emfret成立于2002年，emfret公司专注心血管和血液系统研究用抗体研发和生产，emfret公司的抗体不仅适用于流式分析、WB检测，还可用于免疫组化/免疫荧光及免疫共沉淀检测。
产品列表
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货号
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产品名称
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规格
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M011-0
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mouse GPVI（金畔现货）
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0.1 mg
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M011-1
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mouse GPVI（金畔现货）
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1.5 mL
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M025-0
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Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)
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0.5 mg
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M025-1
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Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)
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1.5 mL
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M025-2
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Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)
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1.5 mL
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M025-3
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Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)
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1.5 mL
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M021-0
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Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)
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0.5 mg
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M021-1
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Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)
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1.5 mL
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M022-0
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Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)
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0.5 mg
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M023-2
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Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)（金畔现货）
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1.5 mL
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M024-0
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Integrin alphaIIb (GPIIb, CD41)
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6 mg
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M030-0
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Integrin beta3 chain (GPIIIa, CD61)
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0.5 mg
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M031-0
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Integrin beta3 chain (GPIIIa, CD61)
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0.5 mg
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M031-1
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Integrin beta3 chain (GPIIIa, CD61)
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1.5 mL
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M040-0
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GPIbalpha (CD42b)
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0.5 mg
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M040-1
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GPIbalpha (CD42b)
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1.5 mL
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M040-2
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GPIbalpha (CD42b)（金畔现货）
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1.5 mL
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M040-3
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GPIbalpha (CD42b)（金畔现货）
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1.5 mL
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M041-0
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GPIbalpha (CD42b)
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0.5 mg
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M041-1
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GPIbalpha (CD42b)
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1.5 mL
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M042-0
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GPIbalpha (CD42b)（金畔现货）
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0.5 mg
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M042-1
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GPIbalpha (CD42b)
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1.5 mL
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M043-0
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GPIbalpha (CD42b)（金畔现货）
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0.5 mg
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M043-1
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GPIbalpha (CD42b)（金畔现货）
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1.5 mL
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M050-0
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GPIbbeta (CD42c)mouse and human
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0.5 mg
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M050-1
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GPIbbeta (CD42c)mouse and human（金畔现货）
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1.5 mL
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M051-0
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GPIX (CD42a)
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0.5 mg
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M051-1
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GPIX (CD42a)
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1.5 mL
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M060-1
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GPV (CD42d)
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1.5 mL
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M061-0
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GPV (CD42d)
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0.5 mg
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M061-1
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GPV (CD42d)
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1.5 mL
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M070-0
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Integrin alpha2 chain (CD49b, GPIa)
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0.5 mg
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M070-1
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Integrin alpha2 chain (CD49b, GPIa)
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1.5 mL
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M071-0
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Integrin alpha2 chain (CD49b, GPIa)
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0.5 mg
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M071-1
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Integrin alpha2 chain (CD49b, GPIa)
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1.5 mL
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M080-0
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Integrin alpha5 chain (CD49e)mouse and human
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0.5 mg
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M080-1
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Integrin alpha5 chain (CD49e)mouse and human
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1.5 mL
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M110-0
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CD9
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0.5 mg
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M110-1
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CD9
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1.5 mL
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M120-0
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CD31 (PECAM-1)
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0.5 mg
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M130-0
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CD62P (P-selectin)
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0.5 mg
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M130-1
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CD62P (P-selectin)
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1.5 mL
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M130-2
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CD62P (P-selectin)
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1.5 mL
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P150-1
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von Willebrand Factor (vWF)
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1.5 mL
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P140-1
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fibrinogen
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1.5 mL
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P180-1
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negative control
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1.0 mL
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P190-1
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negative control
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1.0 mL
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P190-2
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negative control
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1.0 mL
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P190-3
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negative control
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1.0 mL
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R300
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Antibodies for Mouse Platelet Depletion（金畔现货）
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0.5 mg
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C301
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Antibodies for Mouse Platelet Depletion（金畔现货）
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0.5 mg
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D200
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Two-Color Analysis of Mouse Platelet Activation
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2.0 ml
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X488
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In Vivo Mouse Platelet Labeling
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0.1 mg
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X649
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In Vivo Mouse Platelet Labeling（金畔现货）
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0.1 mg
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抗体相关实验技术Protocols
一、小鼠血小板表面糖蛋白的流式细胞术分析
缓冲液和试剂准备：
Tris缓冲盐水/肝素（TBS/Hep）：20 mM Tris/HCl；137 mM NaCl；pH 7.3；含有20 U/ml肝素。
磷酸盐缓冲液（PBS）：137 mM NaCl；2.7 mM KCl；1.5 mM KH2PO4；8 mM Na2HPO4；pH 7.14。
改良台氏液/改良Tyrode''s溶液：134 mM NaCl；0.34 mM Na2HPO4；2.9 mM KCl；12 mM NaHCO3；20 mM Hepes；pH 7.0；5 mM葡萄糖；0.35%（w/v）牛血清白蛋白。
腺苷三磷酸双磷酶Apyrase：溶于水（10 U/mL），在-20°C下储存。
前列环素Prostaglandin（Prostaglandin 2, PGI2）：溶于水（1 mM），在-20°C下储存。
CaCl2：1 M溶于水。
稀释或洗涤全血的制备：
1、用肝素化玻璃毛细管（如环帽）从眶后神经丛抽取50 µL血液，放入1.5 ml含有200 µL Tris缓冲盐水/肝素（20 U/ml）的试管中。
2、在1 mL Tyrode缓冲液中稀释，用于流式细胞仪分析。
3、为了制备洗涤过的血液，将稀释的血液以900 x g离心5分钟，去除上清液，并将沉淀重悬在1.25 mL Tyrode缓冲液中。
4、在实验开始前直接加入1 mM CaCl2。
注：对于凝血酶诱导的血小板活化，必须去除血浆以防止抗凝血酶活性。
血小板制备：
1、制备洗涤过的血小板是一种更耗时的方法，需要大量的血液，但产生的血小板制剂可以使用数小时。
2、用1.5 cm玻璃毛细管从眶后丛收集0.5-1 mL血液，放入含有200 µL TBS/肝素（20 U/ml）的1.5 mL管中。去除含有一些红细胞的上清。
3、以500 x g离心样品5分钟，并将富含血小板的血浆（PRP）转移到新的试管中。
4、将血小板悬浮液以300 x g离心8分钟，并将不含任何红细胞的PRP转移到新的试管中。
5、加入0.5 µM前列环素（PGI2），以1300 x g离心5分钟。
6、将血小板颗粒重新悬浮在1 mL Tyrode缓冲液中，加入0.02 U/mL腺苷三磷酸双磷酶和0.5 µM前列环素，在37℃下孵育5分钟，并在1300 x g下离心5分钟。
7、重复步骤5，将血小板颗粒重悬于0.5 ml Tyrode缓冲液中，加入0.02 U/mL腺苷三磷酸双磷酶，并在37℃下孵育30分钟。
血小板表面糖蛋白的单色分析：
1、将5 µL特异性或阴性对照抗体和25 µL稀释的全血在分析管中混合，涡旋混匀1-2秒。
2、在室温下孵育15分钟。
3、加入400 µL PBS停止反应，并在30分钟内进行分析。
如所述，将样品与FITC缀合的对照IgG（黑线）、GPVI抗体或GPV抗体孵育。血小板通过前向散射（FSC）/侧散射（SSC）血小板通过前向（FSC）/侧向（SSC）散射特征进行筛选。在单独的直方图中显示了被筛选（R1）的血小板的荧光（FL1）强度。RBC：红细胞。
血小板活化的双色分析：
1、将5 µL特异性或阴性对照抗体与5 µL泛血小板标记物一起加入测定管中。
2、此时，加入小体积（<5 µL）的任何额外的试剂（如抑制剂）。
3、加入26 µL稀释的全血或经洗涤过的血小板（100万），涡旋混匀1-2秒。
在室温下孵育15分钟。加入400 µL PBS停止反应，并在30分钟内进行分析。
小鼠血小板分别与PBS或0.1 U/mL的凝血酶（thrombin）一起与FITC和PE结合的mAbs一起孵育。通过GPIX或GPIIbIIIa（FL1; gate 1）的表达对血小板进行了筛选。
二、免疫组织化学（用丙酮固定冷冻切片）
请注意：不建议在（对）甲醛固定的样本上进行免疫组织化学染色，因为大多数大鼠抗体在这些条件下对小鼠组织的效果很差。
1、将冷冻组织的切片放在玻片上，并在4°C下的冰冷100%丙酮中固定20分钟。在室温下干燥一整夜。
2、为了减少试剂的用量，在玻片上的组织切片周围可以用防水笔画一个疏水圈。在所有后续的步骤中，这个圈起来的区域都不应该干燥。因此，建议在潮湿的盒子中进行孵育步骤。
3、在PBS中孵育玻片20分钟。
4、使用过氧化物酶结合的二抗时，将玻片在室温下与0.03%的H2O2孵育10分钟以抑制内源过氧化物酶活性。在PBS中三次洗涤玻片，每次5分钟。
5、用PBS稀释（比例1:10或1:100）的封闭液（二抗体宿主物种的血清），室温下孵育玻片1小时。
6、一抗（2-10 µg/ml）室温孵育2小时。
7、吸取多余液体，然后在PBS中洗涤三次，每次5分钟。
8、用荧光素或过氧化物酶结合的二抗（例如：亲和纯化的驴抗大鼠IgG-FITC或HRP）覆盖玻片，按照说明书在封闭液中稀释，室温下孵育1小时。
9、吸取多余液体，PBS洗涤三次，每次5分钟。
10、荧光染色的样本可以直接通过荧光显微镜分析。
11、为了可视化过氧化物酶标记的组织，用新鲜制备的3-氨基-9-乙基咔唑（AEC）底物覆盖玻片，并在显微镜下可见红色染色，时间可在5至30分钟之间变化。在橙色背景染色出现之前，用去离子水冲洗停止反应。用伊红染色30-240秒，然后在温水中冲洗玻片20分钟。使用水溶性封装溶液固定切片。
三、免疫沉淀
缓冲液和试剂准备：
PBS/EDTA：137 mM NaCl、2.7 mM KCl、1.5 mM KH2PO4、8.0 mM Na2HPO4 x 2H2O，pH 7.3；5 mM EDTA。
IP缓冲液：40 mM Tris/HCl、0.3 M NaCl、1 mM EDTA、2 mM PMSF、10 µg/mL Leupeptin蛋白酶抑制剂、10 µg/mL Aprotinin抑肽酶、1 µg/mL Pepstatin胃蛋白酶抑制剂。
Igepal非离子表面活性剂：10%的H2O溶液。
2x SDS样品缓冲液：10% β-巯基乙醇（用于还原缓冲液）、10% Tris缓冲液（1.25 M）、20%甘油、4%SDS、0.02%溴酚蓝。
1、将小鼠血小板或细胞在1 mL PBS/EDTA（5分钟，1300 x g）中洗涤3次，并使用IP缓冲液重悬。
2、加入1% Igepal 在室温下溶解血小板（15–20分钟）。
3、10000 x g下离心5分钟去除细胞碎片，并将上清液转移到新的试管中。
4、加入20 µL洗涤过的protein G agarose（PGA）。在4°C下混匀孵育至少3小时。
5、3000 x g离心样品5分钟。将上清液转移到新的试管中，以说明书中给定的浓度（通常在2–5 µg/mL之间）加入抗体，30分钟后加入25 µL洗涤过的PGA。在4°C下混匀孵育至少2小时，最好过夜。
6、将样品在3000 x g下离心1分钟，向PGA中加入1 mL含有1% Igepal的1 x IP缓冲液。在3000 x g下离心1分钟。
7、用IP缓冲液中洗涤PGA两次（3000 x g离心1分钟）。
8、加入25 µL 1x SDS样品缓冲液（还原或非还原），将PGA重悬，煮沸5分钟。9、然后将样品冷冻（-20°C）以备日后使用，或者进行SDS-PAGE和免疫印迹分析。
四、免疫印迹分析（Western Blot Analysis）
缓冲液和试剂准备：
裂解缓冲液：40mM Tris/HCl、0.3 M NaCl、1 mM EDTA、0.05% NaN3、1% Igepal。
PBS：137 mM NaCl、2.7 mM KCl、1.5 mM KH2PO4、8.0 mM Na2HPO4 x 2H2O，pH 7.3。
5%脱脂牛奶-PBS：含5%脱脂奶粉的PBS。
PBS/T：PBS含0.1%吐温20。
1%脱脂牛奶–PBS/T：含1%脱脂牛奶的PBS/T。
所有步骤都可在室温下进行：
1、在裂解缓冲液中制备小鼠血小板或细胞的裂解物，并与（2x）SDS样品缓冲液在95°C下孵育5分钟。
2、根据说明书，在还原或非还原条件下，通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离蛋白质，并将蛋白质转移到PVDF膜上。
3、用5%脱脂牛奶封闭膜1小时。
4、加入PBS/T-1%牛奶稀释的一抗（2-5 µg/mL），孵育1小时。
5、用PBS/T冲洗膜两次，30分钟。洗涤程序可以减少到三次，每次10分钟。
6、加入PBS/T-1%牛奶稀释的二抗（HRP偶联的抗大鼠Ig），孵育45-60分钟。
7、用PBS/T冲洗膜两次，30分钟。
8、使用ECL（化学发光）显色。
emfret热卖产品
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货号
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产品名称
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规格
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品牌
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R300
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Antibodies for Mouse Platelet Depletion（现货）
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0.5 mg
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emfret
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M023-2
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Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)（现货）
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1.5 mL
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emfret
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X488
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anti – GPIbbeta derivative Rat IgG DyLight 488 in vivo platelet labeling
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100 μg
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emfret
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C301
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Sterile non-immune rat IgG（现货）
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0.5 mg
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emfret
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M040-1
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GPIbalpha (CD42b)（现货）
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1.5 mL
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emfret
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D200
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JON/A Rat IgG2b PE flow cytometry 1 mL
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200 tests
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emfret
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X649
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In Vivo Mouse Platelet LabelingClone：anti – GPIbbeta derivative Isotype：Rat IgG 标记：DyLight 649 Appli（现货）
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0.1 mg
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emfret
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M040-2
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Xia.G5 Rat IgG2b PE FC（现货）
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1.5 mL
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emfret
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M011-1
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JAQ1/ Rat (Wistar) IgG2a FITC FC（现货）
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1.5 mL
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emfret
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M130-1
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CD62P (P-selectin)
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1.5 mL
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emfret
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M040-3
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GPIbalpha (CD42b)（现货）
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1.5 mL
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emfret
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M043-0
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GPIbalpha (CD42b) Xia.B2 Rat IgG2a purif. （现货）
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0.5 mg
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emfret
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M050-1
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GPIbbeta (CD42c)Xia.C3 Rat IgG2a FITC（现货）
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1.5 mL
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emfret
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M025-1
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Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61) Leo.F2 Rat IgG2aFITC
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1.5 mL
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emfret
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M042-0
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Xia G7 Rat IgG1 purif（现货）
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0.5 mg
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emfret
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M051-1
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GPIX (CD42a) Xia.B4 Rat IgG1
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1.5 mL
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emfret
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M011-0
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GPVI JAQ1 Rat IgG2a purif（现货）
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0.1 mg
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emfret
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M021-1
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Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61) Leo.H4 Rat IgG2b
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1.5 mL
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emfret
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M130-2
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CD62P (P-selectin) Wug.E9 Rat IgG
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1.5 mL
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emfret
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M050-0
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GPIbbeta (CD42c) mouse and humanClone：Xia.C3 Isotype：Rat IgG2a 标记：purif.
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0.5 mg
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emfret
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M043-1
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GPIbalpha (CD42b) Xia.B2 Rat IgG2a（现货）
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1.5 mL
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emfret
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M070-1
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Integrin alpha2 chain (CD49b, GPIa) Sam.G4 FITC
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1.5 mL
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emfret
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M071-1
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Integrin alpha2 chain (CD49b, GPIa) Sam.C1 FITC
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1.5 mL
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emfret
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M120-0
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CD31 (PECAM-1) Pec.H3 purif.
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0.5 mg
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emfret
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M051-0
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Purified Rat Anti-Mouse GPIX (CD42a)
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0.5 mg/mL
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emfret
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P140-1
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fibrinogen polyclonal Rabbit IgGFITC FC
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1.5 mL
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emfret
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P150-1
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von Willebrand Factor (vWF)
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1.5 mL
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emfret
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P190-2
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negative control polyclonal Rat IgGPE FC
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1.0 mL
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emfret
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M030-0
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Integrin beta3 chain (GPIIIa, CD61) Luc.A5 Rat IgG2apurif.
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0.5 mg
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emfret
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M025-2
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Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)
|
1.5 mL
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emfret
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M025-3
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Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)
|
1.5 mL
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emfret
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