Abraxis544100使用方法

 

 

Abraxis544100使用方法

 

 

  • 通用描述AbraMag DNA大小选择磁珠设计用于从剪切的DNA或类似样本中纯化出所需大小的DNA片段,用于下游应用,如 作为排序。碎片被可逆地结合在顺磁性粒子上,而剩余的引物、盐、酶和在反应中留下的游离核苷酸被冲走。这些珠子是为使用而设计的。 有磁选机架。
  • 当使用核酸时,安全指南总是使用适当的防护设备(包括但不限于手套、实验室外套和安全玻璃)。 。有关进一步信息,请参阅安全数据表。
  • 储存和稳定在交货时,存放在4°C,不要冻结磁珠溶液。不要在打印的过期日期后使用。
  • Abramag DNA大小选择磁珠法使用一种简单、、基于磁性珠的方法从混合反应中纯化DNA片段,如下所示 gure

 

 

 

Figure 1. Schematic of the AbraMag® DNA Size Selection Magnetic Beads process.

 

  • a.混合:将混合样品添加到已清洗的AbraMag磁珠中。

b.结合:在经过优化的缓冲器存在的情况下,具有理想大小的DNA片段与珠子结合。磁铁是用来 守住珠子。

.c.洗涤:底漆和/或其他不想要的试剂分两步洗掉

  • 洗脱:然后将碎片洗脱并转移到一个新的管中。

.E.Downstr EAM应用:纯的,高质量的分离DNA片段可用于下游程序,如克隆和测序。

 

 

 

限制和预防措施样品表现的时候,在分子生物学级水或Tris/TE溶液之前,尺寸选择。如果需要一个简单的pcr清理(>100 bp),而不是大小se(>100 bp)。 使用Abramag聚合酶链反应清洁磁珠(PN 555030(5 ML),555035(60 ML),555040(450 ML)。

 

工作指令

 

A.提供的材料AbraMag DNA大小选择磁珠溶液

 

B.所需的额外材料和设备(不包括在产品中)

 

1.剪切DNA或其他样本

 

2.实验室级水

 

3.新制备的70%乙醇

 

4.分子级TE缓冲液pH 8.0(10 mm Tris,1mm EDTA pH 8.0)

 

5.一次性手套和其他防护设备

 

6.带一次性塑料过滤屏障的微型吸管

 

7.1.5mL无菌无核酸微离心管

 

8.4°C制冷机

 

9.磁性微离心管分离器,Solo(PN 472270),Multi-6(Pn 472260),微滴板侧拉(Pn 472235)或底拉(Pn 472236)或类似设备

 

10. Vortexer

 

C.为所需尺寸选择珠比

 

通过改变Abramag DNA大小选择磁珠与起始样品体积的比值,可以控制有利于50~400 bp的DNA片段的截留。图2 下面是凝胶电泳分析的大小选择根据增加的比率。例如,检查表1的比率。

 

 

 

图2.DNA梯状电泳的2%琼脂糖凝胶电泳显示珠液与样品比对片段大小排除的影响。100伏25分钟。

 

 

表1.示例珠比和由此产生的大小选择使用50公分的起始样本。

 

D.程序

 

将样品转移到1.5mL微离心管中进行纯化。用实验室级水将样品稀释至少50升.注意:要使用更大容量的开始样本,只需乘以 按预期比率计算(第6.C节)。例:100升样品x1.5=使用第6.D.2节中150升的珠子溶液。注:可以节省少量的起始产品用于凝胶分析。见第7.B节。

 

用~1秒脉冲旋转AbraMag DNA大小选择磁珠。确保解决方案*重新暂停。检查第6.C节以确定使用烟草的珠子溶液的数量 将珠子添加到所需的比例并添加到样品中。吸管上下混合。建议尝试与所需大小选择接近的比率范围,以便选择 模仿片段大小选择。

 

将样品/珠子混合物在室温下孵育5分钟。

 

将样品放在磁选机上,直到溶液清澈(~1分钟)。将管子留在分离器上,吸走并丢弃上清液,而不干扰有盖特的珠子。 对着磁铁。5.将管子放在分离器上,轻轻地加入200升新鲜配制的70%乙醇,而不将珠子从管子的侧面移开。坐30秒。吸出 把上清液扔掉。

 

6.重复步骤5进行第二次清洗。小心去除所有可吸入乙醇。

 

7.将管子从磁选机上取出,在室温下离开约3分钟,打开盖子,*蒸发任何残留的乙醇。

 

8.在样品中加入40升TE缓冲液、pH8.0或实验室级水。吸管上下混合。室温下孵育2-3分钟。将管子送回磁选机1米 降落伞。将试管留在分离器上,用吸管将洗脱液转移到新的微离心管中。洗脱液中含有大小选定的DNA片段。

 

7分析结果

 

A.产品回收可以使用带插层染料的荧光计、凝胶电泳分析和/或分光度计来确定。

 

确定凝胶电泳法可用于评价大小选择的效果,并可用于检查比例的优化。使用琼脂糖或凝胶,运行洗脱样本。 在科收回

 

D.8与分子量阶梯相比较,确保选择了所需的片段大小。

AbraMag ®磁珠超顺磁性,非聚集的铁氧化物颗粒(或“微球”),用于样品制备,或用于捕获/纯化(SPRI ™:固相可逆固定)靶例如蛋白质,抗体, DNA / RNA(直接,或通过ChIP,RIP或CLIP),外泌体和大肠杆菌。AbraMag的设计可在手动和自动生物医学和研究应用中实现更快的结合动力学,高灵敏度和选择性。

 

比主要竞争对手更高的产量,纯度,质量和价值。

 

● 多重优势 – 超过传统方法(色谱柱,离心)。

● 的性能 – 我们设计它们以匹配或超越竞争对手。

● 的容量和产量 – 高结合能力,可快速有效地进行目标纯化。

● 的纯度 – 稳定的预先封闭的颗粒即使是复杂的样品也能提供清洁的净化。

● 可定制 – 提供定制珠子和连接服务。

 

磁选机

反-E。大肠杆菌磁珠(IMS)

即用型磁珠,25 mg / ml(2.5%)

具有游离胺或羧基的磁性颗粒,可使用简单的步骤(提供)与您的抗体或其他配体偶联。

胺 – PN 544080(2 ml),PN 544081(5 ml)

羧基 – PN 544085(2 ml),PN 544086(5 ml)。

Protein A / Protein G Magnetic Beads,5 mg / ml

Protein A Magnetic Beads – PN 544030(2 ml),PN 544031(5 ml)

蛋白A磁珠纯化试剂盒 – PN 555000(20个样品)

蛋白G磁珠 – PN 544040(2 ml),PN 544041(5 ml)

蛋白G磁珠纯化试剂盒 – PN 555010(20个样品)

抗IgG磁珠,5 mg / ml

抗小鼠IgG磁珠 – PN 544020(4 ml),PN 544021(20 ml)

抗兔IgG磁珠 – PN 544010(4 ml), PN 544011(20 ml)

抗人IgG磁珠 – PN 544060(4 ml),PN 544061(20 ml)

Streptavidin / Biotin Magnetic Beads,5 mg / ml

Streptavidin Magnetic Beads – PN 544050(2 ml),PN 544051(5 ml)

生物素磁珠 – PN 544000(2 ml),PN 544001(5 ml)

 

DNA / RNA纯化磁珠

新 DNA尺寸选择/ PCR纯化磁珠

AbraMag ® DNA尺寸选择和PCR纯化磁珠被设计成净化所需大小的DNA片段。

●为了替代AMPure ® XP / SPRIselect ®和血清弹匣 ™ Speedbeads ™的性能相当,但更好的价值(参见比较数据)。

●去除污染物:引物,引物二聚体,dNTP,盐等。

●尺寸截止范围> 50至> 800 bp(尺寸选择)或> 100bp(PCR纯化)

●处理时间短:无离心或过滤

●管或微孔板格式

●适合手动或自动过程

DNA大小选择Magnetic Beads PN 544100(5 ml),544103(60 ml),544106(450 ml)

PCR Clean-Up Magnetic Beads PN 555030(5 ml),555035( 60 ml),555040(450 ml)

DNA纯化磁珠,12毫克/毫升

AbraMag ® DNA纯化磁珠结合在高容量DNA(基因组,质粒等)。将它们插入您当前的磁珠DNA纯化方案中,以获得更高的产量,纯度和价值。珠子的表现始终优于竞争对手的珠子(参见比较数据)。

PN 544090(1ml)

基因组DNA纯化试剂盒,磁珠

的AbraMag ®基因组DNA磁性纯化试剂盒被设计为从不同的生物样品纯化的基因组DNA,得到DNA的高收率和低RNA,蛋白质,核酸酶,和其它细胞污染物。

PN 555020(100个样本)

mRNA纯化磁珠,为5mg / ml的

AbraMag ® mRNA纯化磁珠加上寡(dT)25,在高容量结合多聚腺苷酸化的mRNA和mRNA的洗脱基本上不含核糖体RNA。将珠子插入您当前的磁珠mRNA纯化方案中,以获得更高的产量,纯度和价值。

PN 544075(2ml)

mRNA纯化试剂盒,磁珠

的AbraMag ® mRNA的磁性纯化试剂盒被设计为从总RNA纯化的mRNA,使多聚腺苷酸化的信使RNA的高产量,同时留下核糖体RNA(rRNA基因)和其他RNA后面。

PN 555025(10个样本)

 

 

 

 

 

 

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上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

1:强大的进口辐射能力,血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

2:产品种类齐全,经营超过700多品牌,基本涵盖所有生物实验试剂耗材。

3:提供加急服务,货品一般1-2周到货。

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6:我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。

7:我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批发,欢迎合作。

 

enzyscreen三明治盖的使用方法

enzyscreen三明治盖的使用方法


enzyscreen代理


CR1296系列96孔MTP的三明治夹层

型号:enzyscreen 96孔板

CR1296系列96孔MTP的三明治夹层列表

1、CR1296: 适用于所有96种深孔MTP的三明治盖

 

 

培养体积:0.5-1毫升

闭孔有机硅层中的尺寸孔:1.5 x 5 mm

顶空空气交换:1毫升/分钟

蒸发速率(30C,50%湿度):22 l /孔/天

用途:1-5天栽培

与夹具CR1700和CR1800兼容

主要应用:E.的构建体和突变体文库的初步筛选。 大肠杆菌,芽孢杆菌,酵母,毕赤酵母等,次级代谢产物的产生 放线菌和真菌

2、CR1296a: 低蒸发版CR1296

 

 

培养体积:0.5-1毫升

固体硅树脂层上的尺寸孔:0.8 x 5 mm

顶空空气交换:0.3毫升/分钟

蒸发速率(30C,50%湿度):8 l /孔/天

目的:3-14天的栽培,菌株生长相对缓慢 和(哺乳动物)细胞培养

与夹具CR1700和CR1800兼容

主要应用:哺乳动物细胞培养(CHO细胞);次要的生长缓慢的放线菌和真菌产生的代谢产物。

3、CR1296b: 格瑞纳96种深井MTP的三明治盖 我们的板CR1496a

 

 

 

内部有针脚,可完固定有机硅层 时间:特别是对于机器人应用

闭孔有机硅层中的尺寸孔:1.5 x 5 mm

顶空空气交换:1毫升/分钟

蒸发速率(30C,50%湿度):22 l /孔/天

用途:1-5天栽培

与夹具CR1700和CR1800兼容

主要应用:构建体和突变体的初步筛选 大肠杆菌,芽孢杆菌,酵母,毕赤酵母等的文库,二级 放线菌和真菌产生的代谢产物
enzyscreen三明治盖的使用方法

 

高压灭菌和三明治盖的使用:1.包裹三明治盖(在聚丙烯 MTP 顶部,或不带 MTP 以防万一 γ 辐照的聚苯乙烯 MTP 将用于铝箔中(替代方案:使用 灭菌袋)。2.在 120 ºC 下高压灭菌 20-30 分钟,然后最好进行干燥循环。3.取下铝箔。4.如果使用的高压灭菌器没有干循环选项,请干燥夹层盖(有或没有 MTP) 在烘箱中设置为 ~ 100-110 ºC 1 小时,以干燥过滤层。5.将三明治盖(带或不带 MTP)放在层流柜中。6.用一个 适当的无菌液体生长培养基(有关建议体积,请参阅 流体动力学和氧气转移率)。7.单独接种 MTP 的孔,或使用菌选择器,或复制器(请参阅我们关于“复制器的使用”的网页)。8.将三明治盖放在 MTP 的顶部。9.将夹层盖 + MTP 放入我们的一个夹子中系统(附在轨道振动平台上),如在“夹具系统的使用”页面上进行了描述。
三明治盖的清洁和维护- 使用后,可使用纸巾和水-乙醇混合物清洁海绵状硅胶层。               – 除非绝对必要,否则不要拆卸三明治盖。- 超细纤维过滤器(蓝色)和 ePTFE 过滤器(绿色)至少可以使用 20-50 次:如果太脏,请更换。更换过滤器可以在包装中获得20。- 海绵状硅胶层可以重复使用数百次,前提是夹层盖的压缩时间不超过约 10 天(在后一种情况下, 硅胶层可能无法*恢复其原始形状)。

三明治盖的清洁和维护- 使用后,可使用纸巾和水-乙醇混合物清洁海绵状硅胶层。            
   – 除非绝对必要,否则不要拆卸三明治盖。- 超细纤维过滤器(蓝色)和 ePTFE 过滤器(绿色)至少可以使用 20-50 次:如果太脏,请更换。更换过滤器可以在包装中获得20。- 海绵状硅胶层可以重复使用数百次,前提是夹层盖的压缩时间不超过约 10 天(在后一种情况下, 硅胶层可能无法*恢复其原始形状)三明治盖的清洁和维护- 使用后,可使用纸巾和水-乙醇混合物清洁海绵状硅胶层。             
  – 除非绝对必要,否则不要拆卸三明治盖。- 超细纤维过滤器(蓝色)和 ePTFE 过滤器(绿色)至少可以使用 20-50 次:如果太脏,请更换。更换过滤器可以在包装中获得20。- 海绵状硅胶层可以重复使用数百次,前提是夹层盖的压缩时间不超过约 10 天(在后一种情况下, 硅胶层可能无法*恢复其原始形状)

三明治盖的清洁和维护- 使用后,可使用纸巾和水-乙醇混合物清洁海绵状硅胶层。        

  

  – 除非绝对必要,否则不要拆卸三明治盖。- 超细纤维过滤器(蓝色)和 ePTFE 过滤器(绿色)至少可以使用 20-50 次:如果太脏,请更换。更换过滤器可以在包装中获得20。- 海绵状硅胶层可以重复使用数百次,前提是夹层盖的压缩时间不超过约 10 天(在后一种情况下, 硅胶层可能无法*恢复其原始形状)

synvolux SP-3004-01使用方法

 

 synvolux SP-3004-01使用方法

SAINT – PROTEIN

P R O T E I N D E L I V E R Y S Y S T E M

 

SAINT蛋白

为使用 SAINT-蛋白(目录号:编号SP-3004-01、SP-3004-02、SP-3004-04)。本方案中的量适用于 24 孔板的单个孔。其他格式请参见本页底部的表 1。P RO TE IN DE LI VE RY SY SS TE M

 

一般转染方案

 

1. 准备细胞进行转染。

  • 贴壁细胞:转染前 1 天,将细胞接种于 0.5 mL 生长培养基中,使细胞在转染时达到 80% 融合。转染前,立即用不含血清的相同培养基(无血清培养基)替换生长培养基。
  • 悬浮细胞:转染当天,在 0.5 mL 无血清培养基中以其大密度的约 80% 铺板细胞。

2. 使 SAINT-蛋白小瓶达到室温。

3. 充分涡旋 SAINT-蛋白约 30 秒。

4. 使用 1:10 的蛋白 (µg) 与 SAINT-蛋白 (µl) 比例制备复合物。对于每份转染样品,按照以下方法制备复合物:

a. 在 50µl PBS 中稀释 2µg 蛋白。

b. 向蛋白/PBS 溶液中加入 20µl SAINT-蛋白,并轻轻重悬。

5. 在室温下孵育混合物 5-10 min(溶液可能出现浑浊)。

6. 向细胞中加入复合物 (70µl)。

7. 在 CO2 培养箱中于 37 ℃ 下孵育 4 小时。

8. 如果需要更长时间的孵育,加入 50µl 血清,将血清浓度调整至 8%。

9. 进行检测。

 

 

表 1. 常用多孔板的每孔推荐量

 

格式

生长培养基 (µl)

蛋白 (µg)

PBS (µl)

SAINT-蛋白 (µl)

96 孔

100-200

0.4

10

4

48 孔

200-350

1

25

10

24 孔

400-750

2

50

20

12 孔

750-1500

4

100

40

6 孔

2000-3000

8

200

80

 

 

注:SAINT-蛋白试剂在 4 ℃ 下可稳定储存至少 1 年。请勿冷冻!

淋巴细胞分离方法

淋巴细胞分离简述

     作为一种重要的免疫细胞,淋巴细胞的数目及功能状态反应了机体所处的免疫状态,与一些先天或后天的免疫缺陷性疾病、传染性疾病以及恶性肿瘤等免疫功能障碍有关的疾病有密切关联。因此,研究淋巴细胞的免疫状态对多种疾病的诊断、预防及治疗都有着极为重要的意义。而淋巴细胞分离是研究淋巴细胞功能状态及其在细胞免疫中作用的关键步骤。

淋巴细胞分离来源主要是外周血(或淋巴组织细胞悬液),目前常规的淋巴细胞分离方法有基于淋巴细胞分离液的密度梯度离心法、HES沉降法、以及基于抗原抗体结合的磁珠与流式细胞分离法。本文就现在常用的几种淋巴细胞分离方法及其特点做一简要综述。

1、密度梯度离心法

该方法采用淋巴细胞分离液进行进行密度梯度离心分离得到淋巴细胞。外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞,其体积、形状和比重与其他细胞不同从而导致各种细胞具有不同的密度,淋巴细胞分离液即是一种根据细胞密度差异,借助离心产生的重力加速度,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离纯化的常用试剂。常用的淋巴细胞分离液有Ficoll淋巴细胞分离液和Percoll淋巴细胞分离液。

1.1. Ficoll-Hypaque密度梯度离心法

Ficoll是一种中性的蔗糖的多聚体,吸水性强,平均分子量为400,000,具有高密度、低渗透压、无毒性的特点。单一的Ficoll溶液分子量大,高浓度时增加粘度易导致细胞聚集,因此常用的Ficoll淋巴细胞分离液采用了降低Ficoll浓度,同时加入泛影葡胺增加密度的Ficoll-Hypaqu混合溶液,其密度在1.077左右,近于等渗,适用于分离外周血淋巴细胞和单个核细胞(PBMC,外周血淋巴细胞和单个核细胞比重为1.075左右)1。利用该分离液作密度梯度离心时,各种血液成分将按密度梯度重新分布聚集,红细胞与粒细胞由于密度较大故沉于分层液的底部,淋巴细胞和单核细胞(PBMC)的比重与分层液比重相近,故位于分层液界面上。23

 Ficool淋巴细胞分离液是一种经典的淋巴细胞分离试剂,分离得到的PBMC纯度在90%以上,收获率可达8090%,活细胞百分率在95%以上。然而因其固定的密度,故只适用于PBMC、脊髓干细胞、骨髓干细胞的分离。

订货信息:

供应商               品名                    货号        规格

MP Biomedicals   Lymphocyte Separation Medium – LSM™  0850494X    100 mL  

biomarket       LymphoprepTM分离液          1114544      250ml

 

1.2. Percoll密度梯度离心法:

Percoll成分为硅化聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的颗粒,渗透压很低,粘度也很小,不穿透生物膜,对细胞无毒害无刺激,不引起细胞聚集,可形成高达1.3gml密度。特别的是percoll的颗粒直径大小不同,可在离心过程中自然形成连续的密度梯度,从而将不同密度的细胞分离出来。而且Percoll扩散常数低,所形成的梯度十分稳定,配置不同浓度(密度)时仅需通过用PBS(1x)或组织培养液稀释即可获得,广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒,还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。采用Percoll细胞分离液得到的细胞可直接用于基于荧光标记的细胞分选。4

因此,Percoll细胞分离液不仅适用于外周血中PBMC的分离(单个核细胞和淋巴细胞分别处于不同的密度层),而且能将全血中的多种细胞分离出来(各种细胞处于相应的梯度层),还可根据不同实验室需要配置所需的连续密度梯度,分离特定的细胞或亚细胞组分。初步分离得到的PBMC可根据需要不同密度梯度的不连续梯度离心方法进行进一步细胞纯化,如纯化淋巴母细胞和去除死细胞以及富含NK活性大颗粒淋巴细胞(LGL)的纯化。5

常用percoll浓度密度换算(Percoll原液与10倍浓缩的PBS91的比例混合,此时溶液 100 Percoll,比重是1.127

Percoll浓度()    70       60       50       40       30        20 

比重gml       1.090  1.077    1.067   1.056   1.043     1.031

订货信息:

供应商    货号           规格

GE    17-0891-01         1 L

GE    17-0891-01         100 ml

 

1.3. Iodixanol梯度离心法

Iodixanol是一种化学成分为碘海醇(Iohexo1)的白色、高亲水性粉剂,可以配成型的非离子密度梯度分离液。分子量为821,密度为2.1 g/ml,是非离子型的、对细胞无毒性的化合物,可用于细胞、细胞器、生物大分子、病毒等各种生物物质的分离或提纯6。该分离液的密度可以通过测定其折射率来确定,配置后可以进行高温高压的灭菌。可根据需要配置成不同密度的梯度离心液,主要用于脂蛋白的分离,也可用于淋巴细胞分离纯化。7,8

 

订货信息:

供应商              品名                        货号           规格

Axis-Shield      Nycodenz(粉剂)         AS1002424      1x500g

Axis-Shield  LymphoprepTM  分离管(即用型   AS1019818    18Tubes x10ml

Axis-Shield   OptiPrepTM  分离液(即用型)AS1114542      1x250ml

Axis-Shield  LymphoprepTM  分离液(即用型)AS1114544    1x250ml

Axis-Shield  LymphoprepTM  分离液(即用型)AS1114545    4x250ml

Axis-Shield  LymphoprepTM  分离液(即用型)AS1114547    1x500ml

Axis-Shield  LymphoprepTM  分离液(即用型)AS1114547     6x500ml

Axis-Shield  NycoPrepTM 1.077  分离液(即用型)AS1114550  4x250ml

Axis-Shield  NycoPrepTM 1.077  分离液(即用型)AS1114551   1x250ml

 

2、羟乙基淀粉(HES)离心沉淀法

HES是一种由高分子量支链淀粉经降解、羟乙基化并进一步加工处理后制成的血浆代用品9。自然状态下,HES与红细胞膜上的负电荷结合,使红细胞彼此以凹面相贴聚集而下沉,与血浆及单个核细胞形成清晰的界面。如果HES与外周血混合物经低速离心可加快红细胞的下沉,便于吸取含单核细胞层,使PBMC的分离过程简单化。该方法分离PBMC操作简便,成本低廉,分离细胞数量与密度梯度离心方法相当。然而该方法分离的细胞质量有待进一步提高。10-12

订货信息:

国内多家血浆代用品供应商如湖北武汉康宝泰精细化工有限公司可以获得。 

 

3、基于免疫技术的淋巴细胞分离法

目前多家生物制品公司均开发出的基于抗原抗体特异性结合的淋巴细胞分离试剂盒,主要有免疫磁珠分离法、流式细胞分选法13,14。这些试剂盒能特异性分离外周血或其它组织中的单一淋巴细胞类型,操作简便,所得细胞纯度高,可直接用于下游分子生物学实验。然而该法基于抗体技术,因此成本高,还未成为目前的主流淋巴细胞分离方法。

订货信息

供应商              品名                              货号

Stem cell   EasySep™ Magnet全淋巴细胞富集试剂盒    19961HLA

Stem cell   EasySep™ MagnetT细胞富集试剂盒         19951HLA

Stem cell   EasySep™ MagnetB细胞富集试剂盒         19954HLA

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主要参考文献:

1. Separation of human lymphocytes from citrated blood by density gradient (NycoPrep) centrifugation: monocyte depletion depending upon activation of membrane potassium channels. Bøyum A, Brincker Fjerdingstad H, Martinsen I, Lea T, Løvhaug D. Scand J Immunol. 2002 Jul;56(1):76-84.

2. Separation of leucocytes: improved cell purity by fine adjustments of gradient medium density and osmolality. Bøyum A, Løvhaug D, Tresland L, Nordlie EM. Scand J Immunol. 1991 Dec;34(6):697-712.

3. Isolation of lymphocytes, granulocytes and macrophages. Bøyum A.

Scand J Immunol. 1976 Jun;Suppl 5:9-15.

4. A simple method for human peripheral blood monocyte isolation. de Almeida MC, Silva AC, Barral A, Barral Netto M. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2000 Mar-Apr;95(2):221-3

5. Isolation of brain and spinal cord mononuclear cells using percoll gradients.

Pino PA, Cardona AE. J Vis Exp. 2011 Feb 2;(48). pii: 2348.

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检测胶质瘤IDH1R132H的新方法

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DIA-H09 Anti-IDH1 R132H (Hu) from Mouse (Clone: H09) CE-IVD   6500 0.5ml dianova

文章摘要:对恶性肿瘤患者,肿瘤细胞疫苗通过激活宿主主动免疫,可以延长患者的生存期。有效的免疫应答需要肿瘤抗原在肿瘤基质中,由细胞通过组织相容性抗原(MHC)递呈来实现。以往的体外试验、动物实验和在新鲜组织标本中已证实肿瘤抗原与抗原递呈细胞上的MHC相互作用。但还无法应用于临床。德国癌症研究中心的Lukas Bunse等通过邻位连接技术(proximity ligation assay, PLA)优化临床检测过程,在胶质瘤的石蜡切片中验证肿瘤抗原与MHCⅡ的相关性。结果发表在2015年2月的《The Journal of Clinical Investigation》上。

【Ref: Bunse L, et al. J Clin Invest. 2015 Feb;125(2):593-606. doi: 10.1172/JCI77780. Epub 2015 Jan 2.】

 

对恶性肿瘤患者,肿瘤细胞疫苗通过激活宿主主动免疫,可以延长患者的生存期。有效的免疫应答需要肿瘤抗原在肿瘤基质中,由细胞通过组织相容性抗原(MHC)递呈来实现。以往的体外试验、动物实验和在新鲜组织标本中已证实肿瘤抗原与抗原递呈细胞上的MHC相互作用。但还无法应用于临床。德国癌症研究中心的Lukas Bunse等通过邻位连接技术(proximity ligation assay, PLA)优化临床检测过程,在胶质瘤的石蜡切片中验证肿瘤抗原与MHCⅡ的相关性。结果发表在2015年2月的《The Journal of Clinical Investigation》上。

 

PLA是一种高灵敏度蛋白质检测新技术,通过一对核酸适体探针识别目标蛋白分子。当目标蛋白相互作用时,它们在空间位置上相互接近,并与特异核酸链连接,并经PCR反应扩增特异核酸链,来实现对相互作用的目标蛋白分子检测、定位和定量。

 

该研究结果显示,通过PLA方法可以原位检测胶质瘤内MHCⅡ分子和突变型异柠檬酸脱氢酶1(IDH1R132H)蛋白的相互作用,确定这些蛋白的免疫抗原性和抗原表位。作者认为该检测技术能用于获得在胶质瘤组织中是否存在特异性抗原的必要信息,有助于指导临床上对具有特异性抗原胶质瘤的免疫治疗。

 

图1. A图示突变型IDH1R132H单克隆抗体(H09)在弥漫性星形细胞瘤上的免疫组化染色;B图示IDH1蛋白包含第132位氨基酸的15肽和20肽;C图示B中多肽与H09的ELISA结果,p122-136、p124-138、p123-142、p126-140的免疫原性zui强;D和E图示IDH1R132H多肽与MHC II复合物可以*抑制游离IDH1R132H与H09的ELISA结果。

 

图2. A图为抗HLA-DR和H09进行PLA的示意图,其中红圈表示PCR扩增循环,α和β为HLA-DR链,pIDH为IDH1抗原表位多肽。B图为胶质瘤细胞株LN229的流式和免疫荧光结果。C图为IDH1及其突变型的生化反应,后者特征性产生2HG。D图为野生型IDH1、突变型IDH1R132H和IDH1D252G基因代谢产物2HG的浓度。E和F图为LN229过度表达突变型IDH1的Western blot和免疫荧光结果。

 

图3. A图通过PLA技术可以看到IDH1R132H和HLA-DR在IDH1R132H过表达的LN229细胞株中存在共定位(colocalization)。B图通过RNA干扰抑制HLA-DR表达可以消除这种共定位现象。C图通过流式试验证实RNA干扰可以显著降低HLA-DR表达。D图示IDH1R132H和HLA-DR的PLA(红色)和IDH1R132H染色(绿色)。E图示IDH1R132H和HLA-DR的PLA和IDH1R132H表达在过度表达IDH1R132H的LN229细胞中的相关性。

 

图4. A图示NCH620细胞株的IDH1R132H-HLA-DR的PLA、IDH1R132H的IHC和HLA-DR的IHC。B图和C图分别示胶质瘤细胞株NPH001和NCH645的IDH1R132H-HLA-DR的PLA。D图示NCH620细胞株的IDH1R132H-HLA-DR的PLA和HLA-DR的荧光共标。

 

(感谢 :复旦大学附属华山医院小卡西乌斯编译,复旦大学附属华山医院陈灵朝博士审校,复旦大学附属华山医院陈衔城教授终审)