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Custodiol HTK的应用和常见问题

发表于由

essentialpharma

Essential Pharmaceutical

Essential Pharmaceuticals一直为移植社区提供产品，服务和移植医学方面的贡献.Custodiol®HTK初于2000年推出，但在2006年被引入Essential Pharmaceuticals。自2006年以来，Essential已成长为重要的，高度专业化的业务，拥有*的销售，客户服务和营销团队。Custodiol®HTK已发展成为美国的器官保存解决方案之一。

Essential Pharmaceuticals于2017年7月被Accord Healthcare收购。根据协议条款，Accord与Essential公司一起获得了在美国和加拿大销售Custodiol®HTKSolution  （www.custodiol。。ｃｏｍ）的权利  。

 

Custodiol®HTK溶液适用于供体肾脏，肝脏，胰腺和心脏的灌注和冲洗，然后从供体中取出或在从供体取出后立即进行。在低温储存和运输（不用于连续灌注）到接受者期间，将溶液留在器官脉管系统中。

重要的临床优势

  • 只有批准用于腹腔和胸腔的解决方案
  • 临床研究中没有意外的不良事件7（例如，心律失常，心脏骤停）
  • 粘度低，在胰腺等低流量器官中很重要
  • 低钾含量允许直接释放到受体的循环系统中
  • 用组氨酸和组氨酸HCl缓冲。移植器官的缓冲能力翻倍，缓和pH值，防止水肿 – 更方便
  • 水样粘度，更容易扩散，更快的冷却时间
  • 无需冲洗
  • 便利的存储和包装尺寸
    • 1年保质期
    • 1/2升瓶
    • 1升，2升和5升袋
  • 即用型 – 无需添加剂或过滤器
  • 比UW和Celsior解决方案更便宜
  • 初是作为心脏停搏而开发的

*CUSTODIOL®已在欧洲近200万个心脏手术中使用。2

Custodiol®HTK溶液用于灌注和冲洗供体肾脏，肝脏，心脏和胰腺，然后从供体中取出，并在低温储存期间保存这些器官并运输至受体。它基于通过撤除细胞外钠和钙来激活器官功能的原理，以及通过组氨酸/组氨酸HCl强烈缓冲细胞外空间，从而延长器官耐受血液中断的时间和氧。Custodiol®HTK溶液的重量摩尔渗透压浓度只有一小部分归因于钠和钾。其组成类似于细胞外液。

Custodiol®HTK溶液钾浓度低，因此移植器官中的残留溶液不会对接受者造成危害。这对于摄取相对大量灌注液的器官尤其重要，灌注液可能出现在受体的循环中。

化学与药理学

作为晶体溶液，Custodiol®HTK溶液被认为是细胞内溶液，即与细胞内浓度相似的电解质浓度，含有低浓度的电解质钠，钙，钾和镁。Custodiol®HTK溶液还含有高浓度的氨基酸缓冲剂，组氨酸/组氨酸盐酸盐，氨基酸色氨酸α-酮戊二酸盐和渗透剂甘露醇。盐酸组氨酸/组氨酸缓冲系统提供正常的渗透压，并在缺血诱导的酸中毒期间增强溶液的缓冲能力。1,2除甘露醇外，所有成分通常都存在于体内。

Custodiol®HTK溶液不含胶体，粘度为1.8 cP，与水的粘度（1.0020 cP）相似。Custodiol®HTK溶液的重量摩尔渗透压浓度为310 mosmol / kg。Custodiol®HTK溶液的pH值在25°C时为7.02 – 7.2。

低钠含量使得可以使用高浓度的生物缓冲系统，即组氨酸和组氨酸HCL，其赋予优于血液的缓冲能力。组氨酸/组氨酸盐酸盐缓冲系统提供渗透压，并增强溶液在缺血诱导的酸中毒期间的缓冲能力.1组氨酸也是一种有效的膜保护剂，2,3并改善了ATP的提供。

Custodiol®HTKSolution含有氨基酸色氨酸以保护细胞膜。α-酮戊二酸有助于稳定细胞膜，是无氧代谢的基质; 它是克雷布斯循环中的中间体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的前体，其在再灌注期间提供改善的ATP产生并通过糖酵解抑制乳酸的产生。3,4,5

甘露醇保持生理或略微增加的重量摩尔渗透压浓度，从而抵消细胞内蛋白质的胶体渗透压以减少细胞水肿。甘露醇也可以作为自由基清除剂。4,5

在许多研究中已经证明了用组氨酸缓冲的Custodiol®HTK溶液的低钠和低钙概念的功效。Custodiol®HTKSolution改善临床结果的优势部分基于组氨酸/组氨酸盐酸盐的缓冲作用，可提高无氧糖酵解的效率。此外，已显示添加甘露醇可减少细胞水肿。3,6

Custodiol®应用

  • Custodiol®初设计为心脏停搏液，有效地舒缓了恢复的心脏。这种阻力水平不仅是电气的，而且是机械的，导致能耗降低。
  • 在再灌注期间，Custodiol®大限度地减少离子梯度偏移，提供安全余量。
  • 组氨酸的高缓冲能力与trytophan和α-酮戊二酸结合，提供膜保护和抑制组织酸中毒。
  • 低粘度可以在快速冷却的情况下更快更有效地进行冲洗。
  • HTK的生化组成使其实用且易于使用。
  • Custodiol®可作为“通用”保存解决方案考虑用于心脏和腹部器官。
  • 安全优势包括使用有机缓冲液，无混合或两种溶液混淆，低K +浓度消除了冲洗的需要，消除了高钾血症的风险，同时降低了移植后心律失常的风险。
  • Custodiol®也是Celsior和UW解决方案的经济型替代品。

由于其低K +含量，HTK溶液可避免高K +浓度的毒性作用，并且对移植器官中痕量（K +）溶液的关注较少。因此，在移植之前不需要将溶液冲洗出器官。与其他解决方案相比，此优势可降低不*冲洗的风险。

Custodiol®HTK溶液的生化组成也实用且易于使用（器官容器和结构更*渗透），其低粘度（几乎与水相同）简化了处理。由于整个器官*冷却，在心脏骤停阶段使用Custodiol®HTK后不需要表面冷却，也不需要放置在心脏后面的冷却袖口或类似装置。

 

Custodiol®HTK溶液  常见问题

 

Custodiol HTK和UW解决方案有什么区别？

Custodiol是一种低粘度溶液，含有低水平的钾（低到足以使Custodiol在植入前不需要从器官中冲出）和钠。低钠允许增加渗透空间以获得更好的缓冲。虽然UW提供乳糖酸和棉子糖，但Custodiol使用甘露醇，一种非常安全的产品。Custodiol还提供*的组氨酸缓冲，而UW使用磷酸盐缓冲液。Custodiol是仅有的批准用于腹部和胸部器官的移植的保存溶液。

Custodiol HTK需要冷藏吗？

Custodiol应保存在2-8°C的冰箱中，避光。

 

我将我的解决方案从冰箱中取出24小时，我是否必须丢弃？

有关具体答案，请参阅我们的加速温度条件稳定表。这假设产品没有暴露在光线下。

什么是Custodiol HTK？

Custodiol的主要成分是：组氨酸 – 一种有效的细胞缓冲液; 色氨酸 – 一种抗氧化剂，也支持膜活性。酮戊二酸也是膜稳定剂，是无氧代谢的底物。

Custodiol HTK批准了心脏停搏液吗？

Custodiol被批准用于与心脏移植手术相关的心脏停搏液。

Custodiol HTK有多少卷？

Custodiol有500ml瓶装，1升，2升和5升袋装。

Custodiol HTK的保质期是多久？

自生产之日起一年

即使我用机器运输，我可以用Custodiol HTK冲洗吗？

是。在放入灌注泵机器之前器官的采购仍然用器官保存溶液如Custodiol HTK完成。

Custodiol HTK是否可以使用或需要任何添加剂？

Custodiol HTK在到货时即可使用，无需添加剂或过滤剂。

Custodiol HTK如何在价格上与其他保存解决方案进行比较？

Custodiol优先定价为Viaspan品牌，并与目前可用的通用UW竞争。

Custodiol批准使用哪些器官？

Custodiol是美国仅有的批准用于腹部和胸部器官的器官保存解决方案，在移植前获得肾脏，肝脏，胰腺和心脏保护的批准。

我可能感兴趣的其他产品吗？

Essential Pharmaceuticals生产和销售：用于组织的Cell-Ess Serum Replacement和Clin-Ess运输培养基。

 

货号

品名

规格

美金

品牌

NC0855684

Cell-Ess Universal Titer Boost 500ml

 500ml

$518.65

Essential Pharmaceutical

NC1222844

CLIN-ESS TRANSPORT MEDIA 100ML

100ML

$143.00

Essential Pharmaceutical

NC1147002

CLIN-ESS TRSPT MEDIA-500ML

500ML

$435.50

Essential Pharmaceutical

NC0263339

CUSTODIOL CUSTODIOL HTK 1L BAG (6/CS)

L BAG (6/CS)

$1,520.23

Essential Pharmaceutical

NC1050537

CUSTODIOL CUSTODIOL HTK ORGAN PRESERVATI

Case

$1,478.00

Essential Pharmaceutical

上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

1：强大的进口辐射能力，血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

2：产品种类齐全，经营超过700多品牌，基本涵盖所有生物实验试剂耗材。

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6：我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech；sysy,TriLink BioTechnologies,Inc；worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。

7：我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批发，欢迎合作。

 

 

 

 

 

 

 

Kingfisher Biotech 蛋白质常见问题

发表于由

Kingfisher生物技术有限公司致力于加快兽医基础研究，开发和商业化了之前市场未曾涉及的多个物种的研究试剂。我们的主要重点是开发牛、马、猪和鸡的兽医研究用高品质试剂，此外，我们也提供包括犬、猫、山羊、绵羊、火鸡、水牛、鲶鱼、鲑鱼等其他动物和鱼类研究领域用试剂。我们公司位于明尼苏达州圣保罗市，我们与大学和企业实验室建立了合作研究中心，位于明尼苏达大学的明尼阿波利斯和圣保罗校区间，上海普迈生物新近被代理Kingfisher产品，将与Kingfisher公司携手开拓中国市场公司必将成为生物技术领域的*,也将Kingfisher公司的理念贯彻到底，打造生物技术新概念，Kingfisher主要产品有以下几个方面：
    重组蛋白：   干扰素、白介素、巨噬细胞移动抑制因子等
    多克隆抗体： 抗CCL2、抗IL、抗CXCL9等多抗
    ELISA试剂盒：牛CCL2、牛IL-13、犬和马IL-1 beta、鸡IL-16等ELISA 试剂盒

种属 Species
        Bovine   牛   重组蛋白、多抗、ELISA试剂盒
        Canine   犬   重组蛋白、多抗、ELISA试剂盒
        Chicken  鸡  重组蛋白、多抗、ELISA试剂盒
        Equine   马   重组蛋白、多抗、ELISA试剂盒
        Feline    猫   重组蛋白、多抗、ELISA试剂盒
        Rabbit   兔   重组蛋白、多抗、ELISA试剂盒
        Swine    猪   重组蛋白、多抗、ELISA试剂盒
        Turkey  火鸡重组蛋白、多抗、ELISA试剂盒

 

 

蛋白质常见问题

 

什么是载体蛋白？

载体蛋白是在重构期间添加到冻干的重组蛋白中的另外的蛋白质，以在储存，冷冻和使用期间增加稀释的重组蛋白的稳定性。

 

什么是重组蛋白重建的可接受的载体蛋白？

牛血清白蛋白（BSA）是用于重组蛋白重建的常见的载体蛋白。但是，如果使用牛重组蛋白，请使用非牛载体蛋白，如马血清白蛋白（ESA）。 

 

如果使用重组蛋白进行体外细胞培养刺激，通常可以在含有血清或其他可接受的载体蛋白而不是BSA / ESA溶液的完整细胞培养基中直接重构重组蛋白。

 

重构需要多少浓度的载体蛋白？

在终溶液中载体蛋白的浓度应至少为0.1％。如果需要，可以使用另外的载体蛋白。通常，在1X PBS中的0.1-10％BSA溶液是可接受的重构溶液。

 

重组蛋白重建的可接受体积是多少？

通常，对于我们的5μg和25μg重组蛋白质小瓶，100μL是可接受的重建体积。我们的5μg和25μg样品瓶的大体积为500μL。 

 

通常，1 mL是我们100μg小瓶重组蛋白的可接受的重建体积。我们的100μg样品瓶的大体积为2 mL。

 

重组时重组蛋白的浓度是多少？

重组蛋白的浓度取决于重建体积。例如，如果在100μL载体蛋白溶液中重构5μg重组蛋白，则浓度为5μg/100μL或50μg/ mL。 

 

重组蛋白的生物活性是什么？

重组蛋白的生物活性列于数据表。如果数据表中未列出生物活性，我们正在测试重组蛋白的生物活性。物种特异性生物测定通常不适用于我们的大多数蛋白质。因此，需要开发这些生物测定法。我们选择在此测试期间提供重组蛋白。 

 

重组蛋白的生物活性单位是多少？

我们仅以质量单位（即μg）报告我们的重组蛋白生物活性，而不是以生物活性单位（即单位）。生物活性单位是在特定条件下在特定测定中产生特定生物活性测量所需的产物量。生物活性单位依赖于蛋白质和化验。另外，通常仅人类重组蛋白质具有与生物活性单位相关的这些特异性生物测定法。生物活性测量单位通常没有明确规定非人类物种。鉴于生物测定通常产生高度可变的结果，生物活性单位的确定也是高度可变的。然而，质量不是可变的，因此它提供了更准确的测量。从而，

酵母作为表达系统有什么优势，它与大肠杆菌表达系统相比如何？

酵母作为表达系统具有几个优点，并且由酵母产生的重组蛋白具有几个特征，使得它们成为包括细胞培养在内的许多应用的理想选择。Kingfisher Biotech使用的酵母表达系统将重组蛋白分泌到培养基中。这种分泌通常被认为是纯化过程的步，因为酵母细胞固有地分泌很少的天然蛋白质。酵母分泌的重组蛋白质通过高尔基体处理，因此它们可以进行翻译后修饰。这些修饰可包括糖基化，磷酸化和硫酸化。有许多蛋白质需要修改蛋白质功能，正确折叠或溶解度。酵母表达系统的另一个好处是酵母没有像E这样的细菌细胞壁。大肠杆菌，因此不存在内毒素（脂多糖）。酵母天然无内毒素。

大肠杆菌表达的重组蛋白不含有翻译后修饰（大肠杆菌不含高尔基体）。在大肠杆菌中制备的重组蛋白通常定位于包涵体。从这些包涵体中纯化可能需要苛刻的条件来释放重组蛋白，然后进行随后的重折叠过程。这些苛刻的治疗可以影响蛋白质的功能。

 

ELISA常见问题解答

你有自己动手的ELISAs技术指南吗？

是的，我们这样做。这是链接–ELISA技术指南

使用自己动手ELISA可以进行多少次检测？

自己动手的ELISA试剂盒是独立的非结合抗体（捕获抗体），重组蛋白（标准）和生物素化抗体（检测抗体）。如果需要（或组件用完），可以单独购买这些组件中的每一个。已显示这些抗体与ELISA中提供的标准一起起作用。评估各个组件的数据表将提供代表性的工作浓度，以帮助确定可以执行的分析的数量。通常，捕获抗体是限制性试剂。

 

例如，猪IFNα1自己做的ELISA（DYI0724S-003）包括：
 

100μg抗猪IFNα1多克隆抗体（PB0445S-100）：

ELISA中该试剂的推荐滴度为1-5μg/ ml。如果在96孔板中每孔100μl涂覆，则需要大约10ml试剂涂覆96孔板。因此，根据使用的滴度，每板需要10μg-50μg。这意味着所提供的试剂应涂覆2-10个板。
 

5μg重组猪IFNα1（RP0010S-005）：

*标准浓度需要由用户确定。如果使用50 ng / ml（0.05μg/ ml）的高标准浓度，假设每个平板需要0.5 ml标准品，这应该为200次分析提供足够的标准。
 

50μgBiotinylatedAnti-SwineIFNα1多克隆抗体（PBB0451​​S-050）：

ELISA中该试剂的推荐滴度为0.1-0.5μg/ ml。如果检测到 

在96孔板中每孔100μl，这将需要大约10ml试剂来检测96孔板。因此，取决于所用的滴度，每个ELISA需要1-5μg。这意味着所提供的试剂应在10-50次检测中检测。

 

因此，取决于优化结果，能够用所提供的组件执行的ELISA的数量可能存在相当大的差异。如前所述，这些组件中的每一个都可以单独购买。有可能的是，捕获抗体需要单独购买，因为该试剂将在其他组分（它通常是限制性试剂）之前首先被耗尽。

 

我们可以在ELISAs中使用其他样本类型，如血清或血浆吗？

我们的许多客户使用我们的ELISAs进行血清，血浆或其他样品类型检测。为了使用不同的样品类型，需要在测定中验证标准品和样品稀释剂。*稀释剂应提供线性结果（即当稀释样品时，在校正稀释因子时获得相似的值）并且具有80-120％的回收率（即，如果将已知量的标准物添加到样品类型中，80-添加的120％应在测定中测量。

 

为了验证样品稀释剂是否与所需的样品类型一起工作，需要进行线性和回收分析。该测定法易于实施。只需使用您的测试样品稀释剂准备正常的标准曲线。将已知量的标准品加入/加入测试样品中。向测试样品稀释剂添加/加入相同数量的标准品（这是100％回收率）。确保在测定中运行非标准加标测试样品，以从测试样品中减去任何背景值。准备稀释剂标准加标样品，测试标准加标样品和非标准加标样品与测试稀释剂（即1：2,1：4,1：8,1：16,1）的多个连续稀释液：32等）。当标准加标样品值（减去非标准加标样品背景）为稀释剂标准加标样品结果的80-120％时，*回收率。此外，当校正稀释（线性）时，结果应给出类似的值。 

 

通常，在DPBS（试剂稀释剂）中用4％BSA进行1：4至1：8稀释足以实现样品的线性并获得*回收率。如果在DPBS中用4％BSA不能获得*结果，则需要使用更高的样品稀释液或不同的样品稀释剂。要尝试的其他稀释剂是DPBS中10-50％的血清（例如胎牛血清或马血清）（只要血清不含可能与ELISA交叉反应的目的蛋白质）。另外，增加DPBS缓冲液中的BSA含量也可以增加线性和恢复。

 

 

 产品列表如下：

Bovine IL-5 Primer Set

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 生产商
PA0111B-100 Anti-bovine CCL2 PAb 100 ug 2800 Kingfisher Biotech
PA0112B-100 Anti-bovine IL-21 PAb 100 ug 2800 Kingfisher Biotech
PA0113S-100 Anti-swine CCL3L1 PAb 100 ug 2800 Kingfisher Biotech
PA0114S-100 Anti-swine IL-13 PAb 100 ug 2800 Kingfisher Biotech
PA0127B-100 Anti-bovine TNF-alpha PAb 100 ug 2800 Kingfisher Biotech
PA0144S-100 Anti-swine TNF alpha Pab 100 ug 2800 Kingfisher Biotech
PA0145B-100 Anti-bovine IL-1F5 PAb 100 ug 2800 Kingfisher Biotech
PA0146B-100 Anti-bovine VEGF-A PAb 100 ug 2800 Kingfisher Biotech
PA0147B-100 Anti-bovine CXCL10 PAb 100 ug 2800 Kingfisher Biotech
PB0050E-100 Anti-equine IL-2 PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0052E-100 Anti-equine IL-4 PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0086C-100 Anti-chicken IL-16 PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0088S-100 Anti-swine CCL2 PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0090B-100 Anti-bovine CCL2 PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0092B-100 Anti-bovine CCL2 PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0094S-100 Anti-swine IL-13 PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0095S-100 Anti-swine IL-13 PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0119S-100 Anti-swine CXCL10 PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0120B-100 Anti-bovine IL-13 PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0121B-100 Anti-bovine IL-2 PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0122B-100 Anti-bovine CXCL9 PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0123E-100 Anti-equine CCL2 PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0124S-100 Anti-swine IFN beta PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0125D-100 Anti-canine IL-1 beta PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0143S-100 Anti-swine IL-8 PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0155D-100 Anti-canine IL-2 PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0156B-100 Anti-bovine IFN gamma PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0157S-100 Anti-swine IFN gamma PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0158S-100 Anti-swine IL-17A PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0273B-100 Anti-bovine IL-8 PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0274B-100 Anti-bovine IL-17A PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0275B-100 Anti-bovine TNF alpha PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0276B-100 Anti-bovine VEGF-A PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0280E-100 Anti-equine IFN gamma PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PB0281F-100 Anti-feline IFN gamma PAb 100 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0051E-050 Biotinylated Anti-equine IL-2 PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0053E-050 Biotinylated Anti-equine IL-4 PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0087C-050 Biotinylated Anti-chicken IL-16 PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0089S-050 Biotinylated Anti-swine CCL2 PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0091B-050 Biotinylated Anti-bovine CCL2 PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0093B-050 Biotinylated Anti-bovine CCL2 PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0096S-050 Biotinylated Anti-swine IL-13 PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0152D-050 Biotinylated Anti-canine IL-1 beta PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0153B-050 Biotinylated Anti-bovine IL-13 PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0265B-050 Biotinylated Anti-bovine CXCL9 PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0266S-050 Biotinylated Anti-swine IL-8 PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0267B-050 Biotinylated Anti-bovine IFN gamma PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0268D-050 Biotinylated Anti-canine IL-2 PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0269S-050 Biotinylated Anti-swine IFN gamma PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0270S-050 Biotinylated Anti-swine IL-17A PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0277B-050 Biotinylated Anti-bovine IL-17A PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0278B-050 Biotinylated Anti-bovine TNF alpha PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0279B-050 Biotinylated Anti-bovine VEGF-A PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0282E-050 Biotinylated Anti-equine IFN gamma PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PBB0283F-050 Biotinylated Anti-feline IFN gamma PAb 50 ug 3500 Kingfisher Biotech
PS0159B-030 Bovine TNF alpha Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0160B-030 Bovine IFN gamma Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0161B-030 Bovine IL-1 beta Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0162B-030 Bovine IL-6 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0163B-030 Bovine GAPDH Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0164B-030 Bovine IL-2 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0165B-030 Bovine IL-4 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0166B-030 Bovine FGF basic Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0167B-030 Bovine IGF-1 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0168B-030 Bovine Growth Hormone Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0169B-030 Bovine Leptin Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0170B-030 Bovine IL-10 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0171B-030 Bovine GM-CSF Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0172B-030 Bovine IL-8 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0173B-030 Bovine VEGF Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0174B-030 Bovine IL-18 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0175B-030 Bovine IL-12 p35 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0176B-030 Bovine IL-12 p40 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0177B-030 Bovine IGFBP-2 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0178B-030 Bovine IGFBP-3 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0179B-030 Bovine CCL2 (MCP-1) Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0180B-030 Bovine Cox-2 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0181B-030 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0182B-030 Bovine Endothelin-1 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0183B-030 Bovine TGF-beta 1 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0184C-030 Chicken IFN gamma Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0185C-030 Chicken IL-6 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0186C-030 Chicken IL-8 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0187C-030 Chicken IL-1 beta Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
PS0188C-030 Chicken GAPDH Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
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PS0251D-030 Canine TLR4 Primer Set 30 Reactions 2100 Kingfisher Biotech
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RP0071B-005 Recombinant Bovine CCL11 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0108F-005 Recombinant Feline IL-8 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0110C-005 Recombinant Chicken IL-4 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0115C-005 Recombinant Chicken IFN gamma 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0116C-005 Recombinant Chicken TNFSF15 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0117D-005 Recombinant Canine IL-5 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0118S-005 Recombinant Swine CCL20 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0126S-005 Recombinant Swine IFN gamma 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0128S-005 Recombinant Swine IL-17A 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0129D-005 Recombinant Canine IL-2 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0134T-005 Recombinant Turkey IL-1 beta 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0135F-005 Recombinant Feline IFN gamma 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0136U-005 Recombinant Rabbit IFN gamma 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0137E-005 Recombinant Equine TNF alpha 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0138S-005 Recombinant Swine IL-6 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0139B-005 Recombinant Bovine IL-5 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0140U-005 Recombinant Rabbit IL-2 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0141U-005 Recombinant Rabbit IL-1 beta 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0142E-005 Recombinant Equine IFN alpha 1 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0149U-005 Recombinant Rabbit IL-8 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0150F-005 Recombinant Feline SCF 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0151T-005 Recombinant Turkey IGF-2 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0154D-005 Recombinant Canine SCF 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0252D-005 Recombinant Canine VEGF-A 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0255T-005 Recombinant Turkey IGF-1 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0256D-005 Recombinant Canine IL-21 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0262S-005 Recombinant Swine IL-22 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0271D-005 Recombinant Canine IFN gamma 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0289C-005 Recombinant Chicken IL-12 p40 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
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RP0304B-005 Recombinant Bovine IL-18 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
RP0304B-025 Recombinant Bovine IL-18 25 ug 3500 Kingfisher Biotech
RP0305F-005 Recombinant Feline IL-6 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
RP0305F-025 Recombinant Feline IL-6 25 ug 3500 Kingfisher Biotech
RP0306T-005 Recombinant Turkey IL-8 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
RP0306T-005 Recombinant Turkey IL-8 25 ug 3500 Kingfisher Biotech
RP0307P-005 Recombinant Dolphin TNF alpha 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
RP0307P-025 Recombinant Dolphin TNF alpha 25 ug 3500 Kingfisher Biotech
RP0308P-005 Recombinant Dolphin IL-8 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
RP0308P-005 Recombinant Dolphin IL-8 25 ug 3500 Kingfisher Biotech
RP0309S-005 Recombinant Swine CXCL9 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
RP0309S-025 Recombinant Swine CXCL9 25 ug 3500 Kingfisher Biotech
RP0310P-005 Recombinant Dolphin IL-1 alpha 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
RP0310P-025 Recombinant Dolphin IL-1 alpha 25 ug 3500 Kingfisher Biotech
RP0311B-005 Recombinant Bovine IL-16 5 ug 1400 Kingfisher Biotech
RP0311B-025 Recombinant Bovine IL-16 25 ug 3500 Kingfisher Biotech
VS0067E-002 Equine IL-2 VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0081S-002 Swine CCL2 VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0082C-002 Chicken IL-16 VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0083B-002 Bovine CCL2 VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0084S-002 Swine IL-13 VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0105F-002 Feline IL-2 VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0130D-002 Canine IL-1 beta VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0131E-002 Equine IL-1 beta VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0148B-002 Bovine IL-13 VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0253B-002 Bovine CXCL9 (MIG) VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0254S-002 Swine IL-8 VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0257B-002 Bovine IFN gamma VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0258D-002 Canine IL-2 VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0259S-002 Swine IFN gamma VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0260S-002 Swine IL-17A VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0284B-002 Bovine IL-17A VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0285B-002 Bovine TNF alpha VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0286B-002 Bovine VEGF-A VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0287E-002 Equine IFN gamma VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0288F-002 Feline IFN gamma VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech
VS0303U-002 Rabbit IL-8 VetSet 2 plates 2100 Kingfisher Biotech

 

reddotbiotech 即用型ELISA试剂盒常见问题

发表于由

 

 

Reddot Biotech Inc.位于加拿大不列颠哥伦比亚省基洛纳，由一支在医疗器械行业拥有超过35年经验的执行团队于2015年成立。我们专注于为市场的客户提供及时的客户服务，可靠的供应和具有性能的产品。我们依靠竞争，创新和快速资源分配来满足客户需求。

Reddot Biotech Inc.目前专注于销售用于制药，实验室，医学和科研用途的试剂和相关产品。我们致力于研究和开发，为客户提供高质量的产品，为任何研究提供准确，可靠和快速的结果。凭借与各大洲公司和研究机构合作的丰富经验，我们为我们提供的产品和服务提供了巨大的价值。

Reddotbiotech  常见问题解答

传统的ELISA试剂盒与即用型ELISA试剂盒

我们新的“即用型”ELISA试剂盒具有以下特点：

  • 缩短实验时间 
  • 预稀释检测试剂
  • 增强稳定性，允许在4 o C下储存整个试剂盒

这些试剂盒仍然保持我们高水平的质量和灵敏度，以及我们12个月的保质期。

与传统的ELISA试剂盒相比，我们的即用型试剂盒使用起来更容易，更快捷。

提供的试剂和材料

传统的96T ELISA试剂盒

  • 预涂，即用型96孔带钢板：1
  • 96孔密封板：2
  • 标准：2
  • 标准稀释液：1 x 20mL
  • 检测试剂A：1×120μL（竞争试剂盒1×70μL）
  • 检测试剂B：1×120μL
  • 分析稀释剂A：1×12mL
  • 分析稀释液B：1×12mL
  • TMB底物：1 x 9mL
  • 终止溶液：1 x 6mL
  • 洗涤缓冲液（30倍浓缩液）：1×20mL
  • 使用说明书：1

即用型96T ELISA试剂盒

  • 预涂，即用型96孔带钢板：1
  • 96孔密封板：2
  • 标准：2
  • 标准稀释液：1 x 20mL
  • 检测溶液A：1x12mL
  • 检测溶液B：1x12mL
  • TMB底物：1 x 9mL
  • 终止溶液：1 x 6mL
  • 洗涤缓冲液（30倍浓缩液）：1×20mL
  • 使用说明书：1

 

 

传统的48T ELISA试剂盒

  • 预涂，即用型96孔带钢板：1
  • 96孔密封板：1
  • 标准：1
  • 标准稀释液：1 x 10mL
  • 检测试剂A：1×60μL（竞争试剂盒1×35μL）
  • 检测试剂B：1×60μL
  • 分析稀释液A：1×6mL
  • 分析稀释液B：1×6mL
  • TMB底物：1×4.5mL
  • 终止溶液：1 x 3mL
  • 洗涤缓冲液（30倍浓缩液）：1×10mL
  • 使用说明书：1

 

即用型48T ELISA试剂盒

  • 预涂，即用型96孔带钢板：1
  • 96孔密封板：1
  • 标准：1
  • 标准稀释液：1 x 10mL
  • 检测溶液A：1x6mL
  • 检测溶液B：1x6mL
  • TMB底物：1×4.5mL
  • 终止溶液：1 x 3mL
  • 洗涤缓冲液（30倍浓缩液）：1×10mL
  • 使用说明书：1

 

 

 

所需材料但未提供套件

  • 微孔板读数器，450±10nm滤光片。
  • 精密单通道或多通道移液器和一次性吸头。
  • 微量离心管用于稀释。
  • 去离子水或蒸馏水。
  • 用于印迹微量滴定板的吸水纸。
  • 稀释洗涤缓冲液的容器。

存放套件

对于未开封的套件

传统的ELISA试剂盒：所有试剂应根据样品瓶上的标签保存。的TMB底物，洗涤缓冲液（30X浓缩物）和终止溶液应在被存储4 ö Ç 在接收而其他人应在-20 Ô Ç 。

即用型ELISA试剂盒：所有试剂应在收到后于4 o C储存。

打开套件

打开试剂盒后，仍需要根据上述储存条件储存剩余的试剂。此外，将未使用的孔返回到含有干燥剂包的铝箔袋中，并沿着拉链密封的整个边缘重新密封。

注意：

有关套件的失效日期，请参阅套件盒上的标签。在此日期之前，所有组件都是稳定的

强烈建议在开封后1个月内使用剩余的试剂。

样品采集和存储

请注意您感兴趣的套件推荐哪些样品类型。

血清

使用血清分离管，让样品在室温下凝固2小时或在4℃下过夜，然后以约1000×g离心20分钟。立即测定新鲜制备的血清，或将样品分装在-20℃或-80℃下备用。避免反复冻/融循环。

等离子体

使用EDTA或肝素作为抗凝血剂收集血浆。在收集后30分钟内，在2-8℃下以1000×g离心样品15分钟。立即去除血浆并进行检测，或将样品保存在-20℃或-80℃的等分试样中以备后用。避免反复冻/融循环。

组织匀浆

组织匀浆的制备将根据组织类型而变化。通常，组织应在冰冷的PBS（0.02mol / L，pH 7.0-7.2）中*冲洗以除去过量的血液并在均质化前称重。将组织切成小块并在冰上用玻璃匀浆器在5-10mL PBS中均化（Micro Tissue Grinders也起作用）。应使用超声波细胞破碎器对所得悬浮液进行超声处理，或进行两次冻融循环以进一步破坏细胞膜。之后，匀浆应以5000×g离心5分钟。立即取出上清液并进行分析，或等分试样并在≤-20℃下储存。

细胞裂解物

根据以下说明，在测定前必须裂解细胞：

  • 应用胰蛋白酶分离贴壁细胞，然后通过离心收集（悬浮细胞可通过直接离心收集）。
  • 在冷PBS中洗涤细胞三次。
  • 在1X PBS中重悬细胞并进行4次超声波处理（或在≤-20℃下冷冻细胞。轻轻混合解冻细胞。重复冻融循环3次。）
  • 在2 – 8℃下以1500×g离心10分钟以除去细胞碎片。细胞培养上清液和其他生物液体 – 以1000×g离心20分钟。立即去除颗粒物并进行分析，或将样品分装在-20℃或-80℃的等分试样中。避免反复冻/融循环。

唾液

使用收集装置或等同物收集唾液。在2-8在1000×g下离心15分钟样品ö C.在≤-20删除在等分试样的微粒，并立即检测，或将ö C.避免反复冷冻/解冻循环。

尿

无菌收集当天的批尿液（中游），直接收集到无菌容器中。离心机以除去颗粒物质，测定立即或等分试样并储存在≤-20 ö C.避免反复冻融。

牛奶

用于以2 10,000×G下离心15分钟的样品- 8 ø C.收集总共3个周期的水性馏分和离心机两次以上。立即测定或将样品分装在-20 o C或-80 o C以备后用。避免反复冻/融循环。

泪液，细胞培养上清液和其他生物液体

以1000×g离心样品20分钟。立即去除颗粒物并进行检测，或将样品保存在-20 o C或-80 o C的等分试样中。避免反复冻/融循环。

注意：                                                

  • 样品在5天内可以被存储在4使用Ô C，否则样品必须储存在-20 Ô C（≤1月）或-80 Ô C（≤2个月），以避免生物活性和/或污染的损失。
  • 样品溶血会影响结果; 不会检测到用作样本的溶血标本。
  • 进行测定时，将样品置于室温下。

试剂准备

*使用前将所有试剂盒组分和样品置于室温（18-25 o C）。

标准 

用标准稀释剂重新配制标准品，在室温下保持10分钟，轻轻摇动（不要起泡）。有关储备溶液中标准浓度的信息，请参阅手册。准备7管含有0.5mL标准稀释剂的试管，并使用稀释的标准品生产双稀释系列。在下次转移之前*混合每个管。

检测试剂A和检测试剂B.

传统的ELISA试剂盒：使用前短暂旋转或离心检测A和检测B溶液。分别用Assay Diluent A和B稀释至工作浓度（1：100）。

即用型ELISA试剂盒：检测溶液A和B的浓度已经正确，无需进一步稀释。

洗液 

用580mL去离子水或蒸馏水稀释20mL洗涤液浓缩物（30×），制备600mL洗涤液（1×）。

TMB底物 

用灭菌的吸头吸取所需剂量的溶液。不要将残留的溶液倒回到小瓶中。

注意：

  • 不要直接在孔中进行连续稀释。
  • 在进行测定后15分钟内制备标准品。不要直接在37 o C 溶解试剂。
  • 检测试剂A和B是粘性溶液，因此慢慢移液它们以减少体积误差。
  • 传统的ELISA试剂盒：根据说明小心地重新构建标准品或使用检测试剂A和B，避免起泡并轻轻混合直至晶体*溶解。为了大限度地减少移液造成的不性，请使用小体积并确保移液器已校准。建议一次移液10μL以上以确保准确性。                 
  • 即用型ELISA试剂盒：重组标准品只能使用一次。
  • 重构的标准品，检测试剂A和检测试剂B只能使用一次。
  • 如果在洗涤液浓缩物（30×）中形成晶体，则温热至室温并轻轻混合直至晶体*溶解。
  • 试剂制备过程中使用的任何污染水或容器都会影响检测结果。

样品制备

  • Reddot Biotech仅对试剂盒本身负责，而不是对试验过程中消耗的样品负责。实验者应该在开始实验之前总是计算所需的样品总量。
  • 实验者还应该在开始之前预测大致的浓度。如果预期值不在标准曲线范围内，建议确定样品的宜稀释度。
  • 如果您使用的样品类型未在手册中指出，则应在开始实际实验之前进行初步实验以确保试剂盒的有效性。
  • 建议不要使用化学裂解缓冲液来制备组织或细胞提取样品，因为它可能会由于裂解缓冲液的含量而导致意外的反应和结果。
  • 由于其他来源的抗原与我们试剂盒中使用的抗体之间可能存在错配，因此不建议使用其他制造商生产的天然或重组蛋白，因为我们的试剂盒可能无法识别它们。
  • 我们的试剂盒可能无法检测到细胞培养上清液中的样品，因为它们很容易受到细胞活力，细胞数量和/或取样时间等因素的影响。
  • 建议将未经长期储存的新鲜样品与我们的试剂盒一起使用。如果样品长时间未冷冻保存，可能会发生蛋白质降解和变性，导致结果相互矛盾或不正确。

分析程序

用于夹心ELISA试剂盒

  • 确定稀释标准品，空白样品和样品的孔。为标准准备7口井，为空白准备1口井。每种稀释标准品（读取试剂制备），空白和样品加入100μL到适当的孔中。用Plate密封剂盖住。在37 o C 孵育2小时。
  • 从每个井中取出液体，不要洗。
  • 向每个孔中加入100μL检测试剂A工作溶液（即用型试剂盒中的检测溶液A）。用Plate密封剂覆盖后，在37 o C 孵育1小时。
  • 吸出溶液，用喷枪，多通道移液器，歧管分配器或自动洗衣机在每个孔中用350μL1×洗涤液洗涤，静置1~2分钟。通过将板轻敲到吸水纸上，*从所有孔中除去剩余的液体。*洗净3次。后一次洗涤后，通过抽吸或倾析除去任何剩余的洗涤缓冲液。翻转平板并将其吸附在吸水纸上。
  • 向每个孔中加入100μL检测试剂B工作溶液（即用型试剂盒中的检测溶液B）。用Plate密封剂覆盖后，在37 o C 孵育1小时。
  • 如步骤4中所述，重复抽吸/洗涤过程总共5次。
  • 每孔加入90μL底物溶液。盖上新的Plate密封剂。在37 o C 孵育15-25分钟（不要超过30分钟）。避光。加入底物溶液后液体会变蓝。
  • 每孔加入50μL终止液。加入Stop溶液后液体会变黄。通过敲击板的侧面来混合液体。如果颜色变化不均匀，请轻轻敲打板以确保充分混合。
  • 去除板底部的任何水滴和指纹，确认液体表面没有气泡。运行酶标仪，立即进行450nm的测量。

适用于竞争性ELISA试剂盒

  • 确定稀释标准品，空白样品和样品的孔。为标准准备7口井，为空白准备1口井。分别加入50μL标准稀释液（读取试剂制备），空白和样品加入适当的孔中。然后立即向每个孔中加入50μL检测试剂A（即用型试剂盒中的检测溶液A）。轻轻摇动平板（建议使用微孔板振荡器）。用Plate密封剂覆盖。在37 o C 孵育1小时。检测试剂A可能会出现混浊。温热至室温并轻轻混合直至溶液看起来均匀。
  • 吸出溶液，用喷枪，多通道移液器，歧管分配器或自动洗涤器，每孔加入350μL1×洗涤液，静置1-2分钟。通过将板轻敲到吸水纸上，*从所有孔中除去剩余的液体。*洗净3次。后一次洗涤后，通过抽吸或倾析除去任何剩余的洗涤缓冲液。翻转平板并将其吸附在吸水纸上。
  • 向每个孔中加入100μL检测试剂B工作溶液（即用型试剂盒中的检测溶液B）。用Plate密封剂覆盖后，在37 o C 孵育1小时。
  • 在步骤2中重复抽吸/洗涤过程总共5次。
  • 每孔加入90μL底物溶液。盖上新的Plate密封剂。在37 o C 孵育15-25分钟（不要超过30分钟）。避光。加入底物溶液后液体会变蓝。
  • 每孔加入50μL终止液。加入Stop溶液后液体会变黄。通过敲击板的侧面来混合液体。如果颜色变化不均匀，请轻轻敲打板以确保充分混合。
  • 去除板底部的任何水滴和指纹，确认液体表面没有气泡。运行酶标仪，立即进行450nm的测量。

注意：

  • 分析准备：为每个实验保留适当数量的孔，并从微孔板中移除额外的孔。剩余的井应重新密封，并保存在-20 o C的传统套件中，4 o C的即用型套件。  
  • 样品或试剂添加：请使用新制备的标准品。小心地将样品加入孔中并轻轻混合以避免起泡。不要触摸井壁。对于该程序中的每个步骤，将试剂或样品添加到测定板的总分配时间不应超过10分钟。这将确保每个移液步骤的相等的经过时间，而不会中断。建议复制所有标准品和标本，尽管不是必需的。为避免交叉污染，在添加标准品，样品和试剂之间更换移液器吸头。此外，对每种试剂使用分离的储库。
  • 孵育：为了确保准确的结果，需要在孵育步骤中适当粘附板密封剂。在孵化步骤之间不允许孔长时间未被覆盖。一旦将试剂添加到孔条中，在测定期间不要让条带干燥。必须控制孵育时间和温度。
  • 洗涤：洗涤程序至关重要。在每个步骤中*去除液体对于试剂盒的良好性能是*的。后一次清洗后，通过抽吸或倾析除去任何残留的清洗液，并去除板底部的任何水滴或指纹。洗涤不足将导致精度差和吸光度读数错误升高。
  • 控制反应时间：观察加入TMB底物后的颜色变化（例如每10分钟观察一次），如果颜色太深，则提前加入终止溶液以避免过强的反应，这将导致吸光度读数不准确。
  • TMB底物  很容易被污染。保护它免受光线和物理污染。 
  • 环境湿度可能对从试剂盒获得的结果产生影响。如果您工厂的湿度低于60％，建议使用加湿器。

 

测试原理

用于夹心ELISA试剂盒

该试剂盒中提供的微量滴定板预先涂有对靶抗原特异的抗体。然后将标准品或样品加入适当的微量滴定板孔中，用对靶抗原特异的生物素缀合的抗体制剂。接下来，将与辣根过氧化物酶（HRP）缀合的抗生物素蛋白加入每个微孔板孔中并孵育。在添加TMB底物溶液后，仅含有靶抗原，生物素缀合的抗体和酶缀合的抗生物素蛋白的孔将显示颜色变化。通过添加硫酸溶液终止酶 – 底物反应，并且在450nm±10nm的波长下通过分光光度法测量颜色变化。然后通过比较样品的OD与标准曲线确定样品中靶抗原的浓度。

适用于竞争性ELISA试剂盒

该测定采用竞争性抑制酶免疫测定技术。将靶抗原特异性的单克隆抗体预先包被在微孔板上。在生物素标记的靶抗原和未标记的靶抗原（标准品或样品）之间启动竞争性抑制反应，其中预涂的抗体对靶抗原具有特异性。温育后，洗去未结合的缀合物。接下来，将与辣根过氧化物酶（HRP）缀合的抗生物素蛋白加入每个微孔板孔中并孵育。结合的HRP缀合物的量是反向正比于样品中的靶抗原的浓度。加入底物溶液后，显色的强度与样品中靶抗原的浓度成比例。

结果计算

用于夹心ELISA试剂盒

平均每个标准品，对照品和样品的重复读数，然后减去平均零标准光密度。通过绘制每个标准品的平均OD和浓度构建标准曲线，并通过图表上的点绘制宜拟合曲线，或在log-log图纸上创建标准曲线，其中y轴上的目标抗原浓度和吸光度x轴。还建议使用绘图软件（例如，曲线专家1.30）。如果样品已稀释，则从标准曲线读取的浓度必须乘以稀释倍数。

适用于竞争性ELISA试剂盒

该测定采用竞争性抑制酶免疫测定技术，因此样品中的靶抗原浓度与测定信号强度之间存在负相关。平均每个标准品，对照品和样品的重复读数。在对数 – 对数或半对数图纸上创建标准曲线，在y轴上记录目标抗原浓度，在x轴上记录吸光度。通过标准点绘制宜拟合直线，或者可以通过回归分析确定。还建议使用绘图软件（例如，曲线专家1.30）。如果样品已稀释，则从标准曲线读取的浓度必须乘以稀释倍数。

灵敏度

该测定的灵敏度或检测下限（LLD）被定义为可以与零区分的低蛋白质浓度。通过将两个标准偏差加到二十个零标准重复的平均光密度值并计算相应的浓度来确定。

夹心ELISA试剂盒的典型数据

为了使计算更容易，我们绘制标准的OD值（X轴）与标准的已知浓度（Y轴），尽管浓度是自变量，OD值是因变量。然而，标准曲线的OD值可以根据测定性能的条件（例如操作者，移液技术，洗涤技术或温度效应）而变化，建议绘制数据的对数以建立每个测试的标准曲线。有关典型的标准曲线，请参阅套件中包含的手册。

确定所有套件精度的一般方法如下所述。可根据要求提供个人批量套件的规格。

  • 测定内精密度（测定内的度）：分别在一个平板上测试3个具有低，中和高水平指数的样品20次。
  • 批间精密度（测定之间的度）：在3个不同的平板上测试3个具有低，中和高水平指数的样品，每个平板8个重复。
  • CV（％）= SD /平均值（X）100
    • 分析内：CV <10％
    • Inter-Assay：CV <12％

稳定性

我们的ELISA试剂盒的稳定性取决于活性丧失的速率。在适当的储存条件下，我们的试剂盒的失效率在失效日期内通常低于5％。

为尽量减少外部对我们套件性能的影响，应始终控制操作程序和实验室条件。需要特别注意的因素包括：室温，空气湿度和培养箱温度。还强烈建议整个测定由相同的实验者从开始到结束进行。

分析程序摘要

用于夹心ELISA试剂盒

  • 准备所有试剂，样品和标准品;
  • 每孔加入100μL标准品或样品。在37 o C 孵育2小时;
  • 吸出并加入100μL制备的检测试剂A（即用型试剂盒中的检测溶液A）。在37 o C 孵育1小时;
  • 吸3次洗净;
  • 加入100μL制备的检测试剂B（即用型试剂盒中的检测溶液B）。在37 o C 孵育1小时;
  • 吸取并洗涤5次;
  • 加入90μL底物溶液。在37 o C 孵育15-25分钟;
  • 加入50μL终止液。立即读取450nm。

适用于竞争性ELISA试剂盒

  • 准备所有试剂，样品和标准品;
  • 每孔加入50μL标准品或样品。然后立即加入50μL制备的检测试剂A（即用型试剂盒中的检测溶液A）。摇晃和混合。在37oC孵育1小时;
  • 吸3次洗净;
  • 加入100μL制备的检测试剂B（即用型试剂盒中的检测溶液B）。在37oC孵育1小时;
  • 吸取并洗涤5次;
  • 加入90μL底物溶液。在37oC孵育15-25分钟;
  • 加入50μL终止液。立即读取450nm。

重要的提示

  • 受现有条件和科学技术的限制，不可能对供应商提供的原材料进行全面的鉴定和分析测试。因此，可能存在一些定性和/或技术风险。
  • 终的实验结果将与产品的有效性，终用户的操作技能和实验环境密切相关。请确保有足够的样本可以获得准确的结果。
  • 不同批次的试剂盒在检测范围，灵敏度和显色时间上可能略有不同。请*按照套件中包含的使用说明书进行实验。我们的电子版仅供参考。
  • 不要将试剂从一个试剂盒中混合或替换为另一个试剂盒。仅使用制造商提供的试剂。
  • 在储存和孵育期间保护所有试剂免受强光照射。所有试剂瓶盖应紧密关闭，以防止液体蒸发和微生物污染。
  • 当次打开板时，孔中可能存在雾状物质。它对终的测定结果没有任何影响。在需要之前，不要从储存袋中取出微量滴定板。
  • 试剂准备和装载过程中的程序不正确，以及读板器的参数设置不正确可能导致错误的结果。在450±10nm波长下带宽为10nm或更小且光密度范围为0-3OD或更大的微孔板读数器可用于吸光度测量。请仔细阅读说明书并在实验前调整仪器。
  • 即使是同一个实验者也可能从两个独立的实验中获得不同的结果。为了获得更好的可重复结果，应该控制测定中每个步骤的操作。此外，建议在每批次的一般测定之前进行初步实验。
  • 每个套件都经过了几次严格的质量控制测试。但是，由于某些意外的运输条件或不同的实验室设备，终用户的结果可能与我们的内部数据不一致。不同批次的试剂盒之间的测定内差异也可能来自上述因素。
  • 来自不同制造商的相同产品的套件可能会产生不同的结果，因为我们没有将我们的产品与其他制造商进行比较。
  • 该试剂盒中的标准品以及抗体制备中使用的抗原通常是重组蛋白质。不同表达的序列，表达系统和/或纯化方法可用于制备重组蛋白。在我们的试剂盒中，抗体和抗体对的筛选技术也存在差异。因此，我们无法保证我们的试剂盒能够检测其他公司生产的重组蛋白。我们不建议使用Reddot Biotech ELISA试剂盒检测其他重组蛋白。
  • 有效期：12个月。
  • 说明手册也适用于48T套件，但48T套件中的所有试剂都减少了一半。

预防

提供与该试剂盒一起使用的终止溶液是酸溶液。使用此试剂时，请佩戴眼睛，手，脸和衣物。

 

货号

品名

规格

品牌

RD-ACE2-Ra

Rat Angiotensin I Converting Enzyme 2 (ACE2) ELISA Kit

96T

reddotbiotech

RD-ACE2-Ra

Rat Angiotensin I Converting Enzyme 2 (ACE2) ELISA Kit

48T

reddotbiotech

RD-ACVAB-Hu

Human Activin AB (ACVAB) ELISA Kit

96T

reddotbiotech

RD-ACVAB-Hu

Human Activin AB (ACVAB) ELISA Kit

48T

reddotbiotech

RD-ACVA-Hu

Human Activin A (ACVA) ELISA Kit

96T

reddotbiotech

RD-ACVA-Hu

Human Activin A (ACVA) ELISA Kit

48T

reddotbiotech

RD-ACVA-Mu

Mouse Activin A (ACVA) ELISA Kit

96T

reddotbiotech

RD-ACVA-Mu

Mouse Activin A (ACVA) ELISA Kit

48T

reddotbiotech

RD-ADIPOR1-Ra

Rat Adiponectin Receptor 1 (ADIPOR1) ELISA Kit

96T

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RD-ADIPOR1-Ra

Rat Adiponectin Receptor 1 (ADIPOR1) ELISA Kit

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RD-ADIPOR2-Hu

Human Adiponectin Receptor 2 (ADIPOR2) ELISA Kit

96T

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RD-ADIPOR2-Hu

Human Adiponectin Receptor 2 (ADIPOR2) ELISA Kit

48T

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Rat Adiponectin Receptor 2 (ADIPOR2) ELISA Kit

96T

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Rat Adiponectin Receptor 2 (ADIPOR2) ELISA Kit

48T

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RD-ADP-b

Bovine Adiponectin (ADP) ELISA Kit

96T

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RD-ADP-b

Bovine Adiponectin (ADP) ELISA Kit

48T

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RD-ADP-c

Canine Adiponectin (ADP) ELISA Kit

96T

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RD-ADP-c

Canine Adiponectin (ADP) ELISA Kit

48T

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RD-ADP-Ch

Chicken Adiponectin (ADP) ELISA Kit

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RD-ADP-Ch

Chicken Adiponectin (ADP) ELISA Kit

48T

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RD-ADP-Hu

Human Adiponectin (ADP) ELISA Kit

96T

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RD-ADP-Hu

Human Adiponectin (ADP) ELISA Kit

48T

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RD-ADP-Mu

Mouse Adiponectin (ADP) ELISA Kit

96T

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RD-ADP-Mu

Mouse Adiponectin (ADP) ELISA Kit

48T

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RD-ADP-p

Porcine Adiponectin (ADP) ELISA Kit

96T

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RD-ADP-p

Porcine Adiponectin (ADP) ELISA Kit

48T

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RD-ADP-Ra

Rat Adiponectin (ADP) ELISA Kit

96T

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RD-ADP-Ra

Rat Adiponectin (ADP) ELISA Kit

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Rabbit Adiponectin (ADP) ELISA Kit

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RD-ADP-Rb

Rabbit Adiponectin (ADP) ELISA Kit

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RD-AGT-Hu

Human Angiotensinogen (AGT) ELISA Kit

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RD-AGT-Hu

Human Angiotensinogen (AGT) ELISA Kit

48T

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RD-AGT-Mu

Mouse Angiotensinogen (AGT) ELISA Kit

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RD-AGT-Mu

Mouse Angiotensinogen (AGT) ELISA Kit

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Human Angiotensin II Receptor 1 (AGTR1) ELISA Kit

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RD-AGTR1-Hu

Human Angiotensin II Receptor 1 (AGTR1) ELISA Kit

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RD-AGTR1-Ra

Rat Angiotensin II Receptor 1 (AGTR1) ELISA Kit

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RD-AGTR1-Ra

Rat Angiotensin II Receptor 1 (AGTR1) ELISA Kit

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RD-AGTR2-Hu

Human Angiotensin II Receptor 2 (AGTR2) ELISA Kit

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RD-AGTR2-Hu

Human Angiotensin II Receptor 2 (AGTR2) ELISA Kit

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RD-AGTR2-Ra

Rat Angiotensin II Receptor 2 (AGTR2) ELISA Kit

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RD-AGTR2-Ra

Rat Angiotensin II Receptor 2 (AGTR2) ELISA Kit

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Rat Angiotensinogen (AGT) ELISA Kit

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RD-AGT-Ra

Rat Angiotensinogen (AGT) ELISA Kit

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RD-ALCAM-Hu

Human Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule (ALCAM) ELISA Kit

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RD-ALCAM-Hu

Human Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule (ALCAM) ELISA Kit

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RD-ALCAM-Mu

Mouse Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule (ALCAM) ELISA Kit

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RD-ALCAM-Mu

Mouse Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule (ALCAM) ELISA Kit

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RD-ALCAM-Ra

Rat Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule (ALCAM) ELISA Kit

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RD-ALCAM-Ra

Rat Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule (ALCAM) ELISA Kit

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RD-Ang1-7-c

Canine Angiotensin 1-7 (Ang1-7) ELISA Kit

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RD-Ang1-7-c

Canine Angiotensin 1-7 (Ang1-7) ELISA Kit

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RD-Ang1-7-Hu

Human Angiotensin 1-7 (Ang1-7) ELISA Kit

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RD-Ang1-7-Hu

Human Angiotensin 1-7 (Ang1-7) ELISA Kit

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Mouse Angiotensin 1-7 (Ang1-7) ELISA Kit

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Mouse Angiotensin 1-7 (Ang1-7) ELISA Kit

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Rat Angiotensin 1-7 (Ang1-7) ELISA Kit

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Rat Angiotensin 1-7 (Ang1-7) ELISA Kit

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Human Angiotensin 1-9 (Ang1-9) ELISA Kit

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Human Angiotensin 1-9 (Ang1-9) ELISA Kit

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RD-AngI-c

Canine Angiotensin I (AngI) ELISA Kit

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RD-AngI-c

Canine Angiotensin I (AngI) ELISA Kit

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Human Angiotensin I (AngI) ELISA Kit

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RD-AngI-Hu

Human Angiotensin I (AngI) ELISA Kit

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Bovine Angiotensin II (AngII) ELISA Kit

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RD-AngII-b

Bovine Angiotensin II (AngII) ELISA Kit

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RD-AngII-Hu

Human Angiotensin II (AngII) ELISA Kit

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RD-AngII-Hu

Human Angiotensin II (AngII) ELISA Kit

48T

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RD-AngIII-Hu

Human Angiotensin III (AngIII) ELISA Kit

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RD-AngIII-Hu

Human Angiotensin III (AngIII) ELISA Kit

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RD-AngII-Mu

Mouse Angiotensin II (AngII) ELISA Kit

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RD-AngII-Mu

Mouse Angiotensin II (AngII) ELISA Kit

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Rat Angiotensin II (AngII) ELISA Kit

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RD-AngII-Ra

Rat Angiotensin II (AngII) ELISA Kit

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Rabbit Angiotensin II (AngII) ELISA Kit

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RD-AngII-Rb

Rabbit Angiotensin II (AngII) ELISA Kit

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Mouse Angiotensin I (AngI) ELISA Kit

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RD-AngI-Mu

Mouse Angiotensin I (AngI) ELISA Kit

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Rat Angiotensin I (AngI) ELISA Kit

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RD-AngI-Ra

Rat Angiotensin I (AngI) ELISA Kit

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Human ATPase, H+/K+ Exchanging Alpha Polypeptide (ATP4a) ELISA Kit

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RD-ATP4a-Hu

Human ATPase, H+/K+ Exchanging Alpha Polypeptide (ATP4a) ELISA Kit

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RD-ATP4a-Mu

Mouse ATPase, H+/K+ Exchanging Alpha Polypeptide (ATP4a) ELISA Kit

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RD-ATP4a-Mu

Mouse ATPase, H+/K+ Exchanging Alpha Polypeptide (ATP4a) ELISA Kit

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Rat ATPase, H+/K+ Exchanging Alpha Polypeptide (ATP4a) ELISA Kit

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RD-ATP4a-Ra

Rat ATPase, H+/K+ Exchanging Alpha Polypeptide (ATP4a) ELISA Kit

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Human B-Cell CLL/Lymphoma 11A (Bcl11A) ELISA Kit

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RD-Bcl11A-Hu

Human B-Cell CLL/Lymphoma 11A (Bcl11A) ELISA Kit

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RD-Bcl2-b

Bovine B-Cell Leukemia/Lymphoma 2 (Bcl2) ELISA Kit

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RD-Bcl2-b

Bovine B-Cell Leukemia/Lymphoma 2 (Bcl2) ELISA Kit

48T

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RD-Bcl2-Hu

Human B-Cell Leukemia/Lymphoma 2 (Bcl2) ELISA Kit

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RD-Bcl2-Hu

Human B-Cell Leukemia/Lymphoma 2 (Bcl2) ELISA Kit

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Rat B-Cell CLL/Lymphoma 2 Like Protein 2 (Bcl2L2) ELISA Kit

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RD-Bcl2L2-Ra

Rat B-Cell CLL/Lymphoma 2 Like Protein 2 (Bcl2L2) ELISA Kit

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RD-Bcl2L-Mu

Mouse B-Cell CLL/Lymphoma 2 Like Protein (Bcl2L) ELISA Kit

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RD-Bcl2L-Mu

Mouse B-Cell CLL/Lymphoma 2 Like Protein (Bcl2L) ELISA Kit

48T

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RD-Bcl2-Mu

Mouse B-Cell Leukemia/Lymphoma 2 (Bcl2) ELISA Kit

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RD-Bcl2-Mu

Mouse B-Cell Leukemia/Lymphoma 2 (Bcl2) ELISA Kit

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RD-Bcl2-Ra

Rat B-Cell Leukemia/Lymphoma 2 (Bcl2) ELISA Kit

96T

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RD-Bcl2-Ra

Rat B-Cell Leukemia/Lymphoma 2 (Bcl2) ELISA Kit

48T

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RD-Bcl9-Mu

Mouse B-Cell CLL/Lymphoma 9 (Bcl9) ELISA Kit

96T

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RD-Bcl9-Mu

Mouse B-Cell CLL/Lymphoma 9 (Bcl9) ELISA Kit

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RD-BDNF-c

Canine Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) ELISA Kit

96T

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RD-BDNF-c

Canine Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) ELISA Kit

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RD-BDNF-Ch

Chicken Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) ELISA Kit

96T

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RD-BDNF-Ch

Chicken Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) ELISA Kit

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RD-BDNF-Gu

Guinea pig Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) ELISA Kit

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RD-BDNF-Gu

Guinea pig Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) ELISA Kit

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RD-BDNF-Hu

Human Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) ELISA Kit

96T

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RD-BDNF-Hu

Human Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) ELISA Kit

48T

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RD-BDNF-Mu

Mouse Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) ELISA Kit

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RD-BDNF-Mu

Mouse Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) ELISA Kit

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RD-BDNF-p

Porcine Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) ELISA Kit

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RD-BDNF-p

Porcine Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) ELISA Kit

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RD-BDNF-Ra

Rat Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) ELISA Kit

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RD-BDNF-Ra

Rat Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) ELISA Kit

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Rabbit Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) ELISA Kit

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RD-BDNF-Rb

Rabbit Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) ELISA Kit

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RD-BLC1-Hu

Human B-Lymphocyte Chemoattractant 1 (BLC1) ELISA Kit

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RD-BLC1-Hu

Human B-Lymphocyte Chemoattractant 1 (BLC1) ELISA Kit

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Mouse B-Lymphocyte Chemoattractant 1 (BLC1) ELISA Kit

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RD-BLC1-Mu

Mouse B-Lymphocyte Chemoattractant 1 (BLC1) ELISA Kit

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RD-BLC1-Ra

Rat B-Lymphocyte Chemoattractant 1 (BLC1) ELISA Kit

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RD-BLC1-Ra

Rat B-Lymphocyte Chemoattractant 1 (BLC1) ELISA Kit

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RD-BLK-Hu

Human B-Lymphoid Tyrosine Kinase (BLK) ELISA Kit

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RD-BLK-Hu

Human B-Lymphoid Tyrosine Kinase (BLK) ELISA Kit

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RD-BMP2-b

Bovine Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) ELISA Kit

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RD-BMP2-b

Bovine Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) ELISA Kit

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Chicken Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) ELISA Kit

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RD-BMP2-Ch

Chicken Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) ELISA Kit

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RD-BMP2-Hu

Human Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) ELISA Kit

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RD-BMP2-Hu

Human Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) ELISA Kit

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RD-BMP2-Mu

Mouse Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) ELISA Kit

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RD-BMP2-Mu

Mouse Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) ELISA Kit

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RD-BMP2-p

Porcine Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) ELISA Kit

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RD-BMP2-p

Porcine Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) ELISA Kit

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Rat Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) ELISA Kit

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RD-BMP2-Ra

Rat Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) ELISA Kit

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RD-BMP2-Rb

Rabbit Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) ELISA Kit

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RD-BMP2-Rb

Rabbit Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) ELISA Kit

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RD-BMP4-b

Bovine Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-b

Bovine Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-c

Canine Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-c

Canine Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-Ch

Chicken Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-Ch

Chicken Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-g

Goat Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-g

Goat Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-Hu

Human Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-Hu

Human Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-Mu

Mouse Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-Mu

Mouse Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-p

Porcine Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-p

Porcine Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-Ra

Rat Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-Ra

Rat Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-Rb

Rabbit Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMP4-Rb

Rabbit Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) ELISA Kit

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RD-BMPR1A-Hu

Human Bone Morphogenetic Protein Receptor 1A (BMPR1A) ELISA Kit

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RD-BMPR1A-Hu

Human Bone Morphogenetic Protein Receptor 1A (BMPR1A) ELISA Kit

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Mouse Bone Morphogenetic Protein Receptor 1A (BMPR1A) ELISA Kit

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RD-BMPR1A-Mu

Mouse Bone Morphogenetic Protein Receptor 1A (BMPR1A) ELISA Kit

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RD-BMPR1A-Ra

Rat Bone Morphogenetic Protein Receptor 1A (BMPR1A) ELISA Kit

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RD-BMPR1A-Ra

Rat Bone Morphogenetic Protein Receptor 1A (BMPR1A) ELISA Kit

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RD-C1QTNF1-Hu

Human C1q And Tumor Necrosis Factor Related Protein 1 (C1QTNF1) ELISA Kit

96T

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RD-C1QTNF1-Hu

Human C1q And Tumor Necrosis Factor Related Protein 1 (C1QTNF1) ELISA Kit

48T

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Human C1q And Tumor Necrosis Factor Related Protein 3 (C1QTNF3) ELISA Kit

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RD-C1QTNF3-Hu

Human C1q And Tumor Necrosis Factor Related Protein 3 (C1QTNF3) ELISA Kit

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Human C1q And Tumor Necrosis Factor Related Protein 9 (C1QTNF9) ELISA Kit

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RD-C1QTNF9-Hu

Human C1q And Tumor Necrosis Factor Related Protein 9 (C1QTNF9) ELISA Kit

48T

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RD-cAMP-Ge

General Cyclic Adenosine Monophosphate (cAMP) ELISA Kit

96T

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RD-cAMP-Ge

General Cyclic Adenosine Monophosphate (cAMP) ELISA Kit

48T

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RD-CSF2Rb-Hu

Human Colony Stimulating Factor 2 Receptor Beta (CSF2Rb) ELISA Kit

96T

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RD-CSF2Rb-Hu

Human Colony Stimulating Factor 2 Receptor Beta (CSF2Rb) ELISA Kit

48T

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RD-CTGF-b

Bovine Connective Tissue Growth Factor (CTGF) ELISA Kit

96T

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RD-CTGF-b

Bovine Connective Tissue Growth Factor (CTGF) ELISA Kit

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RD-CTGF-Hu

Human Connective Tissue Growth Factor (CTGF) ELISA Kit

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RD-CTGF-Hu

Human Connective Tissue Growth Factor (CTGF) ELISA Kit

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RD-CTGF-Mu

Mouse Connective Tissue Growth Factor (CTGF) ELISA Kit

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Mouse Connective Tissue Growth Factor (CTGF) ELISA Kit

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RD-CTGF-p

Porcine Connective Tissue Growth Factor (CTGF) ELISA Kit

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RD-CTGF-p

Porcine Connective Tissue Growth Factor (CTGF) ELISA Kit

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RD-CTGF-Ra

Rat Connective Tissue Growth Factor (CTGF) ELISA Kit

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RD-CTGF-Ra

Rat Connective Tissue Growth Factor (CTGF) ELISA Kit

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RD-CTGF-Rb

Rabbit Connective Tissue Growth Factor (CTGF) ELISA Kit

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RD-CTGF-Rb

Rabbit Connective Tissue Growth Factor (CTGF) ELISA Kit

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RD-CTLA4-Hu

Human Cytotoxic T-Lymphocyte Associated Antigen 4 (CTLA4) ELISA Kit

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RD-CTLA4-Hu

Human Cytotoxic T-Lymphocyte Associated Antigen 4 (CTLA4) ELISA Kit

48T

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RD-EDN1-c

Canine Endothelin 1 (EDN1) ELISA KitRD-EDN1-c

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RD-EDN1-c

Canine Endothelin 1 (EDN1) ELISA KitRD-EDN1-c

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RD-EDN1-Gu

Guinea pig Endothelin 1 (EDN1) ELISA Kit

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RD-EDN1-Gu

Guinea pig Endothelin 1 (EDN1) ELISA Kit

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RD-EDN1-Hu

Human Endothelin 1 (EDN1) ELISA Kit

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RD-EDN1-Hu

Human Endothelin 1 (EDN1) ELISA Kit

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RD-EDN1-Mu

Mouse Endothelin 1 (EDN1) ELISA Kit

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RD-EDN1-Mu

Mouse Endothelin 1 (EDN1) ELISA Kit

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RD-EDN1-p

Porcine Endothelin 1 (EDN1) ELISA Kit

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RD-EDN1-p

Porcine Endothelin 1 (EDN1) ELISA Kit

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RD-EDN1-Ra

Rat Endothelin 1 (EDN1) ELISA Kit

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RD-EDN1-Ra

Rat Endothelin 1 (EDN1) ELISA Kit

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RD-EDN1-Rb

Rabbit Endothelin 1 (EDN1) ELISA Kit

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RD-EDN1-Rb

Rabbit Endothelin 1 (EDN1) ELISA Kit

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RD-EDN2-Hu

Human Endothelin 2 (EDN2) ELISA Kit

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RD-EDN2-Hu

Human Endothelin 2 (EDN2) ELISA Kit

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RD-EDN2-Ra

Rat Endothelin 2 (EDN2) ELISA Kit

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RD-EDN2-Ra

Rat Endothelin 2 (EDN2) ELISA Kit

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RD-EGF-Hu

Human Epidermal Growth Factor (EGF) ELISA Kit

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RD-EGF-Hu

Human Epidermal Growth Factor (EGF) ELISA Kit

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RD-EGF-Mu

Mouse Epidermal Growth Factor (EGF) ELISA Kit

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RD-EGF-Mu

Mouse Epidermal Growth Factor (EGF) ELISA Kit

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Porcine Epidermal Growth Factor (EGF) ELISA Kit

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RD-EGF-p

Porcine Epidermal Growth Factor (EGF) ELISA Kit

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RD-EGFR2-Hu

Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 (EGFR2) ELISA Kit

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RD-EGFR2-Hu

Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 (EGFR2) ELISA Kit

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RD-EGFR2-Mu

Mouse Epidermal Growth Factor Receptor 2 (EGFR2) ELISA Kit

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RD-EGFR2-Mu

Mouse Epidermal Growth Factor Receptor 2 (EGFR2) ELISA Kit

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RD-EGFR2-Ra

Rat Epidermal Growth Factor Receptor 2 (EGFR2) ELISA Kit

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RD-EGFR2-Ra

Rat Epidermal Growth Factor Receptor 2 (EGFR2) ELISA Kit

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RD-EGF-Ra

Rat Epidermal Growth Factor (EGF) ELISA Kit

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RD-EGF-Ra

Rat Epidermal Growth Factor (EGF) ELISA Kit

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RD-EGFR-Hu

Human Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) ELISA Kit

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RD-EGFR-Hu

Human Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) ELISA Kit

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RD-EGFR-Mu

Mouse Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) ELISA Kit

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RD-EGFR-Mu

Mouse Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) ELISA Kit

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RD-EGFR-Ra

Rat Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) ELISA Kit

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RD-EGFR-Ra

Rat Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) ELISA Kit

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RD-EG-VEGF-b

Bovine Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF) ELISA Kit

96T

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RD-EG-VEGF-b

Bovine Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF) ELISA Kit

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RD-EG-VEGF-Hu

Human Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF) ELISA Kit

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RD-EG-VEGF-Hu

Human Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF) ELISA Kit

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RD-EG-VEGF-Mu

Mouse Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF) ELISA Kit

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RD-EG-VEGF-Mu

Mouse Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF) ELISA Kit

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RD-EG-VEGF-Ra

Rat Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF) ELISA Kit

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Human Fibroblast Growth Factor 10 (FGF10) ELISA Kit

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Mouse Fibroblast Growth Factor 10 (FGF10) ELISA Kit

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Human Fibroblast Growth Factor 11 (FGF11) ELISA Kit

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上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

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Thewellbio常见问题

发表于由

Thewellbio应用3D培养技术可以实现体外研究细胞在体内的行为与对刺激的反应，如温度、pH变化、营养吸收、转运及分化等。公司研发供应的细胞体外3D培养体系采用无动物源成分的多糖凝胶材料，模拟出天然的细胞胞外基质环境，同时具有多用途、高精度、高性价比、操作简便和节省时间等特点。因此3D培养技术越来越多地被应用到药物筛选、组织工程、临床前研究、细胞治疗和基础研究等领域。

 

对于*次使用VitroGel 3D系统，请阅读这些常见问题，以确保*效果。

1.我应该选择哪种产品，VitroGel 3D或VitroGel 3D-RGD？

如果您使用贴壁细胞系，建议您使用VitroGel 3D-RGD。如果您使用非贴壁细胞系，或者您想要更灵活地控制生长因子/蛋白质，我们建议您使用VitroGel 3D。请support@thewellbio.com如果你需要一个定制的产品。

2.产品有多稳定？

VitroGel 3D在4-40°C之间是稳定的。请勿将产品冷冻或将水凝胶溶液加热至80°C以上。该产品在室温下4℃或6个月未开封未开封18个月。一旦打开，请密封盖子，保持在4°C，以防止1个月内污染和使用。

3.如何调整水凝胶形成时间并作为可注射水凝胶进行准备？

水凝胶形成时间高度取决于水凝胶溶液和触发溶液（细胞培养基/PBS）的混合比例。我们建议将水凝胶溶液和介质/ PBS以4：1（v / v）的比例混合成可注射的水凝胶。水凝胶在混合后30分钟内应稳定。较高的混合比（水凝胶溶液：介质> 4：1）会导致更长的水凝胶形成时间。低混合比（水凝胶溶液：介质<1：1）可能导致不可注射的水凝胶。

4.水凝胶形成速度太快，我该怎么办？

水凝胶形成时间取决于几个因素，如凝胶浓度，培养基的离子强度和混合比。如果水凝胶形成太快，我们建议用DI水稀释水凝胶溶液，然后与细胞培养基混合使其凝胶化。稀释后，尝试保持4：1的比例（稀释的水凝胶溶液：细胞培养基= 4：1）进行混合，因为这是我们用于我们的水凝胶系统的大多数培养基的*比例。

5.当将凝胶溶液与细胞培养基混合时，我可以做什么来保持气泡形成？

气泡问题与将凝胶溶液与细胞培养基混合后溶液粘度增加有关。这里有一些有助于减少气泡形成的建议：
1）将水凝胶溶液预热至37°C以降低凝胶溶液的粘度。
2）将凝胶溶液和细胞培养基轻轻混合，并沿着孔板的壁缓慢移液，不引入气泡。（有些用户喜欢使用涡流而不是移液管进行混合以避免气泡）
3）在与细胞培养基混合之前用DI水稀释凝胶溶液。
4）切割移液器吸头以获得更好的流量。
5）如果混合后仅形成小气泡，在水凝胶顶部加入一层培养基，孵育过夜。

6.如何调整zui终水凝胶的硬度？

通过在与细胞培养基/PBS混合之前稀释水凝胶溶液可以调节zui终水凝胶的硬度。请使用无菌去离子水稀释水凝胶溶液。不要使用PBS或其他离子溶液。如果您需要比原始产品更高的水凝胶刚度，请与我们。

7.应该使用什么种子密度？

我们建议对该水凝胶系统使用200,000-1,000,000个细胞/ mL。您可能需要相应地每1-2天更换一次覆盖的培养基。

8.细胞在VitroGel 3D水凝胶中生长多长时间？

我们已经测试了水凝胶系统中细胞的生长长达两周。依靠细胞系，3D细胞培养可以持续更长时间。一旦单元格的数量和大小增加，您可能需要更频繁地更换封面介质。

10.球形形成前多久？

通常，球形体形成在水凝胶体系中培养约5-10天。形成时间可以根据细胞系而变化。

11.3D文化后，我能从水凝胶中收获细胞么？

是的，通过使用简单的移液和离心方案，可以在3D培养后收获细胞。请下载完整的使用手册，并阅读从水凝胶收集细胞的细节。

12.为什么水凝胶松散地粘到未处理的组织培养板上？

未处理的组织培养板具有更疏水的表面，其减少了孔板表面上的水凝胶/细胞的附着。为了更好的表现，我们建议使用经过处理的组织培养板与VitroGel 3D系统。

13.胶凝是否可逆？

是。如果水凝胶以适当的混合比制备，例如 4：1（水凝胶溶液：细胞培养基= 4：1），水凝胶将进行特殊的可逆机械性能 – 剪切稀化和自愈，这意味着水凝胶可以在剪切力下转移到液体中，例如移液或一旦剪切力停止，再次注入和恢复为水凝胶。除了这种机制，我们还可以操纵水凝胶对温度变化或其他方法是可逆的。请support@thewellbio.com获取定制解决方案。

14.在VitroGel 3D中生长的细胞是否可以分化？

是。通过使用新鲜的VitroGel 3D或其他2D或3D培养方法，可以从VitroGel 3D水凝胶系统和亚培养物中再次收获细胞一段时间。

15如何使用VitroGel 3D进行共培养或夹心培养（逐层）？

可以使用VitroGel 3D水凝胶系统进行两种或多种不同细胞类型的共培养。除了添加不同的细胞类型与水凝胶溶液共同培养，每种细胞类型也可以与水凝胶溶液混合并逐层加入。在*层水凝胶变得稳定后，仔细地将第二层细胞/水凝胶混合物覆盖在*层细胞/水凝胶的顶部。

16.我可以将细胞外基质蛋白或其他分子化合物添加到VitroGel 3D水凝胶中吗？

是。细胞外基质蛋白或其他分子化合物可以在水凝胶形成之前或之后加入到VitroGel 3D水凝胶体系中。在水凝胶形成之前，将蛋白质或分子化合物加入细胞培养基中，然后与VitroGel 3D水凝胶溶液混合。在形成水凝胶之后，可以将蛋白质或分子化合物加入渗透到纳米纤维基质中的水凝胶的顶部。请注意，由于蛋白质或化学化合物中含有的盐，水凝胶形成时间和zui终凝胶硬度可能会发生变化。如果改变水凝胶性质，我们建议在与VitroGel 3D水凝胶溶液混合之前用蔗糖溶液洗涤蛋白质或化合物以除去盐。

17.VitroGel 3D是否与共焦显微镜或其他成像技术的染色和免疫荧光方案相兼容？

是。细胞可以在水凝胶内染色或从水凝胶中收获，然后染色。大多数荧光染料和免疫试剂可以用于标准方案。请阅读VitroGel 3D的完整使用手册了解更多详情。此外，VitroGel 3D水凝胶在不同的成像系统中是透明和兼容的，用于细胞观察。

18.我可以对在VitroGel 3D中培养的细胞的蛋白质和核酸进行分子分析吗？

是。在VitroGel 3D水凝胶中培养后，可以从水凝胶中收获细胞，并根据标准程序进行分子分析。

19.水凝胶是否可以从组织培养中撤出，以进行切片？

是的，一旦水凝胶变得稳定，你可以把它从文化中分离出来。添加*培养基后30-60分钟内水凝胶应稳定。

20.我可以使用VitroGel 3D进行体内研究吗？

是。可以在水凝胶形成之前或之后注射VitroGel 3D用于体内研究。在水凝胶形成之前，可以将VitroGel 3D溶液直接注射到动物中，后者随着其与生理环境的离子化合物接触而变成水凝胶。此外，VitroGel 3D水凝胶在水凝胶形成后具有先进的注射性能。以适当的比例混合水凝胶溶液和细胞培养基/PBS（我们推荐水凝胶溶液：培养基/PBS = 4:1v / v），zui终的水凝胶变得可注射用于体内研究。使用这种方法，细胞或​​其他化合物可以在注射前在水凝胶中很好地混合。

 

上海金畔生物科技有限公司专业从事生命科学研究领域产品代理及部分生物产品自主研发，以为科研人员提供高品质科研产品为己任，是您值得信赖的科研伙伴！
           

 

 

有关血清的常见问题

发表于由

血清是细胞培养中zui重要的元素之一。因此，我们特别整理了一些实验室里常会遇到的问题，供大家参考：

1. 保存血清的方法?

我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

2. 如何解冻血清才不会使产品质量受损?

我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。

3. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?

血清中沉淀物的出现有许多种原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。

若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。

4. 为什么要热灭活血清?

加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

5. 有必要做热灭活吗?

实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或*没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

因此我们建议您，若非必须，您可以不需要做热处理这一步。如此一来，不但节省您宝贵的时间，更确保血清的质量!

6. 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?

胎牛血清没有预老化，储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在－20℃储存胎牛血清，避免反复冻融。

7. 如何避免沉淀物的产生?

我们建议您在使用血清的时候，注意下列的操作:

1

解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，实验显示非常容易产生沉淀物。

2

解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。

3

请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。

4

血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。

5

若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

 

8. Qualified和 Certified 胎牛血清 有什么差别?

Certified 胎牛血清包括了Qualified胎牛血清执行的所有的标准检验程序，,除了这些标准检测，Certified胎牛血清还有一些附加的检测：

        zui终内毒素含量的检测
        噬菌体检验
        生物化学检测
        激素的检测
        血红蛋白检测
        Sf9 细胞生长促进及方法学检测

9. 如何评估ES细胞合格的胎牛血清?

使用D3 ES细胞。这是一个对于胎牛血清中生长促进、生长抑制和分化因子非常敏感的细胞系。

相关生长效率分析：

当ES细胞以非常低的密度传入包含10％胎牛血清的生长培养基中，检测启动和支持ES细胞克隆的能力。

细胞毒分析：

当以非常低的密度传入包含30％胎牛血清的生长培养基中，检测ES细胞和feeder细胞的生长能力。

相关形态学和分化分析：

检测胎牛血清支持未分化ES细胞克隆的能力。通过碱性磷酸酶活性评估分化程度。未分化的ES细胞小颜色深红粉红，分化的细胞较大，丰满，颜色较浅。

所有的分析在没有ESGRO的情况下进行，培养基中出现ESGRO会掩盖由胎牛血清所导致的问题。（ESGRO或LIF经常用来保持ES细胞处于未分化状态。）

培养发现大约8批血清中有1批可以用来培养ES细胞