proaxsis PA004-1操作指南

proaxsis PA004-1操作指南

NEATstik®(10盒)

PA004-1(单个试剂盒)和PA004-10(10个试剂盒)

NEATstik®是一项快速的即时护理测试,可以监测痰液样本中活性中性粒细胞弹性蛋白酶的水平。

NEATstik®通常以10个测试盒的形式提供。如果需要,可以提供单项测试,费用为£28英镑,另加运费和增值税(如果有)

 

  1. 预期用途

NEATstik®是一种一次性体外诊断试剂,用于定性检测痰液样本中的活性中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)。本产品仅供医疗保健专业人士使用。

 

  1. 背景

中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)是一种丝氨酸蛋白酶,储存在中性粒细胞中直至活化和释放。NE有三种形式:作为活性酶、无活性酶原或抑制剂结合酶。活性NE是一种降解酶,在正常生理情况下,参与

在炎症和消除微生物感染中1。然而,在肺部疾病中,当发现高浓度的活性NE时,这种降解能力引起过度的组织降解,损伤气道壁有助于破坏性和恶性的炎症周期2。

痰中的活性NE是感染和炎症的已确定生物标志物,与炎性肺病的感染严重程度相关,包括但不限于囊性纤维化(CF)、慢性阻塞性

肺部疾病(COPD)和支气管扩张症3-5。持续监测痰液中这种临床上有用的生物标志物可能有助于这些肺部疾病的管理。

  1. 试验原理

NEATstik®利用ProteaseTag®技术特异性检测痰液样本中的活性NE。

NEATstik®由封装在塑料盒内的侧流试纸组成。试纸条由膜和垫组成,置于固体载体上,应用结合物和两条反应线:供试(T)线和对照线

(C)线。结合物是ProteaseTag®(旨在与活性NE特异性相互作用)和有色金颗粒的混合物。供试(T)细胞系由可检测NE的抗体和对照(C)细胞系可检测结合物组成。

样品稀释后,向NEATstik®的样品端口加入小体积,开始检测过程。稀释样本沿试纸移动,并与结合物相互作用。结合物中的ProteaseTag®将与样本中存在的活性NE结合,沿试纸上行并与供试品结合

(T)线。过量结合物将与对照(C)线结合。

检测线的外观确认了样品中存在的活性NE高于预先设定的阈值。

质控线的外观证实检测正确进行。

  1. 试剂盒组分

每个复合包装盒包含10个套件。

每个试剂盒包含:

密封箔袋中的1×NEATstik®侧流检测

1 xNEATstik®样本稀释缓冲液(20 mL)1 x痰液稀释罐

1 x双球吸管1 x刻度吸管1 x说明书

 

需要但未提供的材料

痰液收集罐称量秤或天平秒表/计时器

  1. 试验程序

收集样品

采集样本进行检测时,要求患者将痰液(不是唾液)咳入痰液采集壶(未提供)。建议立即检测样品。

样品制备

加入NEATstik®前,必须稀释痰液样本。

  1. 将痰液稀释罐的底部放在称量天平上。称量天平去皮重(零)。
  1. 将痰液稀释罐保持在称量天平上,使用抹刀(连接在痰液稀释罐的盖子上)将1-2 g痰液从痰液收集罐中转移到痰液稀释罐中。
  2. 记录转移痰液的重量(g)。痰液稀释罐应保持在称量天平上。
  3. 使用以下计算公式计算NEATstik®样品稀释缓冲液产生10倍稀释所需的量:

痰液重量 = g

x 9

= g NEATstik®

样品稀释缓冲液

  1. 称量天平去皮重(零)。
  2. 使用刻度移液管,将NEATstik®样本稀释缓冲液转移至痰液稀释罐中,直至计算重量。
  3. 将盖子放在痰液稀释罐上,并确保其拧紧。
  4. 倒置痰液稀释槽,使痰液与缓冲液混合

10次。

  1. 检测方法(续)

执行测试

  1. 从铝箔包装中取出NEATstik®,置于水平面上,观察窗朝上。
  2. 取下痰液稀释罐的盖子。
  3. 使用双球吸管吸取稀释痰液样本。尽量确保

读取结果和质量控制

如果检测成功完成,对照(C)线将以红线显示(颜色强度可能不同)。如果质控(C)线不可见,则结果无效,应使用新样本和新的检测试剂盒重复检测。

如果TEST(T)线可见,则确认痰液样本中存在大于预设阈值的活性NE。

  1. 性能特征

使用58份冷冻痰液样本评估NEATstik®检测的性能。使用ProteaseTag®Active NE免疫测定法(ProAxsis Ltd)定量测定活性NE。

  • 42份样本有痰液NE浓度

< 8µg/mL = 阴性

  • 16份样本有痰液NE浓度

> 8µg/mL = 阳性

该检测对16份NE定量高于8µg/mL的痰液样本中的16份给出了阳性结果(100%灵敏度),对42份NE定量低于8µg/mL的痰液样本中的36份给出了阴性结果(86%特异性)。

 

  1. 使用限制

仅用于稀释痰液样本

为获得准确结果,请遵循提供的说明

NEATstik®结果必须结合其他临床和患者进行评价

  1. 处置

痰液样本和使用的检测组分具有潜在生物危害性。根据当地临床废物指南适当处置使用过的检测试剂盒和痰液样本。

 

  1. 参考文献
  1. Pham,C.(2008)International Journal of Biochemistry&Cell Biology,40(6-7),1317-1333.
  2. Sandhaus,R.&Turino,G.(2013)COPD,10(S1):60-63.
  3. Sagel,S. et al(2012)American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine,186(9):857-865
  4. Mayer-Hamblett,N. et al(2007)美国呼吸与重症医学杂志,175:822-828
  5. Chalmers,J.D. et al(2016)American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine 195:1384–1393.


 

仅溶液-无痰液“结块”。

医疗保健专业人员可获得的数据。

NEATstik®不能定量痰液样本中的活性NE。


 

 

  1. 定量活性中性粒细胞弹性蛋白酶
  1. 将样品应用于NEATstik®上的椭圆形样品端口。

 

  1. 读取结果前,等待10 min(使用定时器)。

 

如果TEST(T)线不可见,痰液样本中存在的任何活性NE均不超过预设阈值。

 

  1. 故障排除

未出现对照(C)线

试验无效。使用新套件重复。

 

  1. 警告和注意事项

请勿使用超过有效期的组件

请勿混合不同试剂盒批次的组分

本检测仅供一次性使用。请勿重复使用

处理痰液样本和进行检测时,应穿戴合适的防护

 

  1. 储存

在室温下储存试剂盒。

如果在推荐的储存条件下,每个检测试剂盒仍保存在原始包装中,则可使用至标签上打印的失效日期。

从密封袋中取出后,应立即使用NEATstik®侧流试验。

NEATstik®样本稀释缓冲液应在开瓶后立即使用。

 

proaxsis ProteaseTag主动弹性蛋白酶免疫操作指南

proaxsis  ProteaseTag ® 主动弹性蛋白酶免疫操作指南

ProteaseTag® Active Neutrophil Elastase Immunoassay

 

免疫测定分为两个部分:
1)一个较大的盒子[58 cm x 38 cm x 35 cm; 体重±10公斤(体重主要是由于凝胶袋)],其包含需要保持在4℃冷却并且必须投入在接收到冰箱的液体瓶,

2)一个小的内“冷冻箱” [39厘米× 27厘米x 28厘米; 重量±7公斤(重量主要归因于干冰)],我们在干冰上单独发送。

因此,每个套件将[快递]分2个单独的包裹寄送,总重为±17公斤。

试剂盒内容物

 

冷冻箱组件

 

NE标记

1小瓶含4µl(浓度10 mM)捕获探针

N,N-二甲基甲酰胺(DMF)

人中性粒细胞弹性蛋白酶标准品

2瓶含6µl天然NE(浓度100µg/ml)的酸性缓冲液

NE结合物

1瓶含25µl

稳定性溶液中与辣根过氧化物酶(HRP)结合的抗人中性粒细胞弹性蛋白酶抗体

 

主要试剂盒组分

 

免疫分析板

96孔链霉亲和素包被微量滴定板(预封闭)

NE清洗缓冲液A浓缩液

24 mL 25倍浓度的缓冲表面活性剂(含防腐剂)

NE洗涤缓冲液B浓缩液

8 mL含防腐剂的25倍浓度缓冲液

NE标准品稀释剂

15 mL含防腐剂的缓冲液(即用型)

NE试剂稀释剂

2 x 13 mL含防腐剂的缓冲表面活性剂(即用型)

TMB底物

12 mL四甲基联苯胺(即用型)

终止液

6 mL 2N硫酸(即用型)

封板机

4个粘合条

 

需要但未提供的材料

  • 去离子水或蒸馏水
  • 经校准的移液器和相应的移液器吸头
  • 试管和试管架
  • 清洁稀释清洗缓冲液的容器
  • 涡旋
  • 培养箱(37 ℃)
  • 能够在450 nm处读数的经校准的微量滴定板读数器

 

试剂制备

除标准品和样品外,所有试剂均应在使用前恢复至室温。使用前,标准品和样品必须始终置于冰上。

提供了足够的试剂,可获得两条标准曲线。

_清洗缓冲液A-用576 mL去离子水稀释24 mL浓缩液,制成600 mL清洗缓冲液A

_清洗缓冲液B–量取8 mL浓缩液,加入192 mL去离子水中,制成200 mL清洗缓冲液B

_NE结合物–用11980µl NE试剂稀释剂稀释20µl NE结合物,制备12 mL结合物溶液(600倍稀释)

_NE-Tag–用11997.6µl NE试剂稀释剂稀释2.4µl NE-Tag,制备12 mL NE-Tag溶液(5000倍稀释)

_标准品-

  • 移取495µl NE标准品稀释液至一个微量管中
  • 移取250µl NE标准品稀释液至6个后续微量管中
  • 向试管中加入5µl NE标准品。从一个试管移取250µl至下一个试管,进行连续稀释。转移至下一试管前,充分混匀各试管。这将创建具有以下NE浓度的校准曲线:1000、500、250、125、62.5、31.25和15.625 ng/mL
  • 使用NE标准品稀释剂作为零(空白)标准品

_样品-使用NE标准品稀释剂适当稀释。

 

试验程序

所有样品和标准品均应重复测定两次。

  1. 按照上文所述制备所有试剂、标准品和样品。建议在加至微孔板之前立即制备标准品和样品
  2. 从铝箔袋中取出平板
  3. 使用300µl/孔清洗缓冲液A抽吸并清洗每个孔。重复该程序两次,共

3次清洗

  1. 向各孔中加入100µl稀释的NE-Tag。用封板覆膜覆盖,并在37 ℃下孵育30 min
  2. 使用300µl/孔清洗缓冲液B抽吸并清洗每个孔。重复该步骤两次,总计

3次清洗

  1. 向各孔中加入100µl稀释标准品、样品和空白。用封板覆膜覆盖,并在37 ℃下孵育30 min
  2. 使用300µl/孔清洗缓冲液A抽吸并清洗每个孔。重复该程序两次,共

3次清洗

  1. 向每个孔中加入100µl稀释的结合物。用封板覆膜覆盖,并在37 ℃下孵育60 min
  2. 使用300µl/孔清洗缓冲液A抽吸并清洗每个孔。重复该程序两次,共

3次清洗

  1. 每孔加入100µl TMB底物溶液。用封板覆膜覆盖,并在37 ℃下孵育10 min。避光保存
  2. 向各孔中加入50µl终止液。孔内颜色应从蓝色变为黄色
  3. 在15 min内使用设置为450 nm的酶标仪测定每个孔的光密度。

 

结果计算

计算各标准品、对照品和样品重复两次读数的平均值,并从终结果中减去零空白。通过生成log x-轴绘制标准曲线,并将曲线拟合为样条曲线或4参数逻辑拟合。如果样品已被稀释,则应根据稀释因子校正报告的浓度。

 

检测试剂盒的局限性

正确存储所有组件(_s)

_使用所有未开封的试剂在其有效期内

_请勿与其他批次或来源的试剂混合或替代

_所有程序均应按照方案进行

_如果样品产生的结果高于高标准品,则应使用NE标准品稀释剂进一步稀释样品并重复。

 

技术提示

_本试剂盒仅供有资质的人员使用

_按照国家和当地法规以安全方式处置容器和未使用的内容物

_为避免交叉污染,在添加各标准品、样品和试剂之间更换移液器吸头。此外,每种试剂使用单独的储液器

_为确保结果准确,在孵育步骤期间必须适当粘附封板覆膜

_囊性纤维化患者痰液或支气管肺泡灌洗液(BALf)用NE标准稀释液稀释至少100倍。COPD样本的建议起始稀释度为10倍

INCYTO C-WellTM技术指南

上海金畔生物INCYTO C-WellTM技术指南

使用INCYTO C-WellTM的通用、高通量和大小可控的细胞球体培养方案

一般信息

本指南的目的:

C-WellTM技术指南包含有关C-WellTM细胞球体培养平台的信息。本指南提供了球体形成和试剂制备的完整方案。

储存和有效期:

室温下储存时,C-WellTM的有效期为36个月。

不要重复使用,否则会遇到以下问题:污染、细胞球体形成失败和富含蛋白质的表面。

请勿将C-WellTM储存在紫外线辐射环境中。

预期用途:

仅供研究使用。不适用于人类或动物的诊断或治疗用途。

 

C孔描述TM

C-WellTM:

C-WellTM是一个革命性的细胞球体培养平台,以高通量的方式生成各种类型的尺寸控制的细胞球体。使用培养细胞球体的技术是一种悬滴法。

每个悬滴中的环境聚集细胞,然后形成单个球体。但悬滴法有几个局限性。悬滴法的主要局限性是:“劳动强度”、“低通量”、“培养时间相对较短”、“无法获得额外的新鲜生长培养基”和“细胞球体大小不均匀”。

与悬滴法相比,C-WellTM具有以下优势

任何其他商业化球体培养平台:“由于易于获得培养基更换,延长培养期10-30天”、“通过控制细胞接种密度,某些应用的培养期极短,为2-3天”、“无直接细胞-细胞接触的共培养准备系统,例如Transwell小室”、“生成尺寸受控的细胞球体”、“由于无剪切应力结构,易于改变装置中的生长培养基”、“适用于各种细胞类型”和“无限通量(一个装置可获得361个细胞球体)”。

 

方法

使用C孔制备用于细胞球体培养的试剂和材料TM

  • 靶细胞生长培养基
  • 胰蛋白酶/EDTA或ACCUTASETM
  • 台盼蓝
  • 磷酸盐缓冲液(PBS)1X
  • 70%乙醇
  • 100%乙醇
  • 去离子水(DDW),可选
  • 牛血清白蛋白(BSA)4%溶液,可选

使用C孔制备细胞球体培养设备TM

  • C-WellTM
  • 锥形管(15 mL或50 mL)
  • T75烧瓶或细胞培养皿
  • 细胞过滤器(100 μm孔径)
  • 皮氏培养皿(60 mm或100 mm,未处理)
  • 血细胞计数器(例如DHC-N01、INCYTO)
  • 移液器和吸头(1 mL和200 μL)
  • 血清移液器及吸头(10 mL)
  • 洁净工作台
  • CO2培养箱
  • 相差显微镜检查
  • 吸引器
  • 离心机
  • 酒精灯

A. C孔预处理TM 细胞接种前

  1. 将生长培养基、1X PBS(或DDW)和100%乙醇加热至室温。

生长培养基的推荐近似体积为14 mL/1器械,1X PBS为24 mL/1器械,100%乙醇为8 mL/1器械。

  1. 在超净工作台中拆除C-WellTM的包装。
  2. 使用无菌镊子,从一个外缘朝向另一个外缘将C-WellTM置于60 mm培养皿上,以防止C-WellTM和培养皿之间产生气泡。
  3. 向制备的平皿中加入8 mL 100%乙醇。
  4. 用1 mL移液器反复移液,轻轻去除微孔中的气泡。
  5. 在培养皿一角抽吸100%乙醇。请勿在每个微孔中抽吸溶液。
  6. 向培养皿中加入8 mL 1X PBS,再次去除气泡。
  7. 在培养皿一角抽吸1X PBS。请勿在每个微孔中抽吸溶液。
  8. 重复上述7、8步两次。
  9. 向培养皿中加入7 mL生长培养基,并充分去除气泡。
  10. 将培养皿置于培养箱中至少24小时。
  11. 用1 mL移液器反复移液,轻轻去除微孔中的气泡。
  12. 在培养皿一角吸出生长培养基,并在细胞接种前加入7 mL新鲜生长培养基。

B-1.靶细胞单细胞悬液的制备(贴壁细胞用)

  1. 将生长培养基和适当浓度的胰蛋白酶/EDTA溶液预热至37 ℃。
  2. 加入10 mL 1X PBS,轻轻清洗细胞培养瓶(T75)或培养皿(100 mm)。
  3. 吸取1X PBS溶液。
  4. 加入2 mL胰蛋白酶/EDTA溶液,并将烧瓶置于37℃CO2培养箱中1 ~ 2 min(取决于细胞类型)。
  5. 轻轻敲击烧瓶,观察细胞。大部分细胞应分离
  6. 用4 mL生长培养基或适当的中和溶液中和胰蛋白酶/EDTA处理的细胞悬液。
  7. 通过反复移液*分离细胞。
  8. 用血细胞计数器计数细胞数量(例如INCYTO C-Chip、DHC-N01)
  9. 在适当离心力下离心细胞悬液。
  10. 通过抽吸去除上清液。
  11. 将细胞团块重悬于生长培养基中。细胞悬液的终接种密度和终体积应分别为0.1 ~ 0.5 × 106个/mL和7 mL。这些值因细胞类型而异。

 

B-2.靶细胞单细胞悬液的制备(用于悬浮细胞)

  1. 将生长培养基和适当浓度的胰蛋白酶/EDTA溶液(可选)加热至37 ℃。
  2. 通过反复移液使细胞悬液均质化并解聚。
  3. 用血细胞计数器计数细胞数量(例如INCYTO C-Chip、DHC-N01)
  4. 在适当离心力下离心细胞悬液。
  5. 通过抽吸去除上清液。
  6. (可选)加入1 ~ 2 mL胰蛋白酶/EDTA溶液,置于37 °C CO2培养箱中1 ~ 2 min(细胞类型不同)。
  7. (可选)用2 ~ 4 mL生长培养基或适当的中和溶液中和胰蛋白酶/EDTA处理的细胞悬液(因细胞类型而异)。
  8. (可选)在适当离心力下离心细胞悬液。
  9. (可选)通过抽吸去除上清液。
  10. 将细胞团块重悬于生长培养基中。细胞悬液的终接种密度和终体积应分别为0.1 ~ 0.5 × 106个/mL和7 mL。这些值因细胞类型而异。

 

  1. 使用C-Well形成细胞球体TM
    1. 将生长培养基加热至37 ℃。
    2. 用1 mL移液器反复移液,轻轻去除微孔中的气泡。
    3. 吸出培养皿一角的生长培养基,加入7 mL细胞接种密度为0.1 ~ 0.5 × 106个/mL的细胞悬液
    4. 10 ~ 15 min后(因细胞类型而异),轻轻吸出细胞悬液,除去上清液细胞。
    5. 在培养皿一角加入7 mL生长培养基。
    6. 吸出混悬液,并在培养皿一角加入7 mL生长培养基。重复该步骤两次。确保该步骤结束时没有悬浮细胞是非常重要的。如果不是,这些悬浮细胞可能阻碍细胞球体的形成。
    7. 培养皿置37 °C CO2培养箱中孵育24小时。
    8. 每24小时更换一次培养皿中的生长培养基。
 
 

图1 MCF7球体的培养条件。细胞接种密度和清洗时间因细胞类型而异。应通过预实验确定适当的接种密度和洗涤时间。


 

 

图2 MCF7球体的形成。

 

 

 

图3 A549球体的形成。

 

 

图4 HepG2球体的形成。

 

 

图5小鼠神经干细胞(mNSC)球体的形成。与其他传统的球体培养方法相比,C-WellTM可以生成尺寸控制、形状均匀的细胞球体。

  1. 从C孔中分离细胞球体TM
    1. 将生长培养基加热至37 ℃。
    2. 用移液器直接吸取(带1 mL吸头)生长培养基至C-WellTM上。
    3. 重复上述步骤2,直至收集到大部分细胞球体。
    4. 轻轻移取细胞球体溶液。
    5. 将溶液添加到细胞过滤器的一个表面(顶部)。
    6. 翻转滤网,并将生长培养基添加到滤网的另一面(底部)。
    7. 将细胞球体铺板于未经处理的培养皿中。

ESI BIO VascuNet故障排除指南

 

 

 

ESI BIO的使命是成为客户信赖的合作伙伴,将科学发现转化为诊所。我们通过提供突破性的干细胞技术作为研究级和治疗级产品来实现这一目标,从研究到诊所的照明,以帮助我们的客户实现他们治疗疾病的目标。

ESI BIO建立在丰富的创新和科学的基础之上。我们于2000年在新加坡成立了ES Cell International,在那里我们通过制造个可翻译的临床级胚胎干细胞系来创建历史,以便分发给研究界。

 

ESIBIO现在开展业务Alameda CA. 我们是BioTime,Inc。拥有的以干细胞为基础的子公司的骄傲家族的成员,我们从中受益于的科学,知识产权和干细胞技术的深层来源。

ESI BIO   EM2202   VascuNet™故障排除指南

 

VascuNet™ Pericyte Co-Culture Assay

VascuNet™Pericyte Co-Culture Assay将HUVEC和周细胞结合在一个96孔板测定形式的共培养系统中。组分包括细胞,阴性对照,生长和含有补充剂的测定培养基。

SKU: EM2202

更临床相关的共培养测定

VascuNet™Pericyte Co-Culture Assay是一种新型血管生成模型,包括HUVEC和周细胞(PC-Ms),用于研究药物和治疗化合物对96孔板血管形成的影响。PC-M细胞源自使用ESI-017人胚胎干细胞系的专有分化方法。细胞和培养基成分经过严格的质量筛选,以确保重现性。网络维持长达四到六天,允许更广泛和临床相关的模型系统,用于研究化合物对管形成的影响。

特征

· VascuNet管网比其他系统更接近体内血管

· 允许对已建立的血管上的促血管生成化合物和抗血管生成化合物进行长期体外分析

· 周细胞是hESC衍生的,确保易于扩增和可重复的结果

由BioTime,Inc。的子公司ReCyte Therapeutics Inc开发

格式

96孔板

样本类型

小分子,重组蛋白,DNA / RNA构建体或条件培养基

分析时间

管网维持至少4天。

储存和稳定性

根据指示储存,所有套件组件在收到之日起至少可保存3个月。

组件

有关套件组件的完整列表,请下载EM-2202技术数据表

应用

筛选和评估促血管生成化合物或抗血管生成化合物

技术文件

产品支持

 VascuNet™Pericyte共培养分析方案
 VascuNet™故障排除指南
 EM-2202技术数据表

小册子
 VascuNet™Pericyte共培养分析产品说明书

参考

Gerhardt,H。和Betsholtz,C。(2003)血管生成中的内皮 – 周细胞相互作用。Cell Tissue Res 314:15-23。

汉密尔顿,NB,等。(2010)Pericyte介导的毛细血管直径调节:健康和疾病中神经的血管耦合的一个组成部分。Front Neuroenergetics 2:5。Stratman 

,AN,et al。(2009)血管生成管组装期间的周细胞募集刺激内皮基底膜基质形成。血液114:5091-5101。

von Tell,D.,et al。(2006)周细胞和血管稳定性。Exp Cell Res 312:623-629。

 

 

 

ESI BIO产品目录:

 

货号

品名

规格

品牌

GS310

HyStem® Hydrogel Kit

2.5 mL

ESIBIO

GS311

HyStem® Hydrogel Kit

7.5 mL

ESIBIO

GS1004

HyStem® Hydrogel Kit

12.5 mL

ESIBIO

GS310P

HyStem® Hydrogel Kit w/ PEGSSDA

2.5 mL

ESIBIO

GS311P

HyStem® Hydrogel Kit w/ PEGSSDA

7.5 mL

ESIBIO

GS312

HyStem®-C Hydrogel Kit

2.5 mL

ESIBIO

GS313

HyStem®-C Hydrogel Kit

7.5 mL

ESIBIO

GS1005

HyStem®-C Hydrogel Kit

12.5 mL

ESIBIO

GS312P

HyStem®-C Hydrogel Kit w/ PEGSSDA

2.5 mL

ESIBIO

GS313P

HyStem®-C Hydrogel Kit w/ PEGSSDA

7.5 mL

ESIBIO

GS314

HyStem®-HP Hydrogel Kit

2.5 mL

ESIBIO

GS315

HyStem®-HP Hydrogel Kit

7.5 mL

ESIBIO

GS1006

HyStem®-HP Hydrogel Kit

12.5 mL

ESIBIO

GS314P

HyStem®-HP Hydrogel Kit w/ PEGSSDA

2.5 mL

ESIBIO

GS315P

HyStem®-HP Hydrogel Kit w/ PEGSSDA

7.5 mL

ESIBIO

GS1007

HyStem® Hydrogel UV QuickSet Kit

2.5 mL

ESIBIO

GS1008

HyStem® Hydrogel UV QuickSet Kit

7.5 mL

ESIBIO

GS450

PEGgel Kit

1 mL

ESIBIO

GS240

DG Water

10 mL

ESIBIO

GS241

DG Water

20 mL

ESIBIO

GS3007

Extralink® Vial

0.5 mL

ESIBIO

GS3006

Extralink® Vial

2.5 mL

ESIBIO

GS3009

Extralink® Lite Vial

0.5 mL

ESIBIO

GS3008

Extralink® Lite Vial

2.5 mL

ESIBIO

5050

Fibronectin

1 mg

ESIBIO

GS231

Gelin-S® Thiol-modified Gelatin

1 mL

ESIBIO

GS230

Gelin-S® Thiol-modified Gelatin

5 mL

ESIBIO

GS222

Glycosil® Hyaluronic Acid

1 mL

ESIBIO

GS220

Glycosil® Hyaluronic Acid

5 mL

ESIBIO

GS217

Heprasil® Hyaluronic Acid

1 mL

ESIBIO

GS215

Heprasil® Hyaluronic Acid

5 mL

ESIBIO

5010-D

Nutragen® Bovine Collagen

50 mL

ESIBIO

GS711

PEGDA

1 mL

ESIBIO

GS700

PEGDA

1 g

ESIBIO

GS705

PEGDA

5 g

ESIBIO

GS755

PEGSSDA

0.5 mL

ESIBIO

5020

PEPTITE-2000® RGD Peptide

5 mg

ESIBIO

5005-B

PureCol® Collagen

100 mL

ESIBIO

5007-A

VitroCol® Collagen

20 mL

ESIBIO

5051

Vitronectin

0.1 mg

ESIBIO

EM2203

ExoSense™ CD63 Exosome ELISA Kit

96 assays

ESIBIO

EM2202

VascuNet™ CoCulture Assay Kit

1 Kit

ESIBIO

ST11006

BioLiteTM SSEA-1 (DyLight 488) anti-Human/Mouse Antibody

100 µL

ESIBIO

ST11008

BioLiteTM TRA-1-81 (DyLight 488) anti-Human Antibody

100 µL

ESIBIO

ST11023

Nestin anti-Human Antibody

100 µL

ESIBIO

ST11003

Oct4 anti-Human/Mouse Antibody

100 µL

ESIBIO

ST11001

Sox2 anti-Human/Mouse Antibody

100 µL

ESIBIO

ST11013

SSEA-1 anti-Human/Mouse Antibody

100 µL

ESIBIO

ST11014

SSEA-3 anti-Human/Mouse Antibody

100 µL

ESIBIO

ST11015

SSEA-4 anti-Human Antibody

100 µL

ESIBIO

ST11018

TRA-1-60 (PE) anti-Human Antibody

100 µL

ESIBIO

ST11016

TRA-1-60 anti-Human Antibody

100 µL

ESIBIO

ST11017

TRA-1-81 anti-Human Antibody

100 µL

ESIBIO

ST12007

LIF, Mouse Recombinant

10 µg

ESIBIO

ST12008

LIF, Mouse Recombinant

100 µg

ESIBIO

ES-84

PureStem® 4D20.8, NCr-fac Progenitor

ea

ESIBIO

ES-98

PureStem® E15, Meso-prx/latp Progenitor

ea

ESIBIO

ES-283

PureStem® 7PEND24, NCr-fac Progenitor

ea

ESIBIO

ES-278

PureStem® 7SMOO32, NCr-fac Progenitor

ea

ESIBIO

ES-250

PureStem® SK11, NCr-fac Progenitor

ea

ESIBIO

ES-268

PureStem® MEL2, NCr-fac Progenitor

ea

ESIBIO

ES-256

PureStem® SM30, NCr-fac Progenitor

ea

ESIBIO

ES-335

PureStem® ES-335 Meso-latp Progenitor

ea

ESIBIO

ES-100

PureStem® E72 BETATROPHIN+ Progenitor

ea

ESIBIO

ES-1001

PureStem® ES-1001 GDF11+ Progenitor

ea

ESIBIO

ES-184

PureStem® EN7 Progenitor

ea

ESIBIO

ES-101

PureStem® ES-101 Progenitor

ea

ESIBIO

ES-139

PureStem® ES-139 Progenitor

ea

ESIBIO

ES-154

PureStem® ES-154 Progenitor

ea

ESIBIO

ES-198

PureStem® ES-198 Progenitor

ea

ESIBIO

ES-199

PureStem® ES-199 Progenitor

ea

ESIBIO

ES-209

PureStem® ES-209, Meso-prx/latp Progenitor

ea

ESIBIO

ES-210

PureStem® ES-210, Ecto-ntu Progenitor

ea

ESIBIO

ES-236

PureStem® ES-236 Progenitor

ea

ESIBIO

ES-170

PureStem® E44 Progenitor

ea

ESIBIO

ES-196

PureStem® W10 Progenitor

ea

ESIBIO

ES-194

PureStem® Z11, Meso Progenitor

ea

ESIBIO

EM-1001

PureStem® Progenitor Growth Media, EPM k01

500 mL

ESIBIO

EM-1002

PureStem® Progenitor Growth Media, EPM k02

500 mL

ESIBIO

EM-1003

PureStem® Progenitor Growth Media, EPM k03

500 mL

ESIBIO

EM-1004

PureStem® Progenitor Growth Media, EPM k04

500 mL

ESIBIO

EM-1005

PureStem® Progenitor Growth Media, EPM k05

500 mL

ESIBIO

EM-1006

PureStem® Progenitor Growth Media, EPM k06

500 mL

ESIBIO

EM-1007

PureStem® Progenitor Growth Media, EPM k07

500 mL

ESIBIO

EM-1008

PureStem® Progenitor Growth Media, EPM k08

500 mL

ESIBIO

EM-2002

HyStem®-4D Chondrogenesis Differentiation Kit

1 Kit

ESIBIO

EM-2007

HyStem®-4D Differentiation Kit

1 Kit

ESIBIO

EM-2001

PureStem® Chondrogenesis Differentiation Kit

1 Kit

ESIBIO

EM-2006

PureStem® Choroid Plexus Differentiation Kit

1 Kit

ESIBIO

EM-2003

PureStem® Osteogenesis Differentiation Kit 01

1 Kit

ESIBIO

EM-2004

PureStem® Osteogenesis Differentiation Kit 02

1 Kit

ESIBIO

ST10035

LY411575

5 mg

ESIBIO

ST10008

PD0325901

2 mg

ESIBIO

ST10009

PD0325901

10 mg

ESIBIO

ST10010

PD0325901

415 µL, 10 mM

ESIBIO

ST10034

PD173074

2 mg

ESIBIO

ST10021

RepSox

5 mg

ESIBIO

ST10027

RG108

5 mg

ESIBIO

ST10024

SB203580

2 mg

ESIBIO

ST10012

SB431542

5 mg

ESIBIO

ST10013

SB431542

10 mg

ESIBIO

ST10014

SB431542

1.3 mL, 10 mM

ESIBIO

ST10025

SP600125

5 mg

ESIBIO

ST10015

Thiazovivin

2 mg

ESIBIO

ST10017

XAV939

2 mg

ESIBIO

ST10018

Y27632

2 mg

ESIBIO

ST10019

Y27632

10 mg

ESIBIO

ST10020

Y27632

625 µL, 10 mM

ESIBIO

 

 

 

上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

1:强大的进口辐射能力,血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

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Jackson ImmunoResearch 二抗选用指南

 

Jackson ImmunoResearch 公司二抗选用指南
此部分内容来源于Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc,如有疑问,请参考原)
亲和层析法纯化的二抗
用亲和层析法纯化的抗体是指,利用耦联到琼脂糖凝胶上的抗原将抗血清中的抗体亲和层析下来。我们采用一种*的连续的洗脱过程将抗体从固态抗原上分离出来。我们提供的未标记的亲和层析法纯化的抗体是不含有稳定剂和防腐剂的无菌液体。耦联标记物的抗体是冻干粉,里面含有稳定剂和防腐剂,但是过氧化物酶标记的抗体里面不含防腐剂。 
亲和层析纯化抗体的选择和定位
*步:选择Whole IgGF(ab’)2片段,或者Fab片段抗体。
我们提供三种亲和纯化的二抗:Whole IgGF(ab’)2片段,Fab片段。 
Whole IgG抗体是从抗血清中分离出来的完整的分子。这些抗体有一个Fc部分和两个与抗原结合的Fab部分,因此是二价的(图1)。它的平均分子量约为160KDWhole IgG抗体适用于多数情况,也是的。
F(ab’)2片段  抗体是用胃蛋白酶消化IgG去除Fc部分,剩下两个靠二硫键连接的结合抗原的Fab部分,依然是二价的。(图1)这抗体用在特定的情况中,例如避免抗体与Protain A G结合,或者与有Fc受体的活细胞结合。但是,如果一抗是whole IgG,不管二抗是哪种形式都可能出现结合Fc受体。这时,为了阻止抗体结合到Fc受体上,可以在4度将细胞预培养于含有叠氮钠和二抗来源物种正常血清的缓冲液中。
注意:当使用的是带标记的二抗时,千万不能用一抗来源物种的正常血清和IgG来封闭。如果血清中的免疫球蛋白非特异性的结合到样品上,他们会被带有标记的二抗识别,导致背景过高。
牛血清白蛋白(BSA)和奶粉是zui为常用的封闭液,它们可能含有IgG, 除了牛抗羊IgG外,许多二抗如抗牛,抗山羊,抗绵羊与牛IgG有较强的反应。因此,使用BSA或奶粉封闭或稀释抗体会增加背景或降低抗体效价。推荐用来自二抗的物种的正常血清(5% v/v)封闭。
 Fab片段  抗体是用木瓜蛋白酶消化IgG后得到的。这些抗体只含有一个结合位点(图1)。它们用来封闭内源性的免疫球蛋白,或者在使用相同物种来源的一抗作多标记的实验中,用于封闭暴露的免疫球蛋白。而二价的抗体(whole IgG Fab’2片段)不能用来封闭,因为它们有二个结合位点。封闭后,一些结合位点可能为暴露出来,与一抗结合,从而导致高的背景或假阳性标记。
第二步:在左边标记“antibody description”的拦里找到一抗的物种来源。
抗体是根据一抗的物种来源的字母表顺序排列。比如,如果一抗是小鼠来源的,就找“anti-mouse”。
说明:目录中提供了抗叙利亚仓鼠和抗亚美尼亚仓鼠的抗体。为了正确的选择二抗,必须知道一抗是在哪种仓鼠中制备的。
第三步:在标有“Host”这一栏中选择二抗的物种来源。
二抗的物种来源在抗体描述的开始部分,选择二抗的物种来源应考虑几点: 1) 个人的取向或经验。 二抗的质量问题与物种特异性没有关系。2)与蛋白A和蛋白G结合。 兔抗体能很好地与蛋白A和蛋白G结合,但羊和猴抗体能更好的与蛋白G结合。3)经物种吸附处理的抗体可用性。某些物种来源的抗体可能不能被具有交叉反应的物种进行吸附处理。选择经过吸附处理的物种。4)物种兼容性。 在多标记实验中,一些物种不能和其他物种兼容。一般地,多标记二抗必须来自同一物种。
第四步:在“antibody description下面选择二抗的特异性。
下面词语的解释将对选择合适的抗体有所帮助。
注意:不同来源的免疫球蛋白含有相似的结构,抗体的生成过程也相似。抗一个物种的抗体可能与其他物种发生交叉反应,除非特异性的经过交叉反应物种的吸附处理。在抗体描述中,经过其他物种的吸附处理的抗体标有“(min X …Sr Prot)”字样
Anti-IgG (H+L)
这类抗体和IgG分子的重链和轻链都可以反应,比如,和IgG分子的FcF(ab’)2/Fab部分。Anti-IgG (H+L)抗体也可以和其他的免疫球蛋白家族(IgMIgA,IgD,IgE)和亚家族反应,因为所有的免疫球蛋白都有相同的轻链(或者κ链,或者λ链)。Anti-IgG (H+L)抗体比只抗片段的抗体识别更多的抗原表位,适合普通的免疫检查过程。
Anti-IgGFc/ Fcγfragment specific
这类抗体和IgG重链的Fc部分反应。它们通过ELISA检测,和/或针对Fab片段吸附测试。某些情况下,这类抗体需要额外检测和/或吸收处理来降低IgMIgA的交叉反应。在这种情况下(抗人,抗鼠和抗大鼠),抗体标有“抗IgGFcγ)”,表示这类抗体只与IgG重链反应,通常不能和IgAIgM任何表位反应。
注意:不是所有anti-IgG, Fc抗体和所有亚型的IgG反应能力一致。要找和四种IgG亚类反应能力差不多的抗鼠IgG, Fcγ抗体的话,应当选羊抗鼠IgG(亚类1+2a+2b+3), Fcγ特异性片段(min X Hu,Bov,Rb Sr Prot)
Anti-IgGF(ab’)2 fragment specific
这类抗体和IgGF(ab’)2/Fab部分反应。它们经过了ELISA/Fc片段的吸附检测。它们不是特异性IgG,因为它们是和轻链反应的,它们同时也和具有相同轻链的其他种类的免疫球蛋白(Ig D, IgM, IgA和IgE)和亚类反应。
(min X…Sr Prot)
与一个物种反应的二抗可能与其他物种发生交叉反应,除非这类抗体经过其他物种的吸收实验。这类抗体经过了检测,以及针对IgG和圆括号中的物种的血清蛋白的吸附处理。(标有“(min X…Prot)” 字样的抗体是经过了圆括号中所标的物种的IgG/或血清蛋白的吸附处理的)。当其他物种免疫球蛋白的出现可能导致交叉反应时,推荐使用这类抗体。但是,当要选择经过针对相近物种吸附处理的抗体时,要特别注意,因为它们能识别的表位数量大大减小了,可能识别单抗的能力很弱。例如,在含有内源性免疫球蛋白的大鼠的组织样本中,只用经大鼠IgG吸附处理的抗鼠IgG检测大鼠组织中的鼠源一抗,或者在多标记实验中使用了大鼠的一抗。另个一个例子是抗大鼠IgG(min X Mouse… Sr Prot) 和抗叙利亚仓鼠IgGmin X….Mouse, Rat Sr Prot)。
以下是圆括号中所使用的一些简称:
Bov = Bovine
      Ck = Chicken
      Gt = Goat
      GP = Guinea Pig
      Sy Hms = Syrian Hamster
      Hrs = Horse
      Hu = Human
      Ms = Mouse
      Rb = Rabbit
      Shp = Sheep
      Sw = Swine
      Sr = Serum
      Prot = Protein.
ML Multiple Labeling
有些抗体标明了“ML,来强调它们除了可以用于单标,还可用于多标记实验。
抗亚美尼亚仓鼠IgG和抗叙利亚仓鼠IgG
大部分仓鼠单克隆抗体是来原于亚美尼亚仓鼠的脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的杂交瘤细胞,它是亚美尼亚(而不是叙利亚)仓鼠IgG.许多商业化的多克隆抗仓鼠IgG是抗叙利亚仓鼠IgG,这种抗体在检测亚美尼亚仓鼠IgG单克隆抗体时,它的效果没有抗亚美尼亚仓鼠IgG好。
注意:抗亚美尼亚仓鼠IgG(H+L)(min X Bov, Hu, Ms, Rb, Rat Sr Prot)不能识别所有的亚美尼亚仓鼠单克隆抗体,因为它经相近物种的吸附处理过(粗体字)。因此,使用经过少数物种或少数相近物种的吸附处理过的抗体可达到较好的效果,如抗亚美尼亚仓鼠IgG(H+L)(min X BoV Sr Prot), 除此之外,在小鼠或大鼠免疫球蛋白中也应该检测亚美尼亚仓鼠单抗。
第五步:从表格顶部选择需要的探针。
关于探针的技术信息参考其他网页。
第六步:antibody description一行和探针栏相交处,找到选择的抗体的价钱、规格和目录号。
每个方格顶部的数字是每单位的价钱,底部的9位数字为目录号。
第七步: 以定购目的查看产品说明
为了避免错误,产品说明应该遵循一个特定的语法排列。比如,目录号为115096072的产品应当描述为:
FITC-conjugated
|
AffiniPure
|
F(ab)2 fragment
|
of Goat
|
Anti-Mouse
|
IgG, F(ab)2 fragment specific
|
A
B
C
D
E
F
 
(minimal cross-reactivity to human, bovine, and horse serum proteins)
|
G
             
A.     耦联的探针说明,如荧光素,酶,生物素等。如果抗体没有耦联,不用写。
B.    抗体纯化是商标名字,是指从抗血清中通过偶联琼脂糖的抗原免疫层析的方法分离得到的抗体。
C.抗体的形式-完整IgG, 或者F(ab’)2Fab片段。
D.    抗体来源物种名称。
E   和该抗体反应的物种名称。
F.   抗体特异性描述。
G.    经过吸附处理以后减小了交叉反应的物种名称。