Izon TRPS测量

Izon Science是的纳米生物分离和表征工具制造商。其qEV SEC色谱柱已迅速成为专家青睐的EV分离方法。Izon的TRPS测量系统是测量复杂纳米生物颗粒,特别是电动汽车和纳米医学产品的仅有准确,标准和实用的方法。

TRPS测量

以的精度测量纳米粒子。

 

以的精度和准确度测量单个粒径,浓度和电荷。可调谐电阻脉冲传感(TRPS)在通过纳米孔时逐个颗粒地测量悬浮在电解质中的纳米颗粒。这是向前迈出的一大步,因为更常用的光散射技术仅提供低精度和非常低精度的体积估计。TRPS仪器在超过45个国家使用,并包含在400多种出版物中,是科学和正确分析纳米粒子的关键要求。

TRPS如何工作

大的粒子测量平台

 

可调谐电阻脉冲传感(TRPS)技术可以测量悬浮在电解质中的纳米粒子特性,而不是光散射技术提供的估计值。科学测量必须是可量化的和可重复的,至少提供:

1. 流体中的颗粒浓度为每单位体积流体的多个颗粒,跨越的可检测的颗粒尺寸范围。

2. 将这些颗粒的尺寸分布绘制为浓度v粒径(或体积)的直方图。

TRPS是仅有能够满足这些基本要求的技术,此外还可以测量单个纳米粒子的表面电荷。有关竞争技术失败的详细信息,请参阅技术比较部分。

 

TRPS如何运作?

 

电解质流体池中纳米孔的阻抗每秒采样50,000次。通过施加压力和电压的组合驱动样品颗粒通过纳米孔,并且每个颗粒引起由应用软件检测和测量的电阻脉冲或“阻塞”信号。

  • 阻塞  幅度 与每个粒子的体积成正比。1
  • 阻塞  持续时间 随粒子的速度而变化,可用于计算每个粒子的表面电荷。2,3
  • 阻塞  频率 用于确定颗粒浓度。4

通过 用已知尺寸,浓度和表面电荷的颗粒校准,将幅度持续时间频率值转换成相应的颗粒特性  。

 

 

 

 

 

 

 

什么是“可调”以及为什么?

 

纳米颗粒悬浮液是复杂的系统。*表征它们需要在多种条件下对每个样品进行优化设置和测量。

  • 可调节纳米孔的拉伸“S”以将纳米孔尺寸优化至手头的粒度范围。
  • 施加的  压力“P” 可以调节以调节甚至逆转通过纳米孔的流体流动 – 允许调节阻塞频率和持续时间。需要在多于一个压力下进行测量以计算颗粒浓度,并且单颗粒电荷分析需要非常精细的压力控制。5,6

施加的电压  “V” 可以被调谐以通过纳米孔吸引不同表面电荷或极性的粒子,并优化系统的信噪比。需要在多于一个电压下进行测量以校准单个粒子电荷值。

 

为什么TRPS固有的准确性?

 

可调谐的电阻脉冲传感可确保高度准确地测量纳米粒子的物理化学性质,如浓度,大小和表面电荷。TRPS精度主要基于其标准化校准过程,具有NIST可追溯标准,通过压力和电压驱动控制对流流动和电动力,以及其单颗粒性质。颗粒在逐个颗粒的基础上计数,不使用任何平均算法,从而实现高度的浓度测量。粒径由电阻脉冲高度计算。与粒径相比,这些与粒子体积成比例,与基于光学的方法相比,导致粒径的准确度增加。通过将孔调整为手头的颗粒,进一步优化粒度精度。通过孔内的高电场和对流,电渗和电泳的控制的综合效果,保证了颗粒表面电荷测量的高精度。

 

同时测量粒径和浓度,亚纳米精度

使用TRPS快速,准确地确定颗粒尺寸

 

在很短的时间内,以与TEM相似的精度轻松确定单个粒径和实际尺寸分布。您可以测量粒子的真实尺寸,而不是基于激光的系统测量的水力动力学直径。真实的分布是自动提供的,因为大量的颗粒可以高精度单独测量,并直接与可追溯的校准颗粒进行比较。TRPS没有主观性,没有软件猜测,也没有预先确定的分布情况。与DLS或NTA不同,您可以*确信您的颗粒尺寸和轮廓是仪器提供的。TRPS易于理解和应用。

 

 

以亚纳米精度单独测量颗粒

物理尺寸,不是水动力的

 

获得准确的浓度测量值

在线性刻度上,不是对数刻度。

 

同时测量尺寸和浓度

允许您跟踪粒子

 

单独测量颗粒,亚纳米精度

 

TRPS通过使用阻抗测量大量具有*精度的单个颗粒,为您提供高分辨率的尺寸和浓度数据。每个粒子的大小都会自动与已知的校准标准进行比较,从而提供度和确定性。这意味着您获得的是实际大小,而不是算法生成的数字。

 

获得准确的浓度测量值

 

TRPS是迄今为止用于测量颗粒浓度的准确技术。与尺寸一样,浓度总是来自与校准颗粒的直接比较,提供确定性和准确性。测量的准确性,分辨率和可重复性意味着颗粒数的有用性远远超过每毫升提供单个数量的颗粒。请注意,无论使用何种技术,浓度都需要根据所涵盖的尺寸范围来定义。尺寸轮廓应以直方图格式显示每个尺寸箱中的粒子数。TRPS浓度测量的细节和可重复性允许您通过各种过程跟踪和控制颗粒,从而加速您的研究/开发项目。

同时测量尺寸和浓度

 

TRPS是仅有能够同时正确测量单个粒径及其浓度的技术。TRPS采用优雅的毛孔技术,与基于激光的系统*不同。生成丰富的数据集,可以对粒子集进行详细可靠的分析。随着这种的测量方法及其提供的可靠数据点的出现,研究人员可以专注于推进他们对纳米特别是纳米生物颗粒的开发和理解。
标准化的实际尺寸和浓度数据是显示物理化学等效性和跟踪生产方法和产量变化所必需的。如果不经常获得这些信息,就不可能有效地开发或研究纳米粒子系统。只有TRPS提供您所需要的。

 

 

用TRPS测量Zeta电位

用TRPS测量单个颗粒的Zeta电位

 

指示颗粒表面电荷的Zeta电位是用于表征液体中的纳米尺寸物体的重要且广泛使用的方法,所述液体例如药物,病毒,脂质体和外来体。TRPS在逐个颗粒的基础上以高精度同时可重复地同时测量颗粒大小和zeta电位的*能力代表了研究和理解颗粒分散体的纳米生物相互作用和物理化学性质的新方法。简而言之,TRPS根据zeta电位和电泳迁移率之间的线性关系测量颗粒的电动和对流速度并计算它们的zeta电位。该新方法可以很容易地应用于任何纳米生物颗粒系统,

 

 

真正的zeta电位分布提供无偏的结果

在粒子研究中获得所需的确定性

 

比基于DLS的测量更加和可靠

了解不同配方的细微变化

 

同时测量尺寸和zeta电位

逐个粒子地测量单个粒子

 

在生理强度缓冲液中测量电荷

测量和分析将要使用的介质中的颗粒

 

精细的尺度精度

以新的方式测量和分析生物化学相互作用和内容,例如载药量

真正的zeta电位分布提供无偏的结果

 

在混合物中,通常假设所有颗粒具有相同的zeta电位,但通常情况并非如此。当粒子具有多分散尺寸和表面电荷分布时,用于测量ζ电位的广泛使用的技术(PALS / DLS)变得非常不可靠。解决方案是单独测量足够数量的单个颗粒的电泳迁移率,TRPS非常好。电泳迁移率通过它们的线性关系转换为ζ电位。这导致zeta电位数据不受尺寸分布的影响,并且可以作为尺寸与电荷图或电荷与数字图的关系提供。这种信息水平对于纳米医学开发和纳米医学QA等复杂应用至关重要。

 

 

 

 

 

 

比基于DLS的zeta测量更加和可靠

 

相分析光散射(PALS)是一种基于激光多普勒测速仪的集成技术,是测定纳米粒子悬浮液zeta电位的有名的技术。虽然容易获得,但是与单粒子测量技术(例如TRPS)相反,集合技术(例如PALS)只能测量和计算平均粒子迁移率,因此丢失详细的单粒子信息,特别是在测量多分散样品时。TRPS是可用的技术,可在逐个颗粒的基础上同时提供有关颗粒大小和zeta电位的悬浮液信息,从而保证对多峰和多分散样品的准确分析(见图)。

 

同时测量尺寸和zeta电位

 

同时测量颗粒的尺寸和zeta电位对于广泛的应用和行业具有令人难以置信的好处。TRPS能够在逐个颗粒的基础上实现这一目标,具有高可靠性和可重复性。它代表了理解和研究纳米尺度分布的内在行为的新方法。由于这些纳米颗粒特性已经被认为在生物相互作用中发挥着核心作用,包括影响,它们被靶组织/细胞摄取,TRPS允许研究和更好地理解诸如基于纳米颗粒的微RNA的递送之类的东西,其反过来可用于许多治疗应用,例如克服耐药性,癌症治疗和诊断。TRPS仪器也是市场上仅有能够同时准确地完成这项工作的设备。通过提供对纳米生物相互作用的更好理解,高分辨率单粒径和zeta电位表征将对发育纳米医学产生积极影响。

大小和浓度

 

 

 

 

 

 

在生理强度缓冲液中测量电荷

 

通过静电排斥,空间位阻或这两种力的组合来稳定颗粒分散体和制剂。在没有足够的稳定性的情况下,颗粒终会聚集。研究人员使用zeta电位作为颗粒静电稳定性的指标。Zeta电位是通过测量悬浮液中颗粒的电泳迁移率得到的建模量。电泳迁移率主要取决于颗粒和溶液的性质(离子强度,离子组成和粘度)。因此,对于设计用于生物学应用的生理缓冲液中的纳米颗粒或纳米制剂进行zeta分析是重要的。
高分辨率单粒子zeta分析将提供对不同pH和盐条件下粒子行为的深入理解,并有助于监测粒子电晕随时间的演变以进行生物动力学研究。此外,确定每个颗粒上的准确电荷可以提供对不同生理缓冲液中纳米生物相互作用的潜在见解,这对于确定颗粒稳定性和吸收至关重要; 影响整体输送的颗粒剂量。

 

 

精细的尺度精度

 

TRPS单独提供了通过精细尺度映射单个颗粒的zeta电位来区分颗粒的方法。膜囊泡的表面电荷来自囊泡表面上外来部分的组合净电荷。使用TRPS,可以在膜组成改变时解决表面电荷的细微变化。这可以使用脂质体容易地证明,其中通过改变带负电的DPMG相对于中性两性离子脂质DSPC的比例来改变组成。随着DPMG的百分比增加,脂质体群的zeta电位变得越来越消极。
TRPS还可用于通过粒子 – 配体相互作用实时监测zeta电位的变化。下面在生物素化的单链DNA(35个碱基)与链霉抗生物素蛋白包被的颗粒表面的结合中证明了这一点。扩散依赖性结合反应在30秒加入DNA后约170秒内完成,DNA的结合与ζ电位的降低一致。分辨率限制是寡核苷酸覆盖率的10%。例如,对于DNA /颗粒比为400的颗粒,分辨率极限为每颗粒44个寡核苷酸(图C)。使用已经被蛋白酶K酶促灭活的链霉抗生物素蛋白的对照反应显示没有DNA相互作用。随着寡核苷酸越长,灵敏度越高。
TRPS为研究人员提供了粒子 – 粒子相互作用的先进电荷研究,基于zeta的囊泡表征,可能导致载体粒子电荷改变的受体 – 配体相互作用,电荷报告抗体 – 抗原反应和基于适体的检测技术的工具。

 

 

 

qNano Gold

每种纳米粒子的详细信息

 

qNano Gold使用可调谐电阻脉冲传感(TRPS)原理测量粒子。TRPS是强大的粒子测量系统,可用于纳米和亚微米粒子的测量和分析。因此,qNano Gold仪器套件是一种非常强大和的工具,取代了旧的基于激光的集成方法。它可以测量具有高精度和重复性的单个颗粒,粒度和实际分布,浓度和表面电荷。

 

 

 

建立在Izon的TRPS测量平台上。

 

Izon Science的可调谐电阻脉冲传感(TRPS)是一种*的技术,可提供纳米粒子的尺寸,浓度和表面电荷的逐个粒子测量。

TRPS测量

 

qNano黄金规格

 

 

 

 

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分析范围

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40nm至10μm

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浓度范围

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1E5至1E11 / mL(取决于尺寸)

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电解质特性

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生理

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重量

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5公斤

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脚印

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265 x 140毫米

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高度

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275毫米

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EMCARE™试验 代谢测量胚胎

CPbio Reproduction为胚胎移植市场制造了一整套适合胚胎的培养基。我们的EMCARE™产品线包括用于冲洗,搬运,冷冻和解冻动物胚胎的产品。的MOPS缓冲液(惰性两性离子)提供稳定的微环境。新西兰来源的牛血清白蛋白在*冲洗和处理介质中提供天然和保护性表面活性剂和能源。当不需要牛白蛋白时,EMCARE™BioFree冲洗液和EMCARE™冲洗液是可选的。

专为胚胎移植行业的专业兽医和动物繁殖研究人员设计,EMCARE™培养基为冲洗,处理,冷冻和解冻胚胎提供了理想的条件。

 

 

EMCARE™试验

代谢测量胚胎

通过小二乘分析分析丙酮酸利用显示,与OCM(Ovum Culture Media)相比,EHM(MOPS缓冲EMCARE TM培养基)中储存的胚胎的14 CO 2产量显着增加(P> 0.001 )。卡方重新孵化分析显示,在25℃EHM储存后胚胎存活率显着(P> 0.001)提高。两个14 CO 2的生产和开发贮存后从24显著降低至48小时。

使用体外产生的牛胚胎评估发育过程中的胚胎毒性。结论是10mM浓度不如20mM有效,两性离子缓冲液在没有CO 2富集的情况下更好,MOPS(缓冲液)在裂解方面比HEPES或BES(缓冲液)毒性更小。事实上,在MOPS,20mM的,无CO 2,胚胎的87%达到了分裂期,而只有73%HEPES,20mM的,无CO的2,达到裂解。疗效相差19.2%。

有关更多信息,请参阅EMCARE™美国5,716,847。

 

EMCARE™胚胎移植产品

  • EMCARE™Complete Ultra Flushing Media含有ICPbio低内毒素牛血清白蛋白,可提供表面活性剂和胚胎保护特性,并具有吸收增塑剂,内毒素和蛋白酶的结合位点。
  • 低泡沫配方 – 比以前的配方少50%的泡沫。

 

Flushing Media Catalogue

单位 货号
EMCARE™完整的超冲洗解决方案 1L CECFS-100
EMCARE™完整的超冲洗解决方案 2L CECFS-200
EMCARE™冲洗液(不含白蛋白) 1L ECFS-100
EMCARE™冲洗液(不含白蛋白) 2L ECFS-200
EMCARE™BioFree Flushing w / PVA 1L ECPVA-100
EMCARE™BioFree Flushing w / PVA 2L ECPVA-200
白蛋白溶液,20%w / v 5x20ml ABRD-020

 

 

Handling Media Catalogue

单位 货号
EMCARE™控制解决方案 20x6ml MPHM-100
  5x20ml ECHM-100
  5x100ml ECHM-500
EMCARE™甘油10%v / v 20x6ml MPGF-100
EMCARE™蔗糖34.2%w / v 1M 20x6ml MPST-100
EMCARE™乙二醇1.5M 20x6ml MPEG-100
  5x20ml ECEG-100
EMCARE™解冻系统 4x4x6ml MPTP-080
 

* EMCARE™解冻系统
解冻
1. EMCARE™6%v / v甘油和10.3%w / v蔗糖
2. EMCARE™3%v / v甘油和10.3%w / v蔗糖
3. EMCARE™10.3%w / v蔗糖
4. EMCARE™控制解决方案

*使用EMCARE™解冻系统:在37°C水浴中解冻稻草15-20秒,然后每次6-7分钟将胚胎穿过4种溶液中的每一种。

含有0.4%的ICPbio牛血清白蛋白

 

EMCARE™是理想的媒体:

安全:

  • MOPS缓冲液比旧商用缓冲液提供更稳定的微环境
  • 天然的新西兰源辐照白蛋白清洁,保护并为胚胎提供能量
  • 无菌过滤
  • 受到广泛的质量保证程序

方便和可靠:

  • 准备就绪 – 采用现场准备的方便包装选项进行包装
  • 易于使用 – 冲洗组件连接
  • 不需要额外的过滤
  • 含有抗生素
  • 水质和离子强度可控制到严格的标准

专为胚胎移植(ET)行业的专业兽医和动物繁殖研究人员设计,EMCARE™培养基为冲洗,处理,冻结和解冻胚胎提供了理想的条件。

其优化的营养组合物增强了胚胎发育,并且MOPS缓冲液(惰性两性离子)提供更稳定的微环境。这是因为MOPS缓冲介质的毒性低于HEPES或磷酸盐介质。试验表明,MOPS缓冲培养基中的胚胎将比HEPES或磷酸盐缓冲培养基中的胚胎多出近20%。

EMCARE™预混合即用型介质可节省时间并保证一致的质量。

对于天然的保护性表面活性剂和能量来源,冲洗和处理介质还包含新西兰来源的ICPbio牛血清白蛋白。这是病毒筛选和照射到2.5Mrads,以确保安全,天然的胚胎保护剂。

所有产品含有25mg / L硫酸卡那霉素抗生素。

 

 

上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

1:强大的进口辐射能力,血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

2:产品种类齐全,经营超过700多个品牌,基本涵盖所有生物实验试剂耗材。

3:提供加急服务,货品一般1-2周到货。

4:富有竞争力的价格优势,绝大部分价格有优势。

5:多年积累良好的信誉,大部分客户提供货到付款服务。客户包括清华、北大、交大、复旦、中山等100多所高校,ROCHE,阿斯利康、国药、fisher等药企。

6:我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。

7:我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批发,欢迎合作。

 

biopal 微球测量血流量产品

 

 

 

 

biopal 微球测量血流量产品

技术信息

BioPAL的稳定同位素标记的微球为研究团体提供了一种经济有效的替代方法,可替代放射性和光学微球用于区域器官血流和颗粒沉积研究的测量。

使用稳定同位素标记的微球的实验方法与传统的放射性方法相同,仅在通过BioPAL进行的微球测定方面有所不同。实验结束时,收集感兴趣的组织样品,称重,然后放入BioPAL的无示踪剂聚丙烯样品瓶中。如果要计算血流测量值(mL / min / g),则将血液样本发送到BioPAL进行分析,该分析使用中子活化技术测量微球含量。研究人员可以在10个工作日内获得测定结果。

BioPAL的测定程序没有化学或物理破坏性,可以重复进行测量。因此,可以将样本存档以备将来参考。重新测定存储样品的能力是药物开发的主要优势。

非放射性微球可在临床前动物研究以及血管生成研究和灌注研究中测量局部血流量。

验证研究

BioPAL完成了由美国国立心脏,肺和血液研究所的国立卫生研究院(NIH)赞助的小型企业创新研究(SBIR)资助,以将我们稳定的标记微球和中子活化测定服务与传统的放射性血液测量方法进行比较流。

验证研究

出版参考

通用协议

 

优点

•无放射性
•无有害试剂
•非破坏性测定程序
•低成本
•高灵敏度和特异性
•十二种不同的微球标签
•十二种同时测量
•存档原始样品
•重新测定样品的能力
•快速的实验周转时间

比荧光微球,有色微球甚至放射性微球更好。中子活化微球是必经之路!

产品

提供了十种不同的稳定同位素标签(可根据要求提供其他标签)。微球装在10毫升和20毫升的小瓶中,每毫升约含250万个球。微球直径为15 µm(用于血流研究的标准尺寸)或直径为10 µm,并悬浮在含有Tween 80和0.01%硫柳汞的生理盐水中。

清洁BioPAL的聚丙烯样品瓶以去除痕量污染物,并针对我们的激活和计数系统进行校准。这些小瓶必须用于测定。

SansSaLine,一种无盐缓冲液,可替代组织化学染色剂中的盐水或PBS,用于洗涤和清洁样品,以使钠背景活性降至低,从而很大程度地提高了测量的灵敏度。

BioPAL收取每个样品的检测费。测定的结果报告为对于每个相应的微球标记物在每个样品中测得的每分钟总崩解度(dpm)。BioPAL还将计算每个样品中测得的血流量(mL / min / g),但需支付额外的测定费用。

定价信息

ation

Stable-Labeled Microspheres – 15 µm

Stable-Labeled Microspheres – 10 µm

Contaminant-Free, BioPAL Sample Vials

Saline-Free Buffer

BioPAL's Microsphere Assay Service

标记稳定的微球-15 µm

标记稳定的微球-10 µm

不含污染物的BioPAL样品瓶

无盐缓冲液

BioPAL的微球测定服务

BioPAL完成了由美国国立心脏,肺和血液研究所的国立卫生研究院(NIH)赞助的小型企业创新研究(SBIR)资助,以将我们稳定的标记微球和中子活化测定服务与传统的放射性血液测量方法进行比较流。

 

 

优点

•无放射性
•无有害试剂
•非破坏性测定程序
•低成本
•高灵敏度和特异性
•十二种不同的微球标签
•十二种同时测量
•存档原始样品
•重新测定样品的能力
•快速的实验周转时间

比荧光微球,有色微球甚至放射性微球更好。中子活化微球是必经之路!

​如何测量小鼠组织中的胶原蛋白?​

 

 

 

如何测量小鼠组织中的胶原蛋白?

 

介绍
胶原蛋白是脊椎动物体内丰富的蛋白质。胶原蛋白的准确分析对于胶原蛋白发挥重要作用的疾病研究以及纯化胶原蛋白在生物医学、化妆品或营养品行业的应用都很重要。
虽然胶原蛋白是人体的主要成分,但它是一种难以纯化和定量的分子。这部分是由于胶原蛋白分子通过不同类型的
交联,使胶原蛋白分子不溶,难以提取。
商用胶原蛋白分析的数量和类型有限。基于用天狼星红沉淀胶原蛋白分子,存在一些可溶性胶原蛋白的检测方法。然而,这种方法似乎不太适用于组织中胶原蛋白的分析。*泛使用的胶原蛋白分析是基于胶原蛋白水解为游离氨基酸,然后用HPLC或比色法测量胶原蛋白特异性羟脯安酸。然而,这些分析方法费时费力,需要特殊设备。为了克服这些缺点,我们最近开发了QuickZyme总胶原蛋白测定法,该法基于酸水解和比色检测的相同成熟原理,但速度更快,无需特殊设备。
在本应用说明中,我们比较了不同的测定方法,以测定各种小鼠组织中胶原蛋白的能力。我们使用QuickZyme总胶原蛋白测定法(酸水解,羟脯安酸比色检测)、HPLC“金标准”法(酸水解,羟脯安酸HPLC检测)和QuickZyme可溶性胶原蛋白测定法(酸/胃蛋白mei提取,天狼星红结合,比色检测)。

 

方法
处死健康小鼠(C57Bl6,8-10周龄),分离以下组织:肺、肝、肾、脾、心和真皮。此外,我们还以牛肌腱为样本。将组织/器官分为三部分,其中一部分用于湿重测定、干重测定(在冷冻干燥组织后)、在6 M HCl中的酸水解(10 mg湿组织/100µl 6M HCl,最小体积为200µl)以及通过HPLC或使用比色QuickZyme总胶原蛋白测定法定量羟脯安酸。另一部分直接用于湿重测定,然后使用QuickZyme总胶原蛋白测定法进行酸水解和羟脯安酸定量。第三部分用于湿重测定,用0.5 M醋酸/胃蛋白每过夜培养提取胶原蛋白,然后离心,并使用天狼星红可溶性胶原蛋白测定法进行定量。各种化验的化验原理见图1。

 

图1:。可溶性胶原蛋白测定法(左)、HPLC法总胶原蛋白测定法(中)和比色法总胶原蛋白测定法(右)的测定原理

 

 

 

后果
-通过酸水解,然后通过HPLC或QuickZyme比色法对胶原蛋白进行定量,两者之间的相关性非常好,并产生类似的值

 

图1:HPLC和羟脯安酸比色分析的比较。数值表示µg胶原蛋白/mg湿组织

 

 

水解可以用湿组织进行,也可以用干组织进行,结果相似。

 

 

图2:湿组织和干组织中羟脯安酸分析的比较。数值表示µg胶原蛋白/mg组织

 

-用基于天狼星红的可溶性胶原蛋白分析法分析各种组织中的可溶性胶原蛋白,得出了不同的结果,其值远低于总胶原蛋白的值,许多组织甚至接近检测极限。与QuickZyme总胶原蛋白测定法相比,可溶性胶原蛋白分析法测得的总胶原蛋白水平要低得多,例如肺2.5%,肾10%,脾8%,真皮9%,肌腱3%。低值可能是由于从大多数组织中提取的成熟胶原蛋白不足。
-用不同方法测量的各种组织中的胶原蛋白含量如表1所示。很明显,每个器官的胶原蛋白水平各不相同,肌腱的胶原蛋白含量最高,其次是皮肤、肺、脾、肾、心脏和肝脏。

 

 

表1 通过酸水解,然后通过HPLC或QuickZyme比色分析,分析各种组织中胶原蛋白的近似量(每毫克湿重组织中含有µg胶原蛋白)。

 

-组织在6 M HCl(最小体积HCl 200µl)中以100 mg/ml(湿重,湿重/干重比见表3)水解,水解产物用4M HCl稀释,如表2所示,35µl稀释水解产物用于总胶原蛋白分析(根据分析手册中的方案)。如表2所示,使用QuickZyme总胶原蛋白分析的最佳稀释因子因组织而异。确定该稀释系数时,应确保不存在基质效应(如果样品稀释不足,则会发生),且该值符合标准线的范围。

 

 

 

 

 

 

-各种组织的湿重与干重之比介于5.0(肺)和3.5(肌腱和皮肤)之间。湿组织或干组织中的胶原蛋白分析得出了类似的结果(数据未显示)。
-在肝组织水解物中,由于稀释程度较低的样品中出现基质效应,稀释因子为5-10。这导致OD值较低(接近或低于标准线中的低浓度)。因此,对于这种类型的组织,我们开发了一种改良的胶原蛋白分析方法,在该方法中未观察到基质效应,因此不需要稀释水解物(见第7页的说明,QuickZyme敏感组织胶原蛋白分析)。

 

 

 结论
•每个组织的胶原蛋白含量不同:肌腱>皮肤>肺>肾>脾>心脏>肝脏
•基于天狼星红的胶原蛋白分析不太适合组织中的胶原蛋白分析,可能是因为从组织中提取的胶原蛋白有限
•定量组织中胶原蛋白的最佳方法是充分水解组织,然后通过HPLC或比色法分析羟脯氨酸
•QuickZyme总胶原蛋白分析非常适合组织中的胶原蛋白分析,结果与HPLC相似,但快速、简单,不需要特殊设备。
•对于胶原蛋白含量低、基质效应大的组织样品,我们开发了QuickZyme敏感组织胶原蛋白分析。

QuickZyme Biosciences已开发了一系列用于分析任何物种胶原蛋白的分析方法,每种方法都有不同的应用领域
QuickZyme Biosciences提供胶原蛋白分析:
•QuickZyme可溶性胶原蛋白分析
•QuickZyme总胶原蛋白测定
•QuickZyme羟脯安酸测定
•QuickZyme敏感组织胶原蛋白分析
•QuickZyme敏感组织羟脯安酸测定

QuickZyme可溶性胶原蛋白测定
该分析可识别可溶性或(酸/胃蛋白每)可溶性胶原蛋白。该分析为比色法,采用96孔板格式,基于胶原与天狼星红(一种含磺酸基的阴离子染料)的沉淀。这种染料可以结合碱性氨基酸残基的侧链。染料在高pH下从沉淀的络合物中释放,然后进行比色检测。该分析经过优化,以使其他蛋白质(如白蛋白)不会干扰。明胶(未折叠的胶原蛋白)不被该分析所识别。
应用:该方法用于测定细胞培养条件培养基中的可溶性胶原蛋白和细胞提取物中的可溶性胶原蛋白(酸或酸/胃蛋白每)。由于组织中成熟胶原蛋白的提取效率非常低,因此该方法不太适合测量组织提取物中的胶原蛋白。
QuickZyme总胶原蛋白测定
该分析可识别所有类型的胶原,无论其形式如何(成熟、未成熟、前胶原、降解胶原、交联胶原、各种来源的胶原)。
该分析为比色法,采用96孔板格式,并基于羟脯安酸的定量,羟脯氨酸是一种仅存在于胶原蛋白中的氨基酸。含胶原蛋白样品经酸水解后,羟脯安酸从胶原蛋白中释放出来。水解在950C下进行,产品可直接用于羟脯安酸分析,无需洗涤或干燥步骤。该分析基于已建立的氯胺T/DMBA方法。
用途:该方法用于测定总胶原蛋白。这包括所有胶原类型和形式,例如:前胶原、未折叠胶原、成熟胶原以及样品中所有胶原类型的胶原降解产物。由于第一步是样品的*水解,提取胶原蛋白的困难不起作用。该分析适用于各种类型的样品,包括组织。

QuickZyme敏感组织胶原测定
用羟脯安酸比色法测定组织样本中的胶原蛋白时,一个常见的并发症是出现所谓的基质效应,这是由样本中未识别的成分引起的。矩阵效应可能导致错误的高值或低值。可以通过稀释样品来防止基质效应。然而,这种稀释会导致样品的有效灵敏度较低,这对于小型
胶原蛋白含量低的样品。
与其他基于羟脯氨酸的分析相比,QuickZyme敏感组织胶原蛋白分析没有基质效应,也不需要稀释水解物,从而能够在低胶原蛋白浓度的小样本中进行测量。该方法简单,不需要酸水解后的干燥步骤,通常需要特殊设备。
应用:该方法用于测量组织样本中的胶原蛋白,尤其是低胶原蛋白含量的组织,如肝脏。
QuickZyme羟脯安酸测定
该测定方法与总胶原蛋白测定方法相似,不同之处在于没有胶原蛋白水解的方案和材料,也没有胶原蛋白标准,但提供了羟脯安酸标准。
应用:该分析与总胶原蛋白分析具有相同的应用领域,但适用于有自己的水解方法或收集水解样品进行分析的客户。
QuickZyme敏感组织羟脯安酸测定
该测定方法与敏感组织胶原蛋白测定方法相似,不同之处在于没有胶原蛋白水解的方案和材料,也没有胶原蛋白标准,但提供了羟脯安酸标准。
应用:该分析与敏感组织胶原蛋白分析具有相同的应用领域,但适用于有自己水解方法或收集水解样品进行分析的客户。