保存条件 室温干燥可保存一年。
注意事项 This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍 产品简介
本试剂盒适合于从新鲜或冷冻的动物组织(比如鼠尾、肝脏等),细胞,血液,细菌等多种样品中提取高纯度总DNA。本品可纯化获得分子量最大为50kb的DNA片段,纯化过程不需要使用苯酚或氯仿等有毒溶剂,无需乙醇沉淀。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上,PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除,最后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可得到高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切,PCR,Real-Time PCR,文库构建,Southern Blot,分子标记等下游实验。

产品组份
Buffer GTL: 12 ml (50T)
Buffer GL: 12 ml (50T)
Buffer GW1(concentrate): 13 ml (50T)
Buffer GW2(concentrate): 15 ml (50T)
Buffer GE: 7 ml (50T)
Proteinase K** : 1 ml (50T)
Spin Columns DM with Collection Tubes: 50个 (50T)
** Proteinase K(蛋白酶K):-20℃保存,开盖后防止空气及枪头污染,如果出现絮状 物,是因为溶解缓冲液中的钙离子在磷酸盐中可能会产生不溶解性沉淀,离心取上清,不影响使用效果。

自备试剂
无水乙醇;Enzymatic Lysis Buffer(提取革兰氏阳性菌基因组DNA时须准备)。
Enzymatic Lysis Buffer 配方:20 mM Tris,pH 8.0;2 mM Na2-EDTA;1.2%Triton X-100;终浓度为20mg/ml的Lysozyme(溶菌酶)。

实验前准备及重要注意事项
1. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取DNA片段较小且提取量下降。
2. 如果提取次生代谢产物大量积累或细胞壁厚的细菌培养物的基因组,建议在对数生长期早期收集样品。
3. 第一次使用前应按试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4. 使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或沉淀,如有结晶或沉淀,请将Buffer GL和Buffer GTL于56˚C水浴重新溶解。
5. 如果下游实验对RNA污染比较敏感,可以在加入Buffer GL前加入4μl DNase-Free的RNase A(100mg/ml),RNase A 本试剂盒并未提供,可单独订购。

操作步骤
血液及细胞样本基因组提取
1. 材料处理
a) 如果提取材料为哺乳动物抗凝血液(无核红细胞),可直接向50-200μl新鲜或冷冻的抗凝血液样品中加入Buffer GTL补足至200μl。
b) 如果提取材料为禽类,鸟类,两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细胞,取5-10μl新鲜或冷冻的抗凝血液样品,加入Buffer GTL补足至200μl。
c) 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液(最大提取量为5×106个细胞),2000 rpm(400xg)离心5分钟,弃尽上清,加200μl GTL,振荡至样品彻底悬浮。
注意:如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl浓度为100mg/ml的RNase A 溶液,涡旋15秒,室温放置2分钟。
2. 加入20μl Proteinase K 溶液,混匀。
3. 加入200μl Buffer GL,涡旋振荡充分混匀,56˚C水浴10分钟。
4. 短暂离心以去除管盖内壁的水珠。加入200μl无水乙醇,涡旋振荡充分混匀,短暂离心。
注意:
1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
2)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。一些组织在加入BufferGL和无水乙醇后可能形成溶胶状产物,此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。
5. 上一个步骤中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12,000 rpm(约13,400 xg) 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6. 向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7. 向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤7。
8. 12,000 rpm离心2分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
9. 将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12000 rpm 离心1分钟,收集DNA溶液,-20˚C保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)Buffer GE在65-70˚C水浴预热,离心之前室温孵育5分钟可以增加产量;用另外的50-200 μl BufferGE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
3)如果要提高DNA的终浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2-5分钟,12,000 rpm离心1分钟;若洗脱体积小于200 μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg,推荐用50 μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20˚C保存。

动物组织基因组提取
1. 材料处理:如果提取材料为动物组织,取25 mg(脾组织用量应少于10 mg);如果材料为鼠尾,取一段长度为0.4-0.6 cm的大鼠鼠尾或两段长度为0.4-0.6 cm的小鼠鼠尾。
a. 样本进行液氮研磨或切成小块后置于1.5 ml离心管中,加入180 μl Buffer GTL,将不同样品做好标记。
b. 若使用匀浆器处理样本,匀浆前向样本中加入不超过80 μl Buffer GTL,匀浆后加入100 μl Buffer GTL。
注意:1)确保各组织的量不要超出推荐范围。2)组织样本在加入Buffer GTL之前用液氮研磨或加入Buffer GTL用匀浆器匀浆处理,可以增加裂解效率。
2. 加入20 μl Proteinase K,涡旋震荡使样品彻底混匀。56˚C水浴,直至组织完全裂解,孵育过程中可每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样品分散。
注意:1)不同组织消化时间不同,通常1-3小时即可完成,鼠尾需要消化6-8小时,必要时过夜消化,不会影响后续操作。2)如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质,延长56˚C孵育时间或再加入20 μl Proteinase K消化。3)如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl的浓度为100mg/ml的RNase A溶液,涡旋15秒,室温放置5-10分钟。
3. 加入200 μl Buffer GL,涡旋震荡充分混匀,70˚C水浴10分钟。短暂离心后加入200 μl无水乙醇,涡旋震荡充分混匀。
注意:1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。2)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。一些组织(如脾,肺)在加入Buffer GL和无水乙醇后可能形成溶胶状产物,此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。
4. 短暂离心,将步骤3所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12,000 rpm(约13,400xg )离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
5. 向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6. 向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm。离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤6。
7. 12,000 rpm离心2分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切,PCR等)。
8. 将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200 μl Buffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12,000 rpm 离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。2)Buffer GE在65-70°C水浴预热,离心之前室温孵育5分钟可以增加产量;用另外的50-200 μl BufferGE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。3)如果要提高DNA的终浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2-5分钟,12,000 rpm离心1分钟;若洗脱体积小于200 μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg,推荐用50 μl Buffer GE或灭菌水洗脱。4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20°C保存。

细菌基因组提取
1. 细菌样本预处理
1a. 革兰氏阴性菌
(1)取细菌培养物1-5 ml(106-108个细胞,最多不超过2×109个细胞)置于离心管(自备)中,12,000 rpm(~13,400xg)离心1分钟,尽量吸净上清。
(2)向沉淀中加入180 μl Buffer GTL,振荡使菌体重悬。
(3)加入20 μl Proteinase K,涡旋混匀,56°C孵育,直至菌体完全裂解,孵育过程中每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样本分散。
注意:如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4 μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液,震荡混匀,室温放置5-10分钟。
(4)加入200 μl Buffer GL,涡旋震荡混匀。
1b. 革兰氏阳性菌
(1)取细菌培养物1-5 ml(106-108个细胞,最多不超过2×109个细胞)置于离心管(自备)中,12,000 rpm离心1分钟,尽量吸净上清。
(2)加入180 μl Enzymatic Lysis Buffer(自备)使菌体重悬。
(3)37°C孵育30分钟。
(4)加入20 μl Proteinase K涡旋震荡,充分混匀。加入200 μl Buffer GL,涡旋震荡混匀。56℃孵育30分钟。
注意:1)如果需要,95°C孵育15分钟可以使病原体失活,但是95°C孵育会造成一些DNA的降解。2)如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4 μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液,震荡混匀,室温放置5-10分钟。
2. 加入200 μl无水乙醇,涡旋震荡充分混匀。
注意:加入无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。
3. 将步骤2所得溶液(包括形成的沉淀)全部加入到已装入收集管的吸附柱(SpinColumns DM)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
4. 向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
5. 向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤5。
6. 12,000 rpm离心2分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
7. 将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200 μl Buffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12,000 rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20°C保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)Buffer GE在65-70°C水浴预热,离心之前室温孵育5分钟可以增加产量;用另外的50-200 μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
3)如果要提高DNA的终浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2-5分钟,12,000 rpm离心1分钟;若洗脱体积小于200 μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg,推荐用50 μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

柱式全血基因组DNA提取试剂盒

上海金畔生物科技有限公司提供柱式全血基因组DNA提取试剂盒 ,欢迎访问官网了解更多产品信息。

产品编号 C6208
英文名称 Blood Genome DNA Extraction Kit with columns (0.1-1ml)
中文名称 柱式全血基因组DNA提取试剂盒
别    名   柱式血液基因组DNA小量提取试剂盒;
保存条件 室温干燥可保存一年,4℃保存可更长时间。
注意事项 This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍 产品简介
本试剂盒适用于各种新鲜及抗凝剂(柠檬酸钠、EDTA等)处理过的全血基因组DNA提取。无需去除红细胞,直接裂解血细胞,DNA特异吸附到硅胶膜上,通过简单漂洗去除杂质,可快速纯化得到基因组DNA。使用本试剂盒得到的血液基因组DNA无蛋白、核酸酶污染,可直接进行PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。

产品组份
Buffer GB: 12 ml/50 ml (50T/200T)
Buffer WB1: 13 ml/52 ml (50T/200T)
Buffer WB2: 15 ml/60 ml (50T/200T)
Buffer EB: 10 ml/30 ml (50T/200T)
Proteinase K **: 1 ml/4×1 ml (50T/200T)
Spin Column With Collection Tubes: 50/200 (50T/200T)

** Proteinase K(蛋白酶K):可常温运输,开盖后防止空气及枪头污染;为了保证长期使用,建议将其放入-20℃保存。如果出现絮状物,是因为溶解缓冲液中的钙离子在磷酸盐中可能会产生不溶解性沉淀,离心取上清,不影响使用效果。

自备试剂
无水乙醇、RNase A(可选)。

产品优势
1. 适用范围广:可从抗凝血、白膜层和禽类血等样品中直接提取DNA;
2. 操作简便:无需有机试剂沉淀,可快速获得高纯度的血液基因组DNA;
3. 纯度高:去除污染物和抑制剂彻底,便于下游应用。
注意事项
1. 如Buffer GB和Buffer WB1产生沉淀,可在56℃水浴溶解;
2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段小,提取量下降;
3. 所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作。
操作步骤
注意:使用前请先在缓冲液Buffer WB1和Buffer WB2中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。

1. 在1.5 ml灭菌离心管中加入20 ul Proteinase K,200 ul哺乳动物鲜血或抗凝血。
注意:如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量5-20 ul,可加缓冲液PBS或生理盐水补足200 ul后进行下面的裂解步骤,如要去除RNA,可加入4 ul RNase A(100 mg/ml),混匀,静置5 min。
2. 加入200 ul Buffer GB,涡旋混匀15 sec,56℃水浴10 min。
注意:期间每隔一段时间震荡离心管,至溶液变得清亮。
3. 加入200 ul无水乙醇,充分震荡,短暂离心以去除管盖内壁液体。
4. 将吸附柱放入收集管,将上一步所得溶液全部加入吸附柱中,12,000 rpm离心1 min,弃收集管中滤液。
5. 向吸附柱内加入500 ul Buffer WB1,室温12,000 rpm离心30 sec,弃收集管中滤液。
注意:按要求在Buffer WB1中加入无水乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发。
6. 向吸附柱内加入600 ul Buffer WB2,室温12,000 rpm离心30 sec,弃收集管中滤液。
注意:Buffer WB2是浓缩液,按要求加入无水乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发。
7. 向吸附柱内加入500 ul Buffer WB2,室温12,000 rpm 离心2 min,弃收集管中废液。
注意:此步不能省略,否则残留乙醇会影响基因组DNA的后续使用。
8. 将离心吸附柱置于一个新的1.5 ml塑料离心管(自备)中,加入50-100 ul Buffer EB,室温放置2 min,12,000 rpm 离心1 min,离心管底溶液即基因组DNA。
注意:为增加洗脱效率,可将洗脱液Buffer EB在60℃预热。如需使用去离子水洗脱,可用NaOH调整其pH值在7.0-8.5之间,为了增加回收率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2 min,再次离心收集。

酵母基因组DNA提取试剂盒

上海金畔生物科技有限公司提供酵母基因组DNA提取试剂盒 ,欢迎访问官网了解更多产品信息。

产品编号 C6209
英文名称 Yeast Genomic DNA Extraction Kit
中文名称 酵母基因组DNA提取试剂盒
别    名 Yeast Genome Extraction Kit;   
保存条件 室温干燥可保存一年,4℃保存可更长时间。
注意事项 This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍 产品简介
本试剂盒适用于从酵母样品中提取高纯度的总 DNA,本品无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂抽提,可获得最大为 50 kb 的 DNA,同时对100 bp 的 DNA 片段也能有效的回收。本试剂盒采用优化的缓冲液体系使裂解液中的 DNA 高效结合在硅胶膜上,而其他污染物可流过膜,使用低盐缓冲液或水洗脱,即可获得高纯度的 DNA。提取的 DNA 可直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

产品组份
Buffer GTL: 15 ml
Buffer GL: 15 ml
Buffer GW1 (concentrate): 13 ml
Buffer GW2 (concentrate): 15 ml
Buffer GE: 15 ml
Proteinase K: 25mg
Proteinase K Storage Buffer: 1.25ml
Lyticase Working Buffer: 30ml
Lyticase: 300μl
Glass Beads: 2g
Spin Columns DM With Collection Tubes: 50

自备试剂
无水乙醇,β-巯基乙醇。

实验准备
1. 向 Proteinase K 中加入 1.25 ml Proteinase K Storage Buffer 使其溶解,-20˚C 保存。配制好的 Proteinase K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。
2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量下降。对于有些细胞壁较厚以及在培养阶段会产生大量代谢物的酵母,建议在生长早期收集样品。
3. Lyticase Working Buffer 在使用前请加入β-巯基乙醇,使其终浓度为 0.1%。
4. 第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在 Buffer GW1 和 Buffer GW2 中加入无水乙醇。
5. 使用前请检查 Buffer GTL 和 Buffer GL 是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将 Buffer GTL 和 Buffer GL 于 65˚C 水浴重新溶解。
6. 如果下游实验对 RNA 污染比较敏感,可以在加入 Buffer GL 前加入 4 μl DNase-Free 的 RNase A(100 mg/ml)。

操作步骤
1. 取 1-5 ml 酵母培养物(最多不超过 5×107 个细胞,一般对于酿酒酵母 OD600=1.0 时,相当于 1-2×107 细胞/ml),12,000 rpm (~13,400×g)离心 1 分钟,收集菌体沉淀,尽量吸弃上清。
注意:菌液较多时,可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。
2.酵母细胞壁的去除:向菌体中加入 600 μl Lyticase Working Buffer(使用前检查是否加入β-巯基乙醇,使其终浓度为 0.1%),并加入 5 μl Lyticase,充分混匀。30˚C 处理 30 分钟。4,000 rpm(~1,500×g)离心 10 分钟,弃上清,收集沉淀。
注意:以上为 5×107 酵母细胞 Lyticase 用量,根据酵母的菌株和酵母细胞数量的不同,所用的 Lyticase 的浓度和孵育时间应该进行适当调整。
3.向沉淀中加入 200 μl Buffer GTL,加入 40 mg 玻璃珠(Glass Beads),涡旋 5 分钟。
4.加入 20 μl Proteinase K 混匀。55˚C 振荡水浴至细胞完全裂解。若无振荡水浴箱,温育期间每 20-30 分钟颠倒混匀一次。(一般不超过 1 小时细胞即可完全裂解)。
注意:如需去除 RNA,在上述步骤完成后加入 4 μl 100 mg/ml 的 RNase A 溶液。
5.12,000 rpm 离心 5 分钟,小心吸取上清至新离心管中。
6.加入 200 μl Buffer GL,充分混匀。70˚C 孵育 10 分钟,其间颠倒混匀数次,12,000 rpm 离心 5 分钟,将上清移到一个新的离心管中。
注意:若孵育后溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取 DNA 量少和提取的 DNA 不纯。
7.加入 200 μl 无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀。短暂离心,使管壁和管盖上的液体集中到管底。
8.将步骤 7 所得溶液和沉淀全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12,000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
9.向吸附柱中加入 500 μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
10. 向吸附柱中加入 500 μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高 DNA 纯度,可重复步骤 10。
11. 12,000 rpm 离心 2 分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。
12.将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入 50-200 μl Buffer GE 或灭菌水,室温放置 2-5 分钟,12,000 rpm 离心 1 分钟,收集 DNA 溶液,-20˚C 保存 DNA。
注意:
1)如果下游实验对 pH 值或 EDTA 敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的 pH 值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5(可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围),pH 值低于 7.0 时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育 5 分钟可以增加产量。
3)用另外的 50-200 μl Buffer GE 或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高 DNA 的终浓度,可以将步骤 10 所得的 DNA 洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤 10;若洗脱体积小于 200 μl,可以增加 DNA 的终浓度,但可能会减少总产量。如果 DNA 量小于 1 μg,推荐用 50 μl Buffer GE 或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的 DNA 会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用 Buffer GE 洗脱并于-20˚C 保存。

amsbio用于CRISPR基因组编辑的产品

 

CRISPR/Cas9 Genome Editing

 

 

 

载体,蛋白质,抗体和试剂盒

没有废话的基因编辑

 

序列特异性基因编辑的前沿技术

我们提供了一系列的试剂和试剂盒来支持你的基因编辑应用,包括一系列非同源介导的和HDR介导的CRISPR基因敲除试剂盒,用于分裂和非分裂细胞的高效基因敲除。我们还提供了重组功能的CAS9蛋白和mRNA,以及多个载体(all-in-one,t7和cas9nickase)。

 

  • 用于小鼠和人类基因的CRISPR基因敲除试剂盒
  • CRISPR/CAS9载体的GRNA和CAS9表达
  • Recombinant Cas9 protein
  • 转染就绪CAS9mRNA
  • 自定义GRNA克隆与供体载体构建服务

 

CRISPR/Cas9 genome editing system

 

介绍

基因组编辑的新工具CRISPR / Cas9允许在灵活简单的系统中进行特定的基因组破坏和置换,从而实现高特异性和低细胞毒性。CRISPR / Cas9基因组编辑系统需要将Cas9蛋白与从人U6聚合酶III启动子表达的指导RNA载体共表达。通过在3'端存在与原间隔子相邻的基序(PAM-序列NGG),Cas9将解开DNA双链体,并在被引导RNA识别靶序列后切割两条链。然后可以将在救援供体载体中合成的功能盒插入解链的DNA中。利用细胞自身的自然修复机制,

 

 

amsbio用于CRISPR基因组编辑的产品

 

多合一CRISPR / Cas9载体

货号 描述 包装尺寸  
CAS601A-1 Cas9 SmartNuclease AAVS1-gRNA靶向载体[EF1a启动子] 10微克
CAS700G-1 EF1-T7-hspCas9-T2A-GFP-H1-gRNA线性化SmartNuclease载体 10 rxn
CAS750G-1 Cas9切口酶:EF1-T7-hspCas9-切口酶-T2A-GFP-H1-gRNA线性化SmartNickase载体 10 rxn
CAS790A-KIT 多重gRNA试剂盒+ Cas9切口酶:CMV-T7-hspCas9-切口酶-H1-gRNA线性化SmartNickase载体 10 rxn
卡萨AV100PA-1 EF1a-hsaCas9-U6-gRNA(SA)线性化的多合一SmartNuclease AAV质粒 10 rxn
GE100001 预切的pCAS-Guide克隆试剂盒(10个RXN),包括GE100007和GE100008。 1套
GE100002 用于基因组靶序列克隆的pCAS-Guide载体(带有Cas9表达)(10微克),包括GE100008。 1套
GE100003 pCAS-Scramble,pCas-Guide载体,带有加扰序列作为阴性对照(10 ug) 1套
GE100009 预切的pLenti-Cas-Guide克隆试剂盒(10个RXN),包括GE100007和GE100008。 1套
GE100010 用于基因组靶序列克隆(10 ug)的pLenti-Cas-Guide载体(带有Cas9表达),包括GE100008。 1套
GE100018 pCas-Guide-EF1a-GFP载体(带有Cas9和GFP表达),用于基因组靶序列克隆(10微克) 1套
GE100021 pCas-Guide-EF1a-GFP载体中的加扰序列(10 ug) 1套
GE100022 pCas-Guide-EF1a-CD4载体(带有Cas9和CD4表达),用于基因组靶序列克隆(10微克) 1套
GE100045 pLenti-EF1a-Cas-Guide(带有EF1a-Cas9)用于gRNA靶序列克隆(10 ug) 1套

 

指导RNA载体

货号 描述 包装尺寸  
GE100025 用于靶序列克隆的pT7-Guide-IVT载体;IVT产生gRNA(10ug) 1套
GE100032 pLenti-Guide-Puro,以嘌呤霉素为哺乳动物选择标记的慢病毒载体中的gRNA克隆载体(10ug) 1套
GE100042 pGuide,仅gRNA载体,10 ug 1套
GE100044 pGuide-EF1a-GFP,具有EF1a驱动的GFP的仅gRNA载体 1套

 

Multiplex gRNA载体和试剂盒

货号 描述 包装尺寸  
CAS720A-KIT 多重gRNA试剂盒+ CAG-T7-hspCas9-H1-gRNA线性化SmartNuclease载体 10 rxn
CAS740A-KIT 多重gRNA试剂盒+ CMV-T7-hspCas9-H1-gRNA线性化SmartNuclease载体 10 rxn
CAS750A-KIT 多重gRNA试剂盒+ Cas9切口酶:EF1-T7-hspCas9-切口酶-H1-gRNA线性化SmartNickase载体 10 rxn
CAS770A-KIT 多重gRNA试剂盒+ Cas9切口酶:CAG-T7-hspCas9-切口酶-H1-gRNA线性化SmartNickase载体 10 rxn
CAS790A-KIT 多重gRNA试剂盒+ Cas9切口酶:CMV-T7-hspCas9-切口酶-H1-gRNA线性化SmartNickase载体 10 rxn
CAS9-GRNA-KIT PrecisionX Multiplex gRNA克隆试剂盒 10 rxn

 

Cas9向量

货号 描述 包装尺寸  
GE100014 pT7-Cas9载体,其中Cas9在T7下用于IVT以产生Cas9 mRNA 1套
GE100028 pLenti-Cas9载体,lenti载体中的Cas9(10 ug) 1套
GE100029 pLenti-Cas9-IRES-Puro,带双顺反子IRES-Puro(10 ug)的慢病毒载体中的Cas9 1套
GE100030 pLenti-EF1a-Cas9-IRES-Puro,带有双顺反子IRES-Puro(10 ug)的EF1a启动子下慢病毒载体中的Cas9 1套
GE100031 pLenti-Cas9-P2A-tGFP,P2A(10 ug)后的带有tGFP的慢病毒载体中的Cas9 1套
GE100032 pLenti-Guide-Puro,以嘌呤霉素为哺乳动物选择标记的慢病毒载体中的gRNA克隆载体(10ug) 1套
GE100037 AAVS1供体载体中的Cas9表达载体,嘌呤霉素的选择(10微克) 1套
GE100039 AAVS1供体载体中的Cas9表达载体,杀稻瘟菌素的选择(10ug) 1套
GE100042 pGuide,仅gRNA载体,10 ug 1套
GE100044 pGuide-EF1a-GFP,具有EF1a驱动的GFP的仅gRNA载体 1套

 

AAVS1 Safe Harbor CRISPR载体和试剂盒

猫猫 描述 包装尺寸  
CAS601A-1 Cas9 SmartNuclease AAVS1-gRNA靶向载体[EF1a启动子] 10微克
CAS620A-1 hspCas9 AAVS1安全港敲除供体(AAVS1-SA-puro-EF1-hspCas9) 10微克
GE100023 AAVS1 gRNA载体,在pCas-Guide载体中克隆的经过验证的AAVS1靶向序列 1套
GE100024 克隆了带有AAVS1同源臂的供体载体,准备进行转基因克隆 1套
GE100027 用于靶向转基因插入AAVS1基因座的载体试剂盒,包括GE100023,GE100024和GE100003 1套
GE100035 克隆了具有AAVS1同源臂的AAVS1供体载体(选择弹力素),准备进行外源基因克隆(10 ug) 1套
GE100036 用于靶向转基因插入AAVS1基因座(杀稻瘟菌素选择)的载体试剂盒,包括AAVS1 gRNA载体(目录号GE100023),AAVS1-BSD供体(目录号GE100035)和gRNA加扰对照(目录号GE100003) 1套
GE100046 已克隆具有AAVS1同源臂的AAVS1供体载体(Puro选择),EF1a启动子,准备进行外源基因克隆(10 ug) 1套
GE100047 用于靶向转基因插入AAVS1基因座(EF1a,puro)的载体试剂盒,包括GE100023,GE100046和GE100003 1套
GE100048 克隆了具有AAVS1同源臂的AAVS1供体载体(选择弹塑性蛋白),EF1a启动子,准备进行外源基因克隆(10 ug) 1套
GE100049 用于靶向转基因插入AAVS1基因座(EF1a,blasticidin)的载体试剂盒,包括GE100023,GE100048和GE100003 1套
GE620A-1 AAVS1安全港目标向量2.0-通用捐助者(AAVS1-SA-puro-MCS) 10微克
GE620A-KIT AAVS1安全港靶向载体2.0-全能供体(AAVS1-SA-puro-MCS),带有CAS601A-1(Cas9 SmartNuclease AAVS1-gRNA靶向载体)和GE640PR-1(连接PCR引物混合物的完整试剂盒,用于确认AAVS1整合位点) 1套
GE622A-1 AAVS1安全港目标向量2.0-GOI敲入供体(AAVS1-SA-puro-EF1-MCS) 10微克
GE622A-KIT AAVS1安全港靶向载体2.0-GOI敲入供体(AAVS1-SA-puro-EF1-MCS),带有CAS601A-1(Cas9 SmartNuclease AAVS1-gRNA靶向载体)和GE640PR-1(结合PCR引物混合物的完整试剂盒) AAVS1集成站点) 1套

 

Cas9切口酶

猫猫 描述 包装尺寸  
GE100019 用于gRNA克隆的pCas-Guide-Nickase载体(带有Cas9 D10A表达)(10 ug) 1套
GE100020 pT7-Cas9-尼克酶载体(Cas9 D10A)(10 ug) 1套

 

Cas9蛋白

猫猫 描述 包装尺寸  
TP790148 化脓链球菌Cas9核酸内切酶(Cas9)的纯化重组蛋白,在该蛋白的N和C末端带有猿猴病毒40(SV40)T抗原核定位序列(NLS),其N端HIS标签在大肠杆菌中表达大肠杆菌 500 pmol

 

Cas9 mRNA –准备转染

猫猫 描述 包装尺寸  
CAS500A-1 可转染的Cas9 SmartNuclease mRNA(真核版) 20微克
CAS502A-1 可转染的Cas9 SmartNuclease mRNA(原核版本) 20微克

 

Cas9抗体

猫猫 描述 包装尺寸  
CAS9-AB-2 Cas9单克隆抗体[克隆7A9] 25微克
TA190309 兔多克隆CAS9抗体 100ul

 

Cas9实时PCR引物

猫猫 描述 包装尺寸  
CAS9-PR-1 Cas9 RT-PCR引物组(每个引物组50ul,5uM) 50反应

 

捐助者载体

猫猫 描述 包装尺寸
CAS620A-1 hspCas9 AAVS1安全港敲除供体(AAVS1-SA-puro-EF1-hspCas9) 10微克
GE602A-1 AAVS1安全港cDNA / miRNA供体载体[pAAVS1D-PGK.MCS-EF1a.copGFPpuro] 10微克
GE603A-1 AAVS1安全港阳性对照供体载体[pAAVS1D-CMV.RFP-EF1a.copGFPpuro] 10微克
GE620A-1 AAVS1安全港目标向量2.0-通用捐助者(AAVS1-SA-puro-MCS) 10微克
GE622A-1 AAVS1安全港目标向量2.0-GOI敲入供体(AAVS1-SA-puro-EF1-MCS) 10微克
GE624A-1 AAVS1安全港靶向载体2.0-记者敲入供体(AAVS1-SA-puro-MCS-GFP) 10微克
HR100PA-1 基因敲入/敲除的基本人力资源靶向载体[MCS1-LoxP-MCS2-MCS3-pA-LoxP-MCS4] 10微克
HR110PA-1 基因敲除HR靶向载体[MCS1-EF1α-RFP-T2A-Puro-pA-MCS2] 10微克
HR120PA-1 GFP融合HR靶向载体[GFP-pA-LoxP-EF1?-RFP-T2A-Puro-pA-LoxP-MCS] 10微克
HR130PA-1 T2A-GFP共表达HR靶向载体[T2A-GFP-pA-loxP-EF1?-RFP-T2A-Puro-pA-LoxP-MCS] 10微克
HR150PA-1 GFP-T2A-萤光素酶共表达HR靶向载体[GFP-T2A-Luc-pA-loxP-EF1α-RFP-T2A-Puro-pA-LoxP-MCS] 10微克
HR180PA-1 IRES-GFP共表达HR靶向载体[IRES-GFP-pA-loxP-MCS1-EF1?-RFP-T2A-Puro-pA-LoxP-MCS2] 10微克
HR210PA-1 具有TK选择的基因敲除HR靶向载体[MCS1-LoxP-EF1?-GFP-T2A-Puro-P2A-hsvTK-pA-LoxP-MCS2] 10微克
HR220PA-1 GFP融合HR靶向载体[GFP-pA-LoxP-EF1a-RFP-T2A-Hygro-pA-LoxP-MCS] 10微克
HR410PA-1 基因敲除HR靶向载体[MCS1-EF1a-GFP-T2A-Puro-pA-MCS2] 10微克
HR510PA-1 基因敲除HR靶向载体[MCS1-EF1a-RFP-T2A-Hygro-pA-MCS2] 10微克
HR700PA-1 带有随机选择标记的双选择标记(GFP + Puro)和阴性选择(TK)的基因敲除HR靶向载体 10微克
HR710PA-1 具有双重选择标记(RFP + Hygro)和否定选择(TK)的基因敲除HR靶向载体针对随机整合 10微克
HR720PA-1 带有随机选择标记的单基因选择基因(弹性蛋白)和阴性选择(TK)的基因敲除HR靶向载体 10微克