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Xpressbio 实验动物疫病监测

发表于由

 

Xpressbio（EBI–Express Biotech International）公司致力于分子生物学，细胞生物学以及免疫学产品的市场研究，特色产品动物诊断检测（Lab Animal Monitoring）试剂盒非常齐全，如MHV、TMEV、PVM、仙台病毒及MAd等。 XpressBio生产的实验动物疫病监测产品丰富全面，可以针对多种实验动物，进行多种病原体微生物的检测诊断。XpressBio提供ELISA与PCR两种类型产品，每一类型产品均提供合适的对照控制品，以及详尽、实用的说明书，因此实验结果准确，可操作性强。

 

XpressBio——实验动物疫病监测

美国XpressBio公司（即EBI – Express Biotech International）致力于分子生物学、细胞生物学以及免疫学产品的研究与开发。其产品种类多、质量优、服务好；尤其是其生产的动物诊断监测产品非常齐全。

 

　　XpressBio生产的实验动物疫病监测产品丰富全面，可以针对多种实验动物，进行多种病原体微生物的检测诊断。XpressBio提供ELISA与PCR两种类型产品，每一类型产品均提供合适的对照控制品，以及详尽、实用的说明书，因此实验结果准确，可操作性强。

■ 实验动物种类

小鼠Mouse

豚鼠Guinea pig

兔Rabbit

猫Feline

大鼠Rat

仓鼠Hamster

犬Canine

猴Simian

■ 病原体微生物种类

病毒

支原体

衣原体

细菌

寄生虫

■ 产品类型

ELISA产品

PCR产品

ELISA Kit

Antigen

PCR Kit

ELISA Kit Component

ELISA Kit（Vaccine Research）

PCR Positive Control

Simian ELISA Reagent

ELISA Kit（Mouse Mite Infestation）

 

　　XpressBio提供的实验动物疫病监测ELISA产品，通过检测实验动物血清中是否存在相应抗体，从而确认实验动物是否患病。ELISA 试剂盒包括以下组分：ELISA 板条，样品稀释液，过氧化物酶偶联物，ABTS 过氧化物酶底物，终止液，浓缩洗液 (20×)，阳性对照血清，阴性对照血清。ELISA 板条为预包被微孔板；除浓缩洗液(20×) 以外，试剂盒其它组分都是即用型；阳性对照血清与阴性对照保证了实验结果的准确性。

　　根据用户需求，XpressBio也为用户提供ELISA组分和抗原，客户可以灵活选择。

　　另外，针对特定的研究对象和研究领域，XpressBio特别研发生产了非人灵长类相关系列产品Simian ELISA Reagent；用于疫苗研究的系列产品ELISA Kit（Vaccine Research）；以及用于螨类感染检测的系列产品ELISA Kit（Mouse Mite Infestation）。

　　对于PCR产品，XpressBio主要提供了两个系列：PCR 试剂盒和PCR 阳性对照，其采用琼脂糖PCR技术，灵敏度高，特异性强，使用方便。PCR 试剂盒是专门针对肝螺杆菌开发的产品，包括以下组分：10× PCR 缓冲液，50 mM MgSO4，10 mM dNTPs，10 μM Forward PCR Primer，10 μM Reverse PCR Primer，蒸馏水，螺杆菌阳性对照DNA。而PCR阳性对照为广大用户提供大量准确适用的阳性对照品，是用户进行PCR检测时所必须的材料。

 

Mouse

Rat

Guinea pig

Hamster

Rabbit

Canine

Feline

Simian

Adenovirus腺病毒

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CMV巨细胞病毒

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Ectromelia缺肢畸形病毒

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EDIM乳鼠流行性腹泻

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Hanta汉坦病毒

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Hepatitis肝炎病毒

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K Virus K病毒

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KRV大鼠病毒

 

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LCMV

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒

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Minute Virus微小病毒

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Parainfluenza Virus

副流感病毒

 

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Parvovirus细小病毒

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Pneumonia Virus肺炎病毒

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Polyoma Virus多瘤病毒

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Pox痘病毒

 

 

 

 

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RCV/SDAV

大鼠涎泪腺炎病毒

 

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Reovirus呼肠弧病毒

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Rotavirus轮状病毒

 

 

 

 

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Sendai Virus仙台病毒

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SV5猴副流感病毒

 

 

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TMEV脑脊髓炎病毒

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Toolans H-1

 

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Mycoplasma Pulmonis

肺支原体

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Mycoplasma Arthritidis

关节炎支原体

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Chlamydia衣原体

 

 

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Bordetella hinzii博代氏杆菌

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CARB纤毛相关呼吸道杆菌

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Helicobacter螺旋菌

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Pasteurella巴斯德菌

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Clostridium piliformis

梭状芽孢杆菌

(Tyzzer’s Disease)

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E. Cun孢子虫

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Pneumocystis Carinii

卡氏肺孢子虫

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Toxoplasma弓形虫

 

 

 

 

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Herpes Virus疱疹病毒

 

 

 

 

 

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Herpes-1疱疹-1

 

 

 

 

 

 

 

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Herpes-2疱疹-2

 

 

 

 

 

 

 

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Distemper犬瘟热病毒

 

 

 

 

 

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Coronavirus冠状病毒

 

 

 

 

 

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Calicivirus杆状病毒

 

 

 

 

 

 

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Rhinotracheitis

鼻气管炎病毒

 

 

 

 

 

 

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B-VirusB-病毒

 

 

 

 

 

 

 

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Varicella Zoster

水痘带状疱疹病毒

 

 

 

 

 

 

 

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STLV淋巴白血病病毒

 

 

 

 

 

 

 

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Foamy Virus泡沫病毒

 

 

 

 

 

 

 

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SIV猴免疫缺陷病毒

 

 

 

 

 

 

 

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SRV猴逆转录病毒

 

 

 

 

 

 

 

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Measles麻疹病毒

 

 

 

 

 

 

 

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Rubella风疹病毒

 

 

 

 

 

 

 

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Mumps流行性腮腺炎

 

 

 

 

 

 

 

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Rabies狂犬病毒

 

 

 

 

 

 

 

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Tuberculosis肺结核

 

 

 

 

 

 

 

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Malaria疟疾

 

 

 

 

 

 

 

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Diptheria白喉

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Tetanus破伤风

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Pertussis百日咳

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Haemophilus influenzae

流感嗜血杆菌B

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HBsAg

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Anthrax炭疽

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IgE

 (Mite Infestation螨虫感染)

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上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

1：强大的进口辐射能力，血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

2：产品种类齐全，经营超过700多个品牌，基本涵盖所有生物实验试剂耗材。

3：提供加急服务，货品一般1-2周到货。

4：富有竞争力的价格优势，绝大部分价格有优势。

5：多年积累良好的信誉，大部分客户提供货到付款服务。客户包括清华、北大、交大、复旦、中山等100多所高校，ROCHE，阿斯利康、国药、fisher等药企。

6：我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech；sysy,TriLink BioTechnologies,Inc；worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。

7：我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批发，欢迎合作。

 

巨噬细胞去除实验

发表于由

去除巨噬细胞是研究巨噬细胞功能的重要方法。巨噬细胞可吞噬clodronate Liposome，在溶酶体的作用下，clodronate可释放出来，当其达到一定浓度时，可引起巨噬细胞的凋亡，从而去除巨噬细胞。clodronate Liposome可局部注射去除注射部位临近的巨噬细胞，如肺、膝关节、肿瘤局部和脑等；也可尾静脉或腹腔注射去除循环途径中的单核巨噬细胞，如肝脏和脾脏中的巨噬细胞。

 

1.       脂质体的准备

美国的FormuMax Scientific可以提供多种clodronate Liposome 具体产品可以上http://www.liposomeexpert.com查询  

www.jinpanbio.com  021-50837765

 

2.       脂质体的体内注射

隔日尾静脉注射200ul clodronate liposome，根据实验要求制定注射日程。通过免疫组化或流式检测巨噬细胞的去除效率。

 

尾静脉注射方法：

1.       将小鼠放在倒扣的饭盒内，从孔口拉出尾巴，小鼠的尾部有2条动脉和3条静脉，2条动脉分别在尾部的背侧面和腹侧面，3条静脉呈品字型分布,一般采用左右两侧的静脉；

2.       将纱布浸泡于约70度的温水中，拿出后包裹尾巴，以达到使尾部血管扩张及软化表皮角质的目的；

3.       行尾部静脉注射时，以左手拇指和食指前后摁住鼠尾，留出约2cm一段，使皮肤紧张，静脉更为充盈，右手持1ml针头注射器，使针头与静脉平行（小于30°角），从尾巴的下1/4处进针，开始注入药物时应缓慢，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，可注入药物。

有的实验需连日反复尾静脉注射给药，注射部位应尽可能从尾端开始，按次序向尾根部移动，更换血管位置注射给药。拔出针头后，用棉球按住注射部位轻压1-2min，止血。

Real-time PCR实验注意事项

发表于由

 

 

Real-time PCR实验注意事项
实验中的一些好习惯
加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均
移液枪用完之后要归到zui大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性
一定要记着关水浴箱，切记切记
多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是zui快提高的捷径了
所有的试剂都自己配，出了问题才好找原因
防止RNA酶污染的措施
1.   所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。
2.   塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀，故不能使用）。
3.   有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室温10min，然后用0.1% DEPC水冲洗，晾干。
4.   配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC，在37℃处理12hr以上。然后用高压灭菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经0.22μm滤膜过滤除菌。
5.   操作人员戴一次性口罩、帽子、手套，实验过程中手套要勤换。
6.   设置RNA操作实验室，所有器械等应为。
二、常用的RNA酶抑制剂
1.  焦磷酸二乙酯（DEPC）：是一种强烈但不*的RNA酶抑制剂。它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。
2.  异硫氰酸胍：目前被认为是zui有效的RNA酶抑制剂，它在裂解组织的同时也使RNA酶失活。它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来，又对RNA酶有强烈的变性作用。
3.  氧钒核糖核苷复合物：由氧化钒离子和核苷形成的复合物，它和RNA酶结合形成过渡态类物质，几乎能*抑制RNA酶的活性。
4.  RNA酶的蛋白抑制剂（RNasin）：从大鼠肝或人胎盘中提取得来的酸性糖蛋白。RNasin是RNA酶的一种非竞争性抑制剂，可以和多种RNA酶结合，使其失活。
5.  其它：SDS、尿素、硅藻土等对RNA酶也有一定抑制作用。
因为DEPc不加选择的修饰蛋白质和RNA，因此在分离和纯化RNA过程中不能使用，而且它与一些缓冲液（例如Tri）不能相容
在所有RNA实验中，zui关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。
RNA酶可耐受多种处理而不被灭活，如煮沸、高压灭菌等。
研究人员造成的污染 RNA酶zui主要的潜在污染源是研究人员的手。因此进行RNA实验时应勤换手套。
但DEPC能与胺和巯基反应,因而 含Tris和DTT的试剂不能用DEPC处理
（一）动植物总RNA提取-Trizol法
　　Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫克至几克。用Trizol法提取的总RNA*蛋白和DNA污染。 RNA可直接用于Northern斑点分析，斑点杂交， Poly（A）+分离，体外翻译，RNase封阻分析和分子克隆。
　　1、将组织在液N中磨成粉末后，再以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨，注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。
　　2、研磨液室温放置5分钟，然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒。
　　3、取上层水相于一新的离心管，按每mlTrizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇，室温放置10分钟，12000g离心10分钟。
　　4、弃去上清液，按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇，涡旋混匀，4℃下7500g离心5分钟。
　　5、小心弃去上清液，然后室温或真空干燥5-10分钟，注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度。然后将RNA溶于水中，必要时可55℃-60℃水溶 10分钟。RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。
　　[注意] 1、整个操作要带口罩及一次性手套，并尽可能在低温下操作。
另外，提取上清这步一定要小心，靠近沉淀的部分一定要舍得不要，要不然会有蛋白质污染，影响比值
　　2、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上，RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周，-20℃保存一年。
总mRNA的提取（自己的经验）
一、  关于Trizol Reagent需要的试剂
1．  Chloroform：氯仿 （分析纯）
2．  Isoproplyl alcohol：异丙醇（分析纯）
3．  75% Ethanol（in DEPC-treated water）:75%乙醇。要求用分析纯无水乙醇并用0.01%的DEPC处理过的无Rnase的水稀释。
4．  RNase-free water：无Rnase的水。方法是：将DEPC按0.01%（V/V）加在d H2O中500ml（50ul），在37℃过夜，并高压灭菌即得（150℃ 3小时）
5．  一次性塑料手套
6．  注意：DEPC有致癌之嫌
二、  关于Trizol Reagent的使用过程：
1．  Homogenization（匀浆）
a.  Tissues：组织
每100mg组织匀浆加1mlTrizol试剂，样品体积不能超过Trizol试剂的10%。
b.  Cells Grown in monolayer（单层细胞接毒后出现病变的）
针对JEV细胞总RNA的抽提法：
BHK21细胞长成单层后，接毒0.5-1ml（采用大瓶），37℃吸附1h，倒掉，加维持液（含2%的血清和HEPE8的MEM）约5ml，维持天。出 现75%-100%的病变时，以PBS（预冷）冲洗细胞两次，直接在细胞瓶中加入Trizol试剂1ml/10cm2，吹吸几次，以裂解细胞（细胞瓶有两 种常用规格：大的约45cm2，小的约30cm2，故所用Trizol试剂分别约为4.5ml和3ml。Trizol试剂的加入是依细胞瓶而定，以盖满瓶 底为度，而不是依据细胞的数量，否则可导致DNA的污染）具体方法如下：（样品一定要新鲜）
（1）  组织接入预冷的EP管中，加入Trizol试剂1ml/10cm2（量一定要加足，否则易污染），混匀，吹吸几次，以破裂细胞，置室温5min，以使核蛋白复合物*分离。
（2）  加氯仿0.2ml（每1ml Trizol试剂加入氯仿0.2ml），盖好，剧烈震荡15s，置室温2-3分钟。
（3）  4℃离心，10000g×15min，离心后，混合物将分离为底层为浅红的、中层为酚-氯仿相、上层为无色的水相。RNA包含在水相中，水相的体积约相当于所加的Trizol试剂量的60%。
（4）  仔细吸取上层水相，移至另一EP管中。
（5）  加0.5ml异丙醇，以沉淀RNA（每1ml Trizol试剂加入0.5ml异丙醇），置室温10min。
（6）  4℃离心，10000g×10min。RNA沉淀为一层如凝胶样透明的小块附在管底和管壁。
（7）   弃上清液，加入预冷的75%乙醇1ml（每1ml Trizol试剂加入75%乙醇至少1ml），震荡，充分洗涤沉淀，4℃离心，5500g×5min。弃上清液，空气干燥（或真空干燥）后，沉淀重悬于无 Rnase dH2O中，吹吸几次，55℃-60℃作用10分钟以溶解RNA，-70℃保存备用。
（8）  抽提出的细胞总RNA干燥后加水50ul，取10ul加无Rnase水990ul，稀释100倍成1ml。于0.5cm厚的石英比色杯中，以无Rnase水为对照，在721型紫外分光光度计下检测，结果应为：A260/280 ratio<1.6。
（9）  分离组织10mg（纯组织）加800ul Trizol试剂。
（10）  扩增产物的鉴定：。
DEPC处理方法如下：
1. DEPC处理
（1）DEPC水：100ml超纯水加入0.2ml DEPC，充分混匀，高压灭菌。
（2）Tip头（枪头）、EP管等在提RNA过程中及做RT时接触RNA的器材（包括1ml、200μl、20μl Tip头；EP管和PCR反应管等）：用0.1%的DEPC水（1000 ml超纯水加入1ml DEPC）37℃浸泡过夜，高压灭菌。
2. 提取RNA，用DEPC水溶解
3. RT
我是用PCR仪来控制温度和时间的，所以RT是在PCR反应管中作的。
4. 操作过程中要戴一次性手套，并经常换手套。
把要直接接触样品的东西都用DEPC水处理一下，枪头盒插好枪头后，加入1-2ml的0.1%DEPC水，在灭菌就行了；现在有进口的RNASE FREE的枪头买，直接用不用处理的
如何消除污染
机器运行完后，取出PCR产物时不能随便丢弃，应该用塑料手套或其他打结包好后丢入垃圾桶。
（1）       试剂：mixer尽量分装，不要原瓶多次取用。
（2）加样：原则是DNAzui后加，其他试剂按照体积大小从大往小的加。如果是同种引物和探针有多管的话只是DNA不同，那么采取的方法是算出总体积后加在一个管子里面，混合均匀之后再分装到各个管子里去，这样可以有效地避免误差及污染。
另外，普通实验室容易污染，且污染程度很高，与跑电泳还有质粒制备提取都在同一个房间里有比较大的关系，zui容易造成高浓度污染的就是产物的开盖和质粒的稀释。
目 前，国内外各个公司提供的诊断试剂盒大多采用了UNG来防污染。Uracil-DNA N-glycosylase（UNG）尿嘧啶DNA糖基酶，来源于大肠杆菌重组克隆表达。
RNA定量
RNA也至少要用电泳，一方面定量，另一方面可以看看完整性。至于用分光光度计比较 不同标本之间就更不准了。
RNA的贮藏，zui主要的是温度，－20不够，－80，液氮zui保险
mRNA是不能代替蛋白水平的分析的，因为还有翻译效率和RNA降解速度 的影响
RT-PCR有两种做法：
条件具备的话可用kit进行一步法进行；若条件不太好的话可分两步进行逆转录再PCR。但后来发现两步法的结果更加理想，条带特异性强且无拖尾现象，我推测是体系更加单一比较利于PCR的进行
一定要做内参的，每一次，我想。不作内参的结果是不可信的
电泳可以不一起跑，没有关系，计算的是相对表达程度，半定量和定量RT-PCR做的都是基因相对表达 量，不是表达量
mRNA的分离与纯化中
步骤（4）中将RNA溶液置65℃中温育然后冷却至室温再上样的目的有两个，一个是破坏RNA的二级结构，尤其是mRNA Poly（A+）尾处的二级结构，使Poly（A+）尾充分暴露，从而提高Poly（A+）RNA的回收率；另一个目的是能解离mRNA与rRNA的结 合，否则会导致rRNA的污染。所以此步骤不能省略。
下面，我们介绍一个可以确认RNA溶液中有没有残留的RNA酶的方法。
3）保温试验
方法很简单的，按照样品浓度，从RNA溶液中吸取两份1000 ng的RNA加入至0.5 ml的离心管中,并且用pH7.0的Tris缓冲液补充到10 ul的总体积，然后密闭管盖。把其中一份放入70℃的恒温水浴中,保温1 h。另一份放置在-20℃冰箱中保存1 h。
时间到了之后，取出两份样本进行电泳。电泳完成后，比较两者的电泳条带。如果两者的条带一致或者无明显差别（当然，它们的条带也要符合方法2中的条件）， 则说明RNA溶液中没有残留的RNA酶污染，RNA的质量很好。相反的，如果70℃保温的样本有明显的降解，则说明RNA溶液中有RNA酶污染。
PCR污染与对策
）PCR扩增产物污染.这是PCR反应中zui主要zui常见的污染问题，所以，扩增区的仪器什么如枪头等要注意。
还有一种容易忽视，zui可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染；在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题.
1标本处理区，包括扩增摸板的制备；
2. PCR扩增区，包括反应液的配制和PCR扩增；
3. 产物分析区，凝胶电泳分析，产物拍照及重组克隆的制备。
各工作区要有一定的隔离，操作器材，要有一定的方向性。如：标本制备→PCR扩增→产物分析→产物处理。
切记：产物分析区的产物及器材不要拿到其他两个工作区。
使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染；
操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的度
反应液污染
可采用下列方法之一处理：
1. DNase I法：PCR混合液（未加模板和Taq聚合酶）加入0.5U DNase I，室温反应30 min后加热灭活，然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增。该方法的优点是不需要知道污染DNA的序列；
（三）尿嘧啶糖苷酶（UNG）法
由于UV照射的去污染作用对500bp以下的片段效果不好，而临床用于检测的PCR扩增片段通常为300bp左右，因此UNG的预防作用日益受到重视和肯定。
1、提取mRNA时所用的EP管、玻璃等器皿全部都要用0.1%DEPC水浸泡。然后烘干，高压灭菌，再烘干。
2、用DEPC水洗过后当然不能用双蒸水洗了。那你用DEPC处理还有什么意义呢？还要用双蒸水洗吗？
3、玻璃器皿干烤：180度，8小时或更长时间；小器皿也可以用少许氯仿处理一下。另外，铁制品、研砵等也可倒上酒精直接烧。

 

PEI与23966-1实验结果反馈

发表于由

 

BioHuB PEI与23966-1实验结果反馈表

单位

上海**制药技术有限公司

实验组名称

分子部门

实验室研究方向

 

试用人

 

 

转染细胞种类

293T

现用转染试剂品牌

polyethylenimine,linear

 

转染选用质粒

 

NC

 

现用转染试剂价格

 

 

转染后观察时间

24h、48h

现用转染试剂规格及

平均可用时长

mw25,000

 

相同转染条件下， BioHuB PEI与现用转染试剂效果对比

 

BioHuB PEI转染效率：

现用polysciences转染试剂转染效率：

试用结果图片展示：单转质粒

单转质粒

包装

包装

具体试用效果及建议：

单转质粒BioHuB PEI转染效率比现用23966-1的好

包装BioHuB PEI转染效率和现用差不多，相比细胞状态稍微差点，毒性相对25000大点