重组猪源RNase抑制剂说明书
产品详情
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货号 |
规格 |
价格 |
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78BAB10003-100uL |
100uL(4KU) |
￥200.00 |
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78BAB10003-1ml |
1ml (40KU) |
￥1600.00 |
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78BAB10003-50ml |
50ml (2MU) |
￥50000.00 |
产品描述
本产品是以大肠杆菌中进行表达，并通过亲和层析纯化的重组猪源RNase抑制剂，该蛋白特征与猪肝和人胎盘来源此类酶相似，可替代天然提取 RNase Inhibitor的应用。本产品与RNase A形成1： 1复合体，抑制RNase活性。该反应是可逆的，通过尿素及巯基类试剂能够解离复合体，使RNase复性而抑制剂不可逆失活。本产品与其它竞争性抑制剂（核酸类，无机磷酸类）不同，可以很容易地通过苯酚处理将其从反应体系中除去，但不能抑制逆转录酶的RNase H的活性。使用时可直接加入含有RNA的反应液中用于cDNA第一链合成、体外转录和体外翻译等实验。
产品特点
· cDNA合成
· 体外转录
· 体外翻译
· 1-Step RT-qPCR
产品组分
缓冲液成分：20 mM HEPES-KOH(pH 7.6)，50mM KCl，8mM DTT，50% (v/v) glycerol。
使用方法
使用方法
温馨提示：需要用无RNA酶的PCR管中配制RNA/引物预混液
1 cDNA合成
（1）在无RNA酶的PCR管中配制RNA/引物预混液
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组分 |
反应体积（10ul） |
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Oligo(dT)20 （或Random primer） （或基因特异引物） |
25pmoles (25pmoles) (5pmoles) |
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10mM dNTPs |
2µL |
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模板RNA |
2pg-5µg |
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DNase/Rnase Free Water |
10ul |
（2）65℃加热5min，立即置于冰上
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组分 |
反应体积（10ul） |
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RNA引物预混液 |
10ul |
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5x RT Buffer |
4µL |
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Jinpan Reverse Transcritase |
1ul |
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RNase inhibitor(40U/µL) |
1ul |
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100mM DTT |
2ul |
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DNase/Rnase Free Water |
补足20ul |
（3）轻轻混匀，按如下反应条件设置
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逆转录反应条件 |
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1 |
42℃ |
20-60min |
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2 |
99℃ |
5min |
备注：逆转录温度可在42-60℃之间调整，反应时间建议在20-60min内调整
（4）得到的cDNA溶液可以直接用于第二链cDNA合成及后续PCR反应。
优化参考方法
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优化参数 |
参考范围 |
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逆转录 |
50-60℃ 5-15min |
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预变性温度时间 |
95-98℃ 10sec-5min |
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变性温度 |
95-98℃ 3sec-10sec |
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延伸/退火温度 |
60-65℃ 5sec-30sec |
注意事项
1. 本产品在PH7〜8时表现最佳抑制RNase活性。
2. 本产品发挥活性作用至少添加1 mM的DTT。
3. 本产品不抑制RNase H活性及逆转录酶活性。
运输及保存方法
-20℃可保存12个月。