Nageotte计数室推荐红细胞制品白细胞计数方法

 

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Nageotte计数室推荐红细胞制品白细胞计数方法

NAGEOTTE COUNTING CHAMBER SUGGESTED METHOD FOR COUNTING LEUKOCYTES IN RED CELL PRODUCTS

1.0 SCOPE

1.1

这种计数方法描述了一种用于可视化计数白细胞的方法,这些白细胞存在于白细胞贫乏的血液或红细胞包装产品中。,

 

1.2该方法的灵敏度为0.1白细胞/毫升,应用于白细胞耗竭的程序。

 

在Hausser计数室中将计数降低到低于5白细胞/升的水平。

2.0

设备,装备

 

-具有大尺寸盖板卡瓦(带腔室)的NageFlowt计数室

 

-Turk溶液

 

10-100 pl吸管

 

-10-1000 Pl移液器

 

-10-1000PL吸管

 

~-12×75 mm塑料试管

 

配备20倍物镜的实验室显微镜(10倍目镜)

 

覆有湿滤纸的培养皿

 

3.0   程序,手续

 

3.1标号试管。

 

3.2在每根管子上加入900 Pl的Turk溶液。

 

3.3在适当标记的试管中加入100 Pl,使每个样品稀释1:10。

 

多次冲洗吸管针尖,以确保样品被转移到稀释剂中。

 

3.4用涡旋法将稀释后的样品混合均匀,静置10分钟(不超过1小时),将红细胞溶解。

3.5.将稀释后的样品再次混合,取出:-600升加入吸管。小心地把盖子放在一个干净的,干燥的Nageotte室上。盖子滑块必须地集中在密室上。小心 加载Nageotte计数室,不干扰盖的滑动,直到它是满的。从气室一侧加载,只为了防止空气被困住。一次请勿打扰盖子。 他的房间里装了子弹。

 

3.6允许小室在潮湿的培养皿中休息15分钟,使白细胞沉降。在30分钟内清点样品。

 

3.7通过在网格区域来回扫描来计数白细胞。计数区域内的所有白细胞(即40个矩形),包括接触所有线的细胞。

 

3.8在一个网格区域内计算所有40个矩形-这是次计数。

 

3.9移至第二个栅格区(以上或低于已计算的区域),并计算类似的区域(3.7-3.8)。这是重复计数。

 

3.10计算白细胞/细胞使用下列公式:

 

扬声器细胞/pl=出售计数x稀释体积计数(Ul)

动物血浆(去红细胞、无菌过滤)H0101


动物血浆(去红细胞、无菌过滤)

  • 产品型号:H0101
  • 简要描述:动物血浆(去红细胞、无菌过滤)金畔生物公司供应:ELISA试剂盒,动物血清,荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器。
产品咨询在线客服
  • 产品简介

动物血浆(去红细胞、无菌过滤)金畔生物公司供应:ELISA试剂盒,动物血清,荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,进口吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器,分光光度计。

产品编号             产品名称                                                   产品规格

H0101 胎牛血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/500ml/500ml*20
H0201 兔血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/500ml/500ml*20
H0301 新生牛血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/500ml/500ml*20
H0401 小牛血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
H0501 大牛血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
H0601 马血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
H0701 山羊血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
H0801 绵羊血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
H0901 鸡血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
H1001 猪血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
H1201 驴血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
H1301 大鼠血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml
H1401 小鼠血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml
H1501 豚鼠血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml

动物血浆(去红细胞、无菌过滤)

储存:

-10℃,避光 恒温冰箱

马血清 (无菌过滤)

血清的主要成分

血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。

脱纤维动物血清(无菌pet瓶装/袋装)

血清的保存方法:
(1)长期保存的血清必须储存于-20℃ – 70℃ 低温冰箱中.4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月.由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂.
(2)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌.如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清.
(3)血清解冻: 瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装.在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀.
(4)热灭活是指56℃, 30分钟加热已完全解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多.

动物血浆 去红细胞、无菌过滤

无菌过滤 动物血清

A0101胎牛血清(无菌采制)100ml/200ml/500ml

A0201特级新生牛血清(无菌采制)100ml/200ml/500ml

A0301优级新生牛血清(无菌采制)100ml/200ml/500ml

A0401标准新生牛血清(无菌采制)100ml/200ml/500ml

胎牛血清500ml一瓶/箱

高品胎牛血清50ml一瓶/箱

高品胎牛血清100ml一瓶/箱

高品胎牛血清500ml一瓶/箱

适应客户:医院检验科PCR实验室,中心实验室,肝病中心;第三方检测机构,科研院所,大专院校,制药厂,试剂生产厂家,疾控中心,检验检疫。

温馨提示:不可用于临床治疗。

红细胞裂解液

红细胞裂解液

¥100.00

货号:BL503A

规格:120ml

品牌:Jinpan

红细胞裂解液

产品编号

产品名称

规格

BL503A

红细胞裂解液

120 ml

BL503B

红细胞裂解液

500 ml

 

产品简介

红细胞裂解液是一种用于从人或鼠等的血液或组织样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。经过优化配方,在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。主要有效成分为氯化铵。不适用于有细胞核红细胞的裂解,例如鸟或禽类的红细胞。已经过无菌处理,处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。

使用说明

对于组织细胞样品:

1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。

2、加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml,则加入3-5ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。

3400-500g离心5分钟,弃红色上清。4离心效果更佳。

4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

5、洗涤1-2次:加入适量PBSHBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g离心2-3分钟,弃上清。可再重复1次,共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4离心效果更佳。

6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤:

1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。

2、对于0.2ml细胞沉淀加入1ml红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。本步骤在室温或4度操作均可。

3、加入15-20ml PBSHBSS、生理盐水或无血清培养液,混匀。

4400-500g离心5分钟,弃红色上清。4离心效果更佳。

5、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

说明:对于常规步骤,多一步洗涤过程中的离心,但可以节省洗涤液的用量,并且洗涤效果也更好一些,同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心,但洗涤效果略差一些,同时需要大体积的离心管。

对于血液样品:

1、取新鲜抗凝血,400-500g离心5分钟,离心弃上清。

2、加入6-10倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml,则加入6-10ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。注意:对于鼠的血液,裂解1-2分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至4-5分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。

3 400-500g离心5分钟,弃红色上清。4离心效果更佳。

4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

5、洗涤1-2次:加入适量PBSHBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g离心2-3分钟,弃上清。可再重复1次,共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4离心效果更佳。

6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

注意:对于微量或少量的血液样品,可在第一步中不进行离心弃上清的操作,直接在第

二步中加入10倍血液体积的红细胞裂解液,并在室温或4裂解4-5分钟。对于鼠的血液,裂解4-5分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至10分钟,但通常不宜超过15分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。后续步骤相同。

对于血液样品无需洗涤的快速操作步骤:

1、1ml新鲜抗凝血中加入10ml红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解4-5分钟。本步骤在室温或4度操作均可。注意:对于鼠的血液,裂解4-5分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至10分钟,但通常不宜超过15分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。

2、加入20-30ml PBSHBSS、生理盐水或无血清培养液,混匀。

3 400-500g离心5分钟,弃红色上清。4离心效果更佳。

4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

5、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

注意:对于常规步骤,多一步洗涤过程的离心,但可以节省洗涤液的用量,并且洗涤效果也更好一些,同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心,但洗涤效果略差一些,同时需要大体积的离心管。

注意事项

1、本裂解液为无菌产品,请注意保持无菌,使用本产品时宜在超净工作台内进行。

2 如果经过红细胞裂解液处理后的样品后续用于总RNA的提取,在处理细胞时不必使用经过DEPC处理过的溶液。

3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件

4保存,一年有效。室温保存,3个月有效。

货号 BL503A
规格 120ml
品牌 Jinpan
说明书下载 点击下载
  • 红细胞裂解液

红细胞裂解液

红细胞裂解液

¥300.00

货号:BL503B

规格:500ml

品牌:Jinpan

红细胞裂解液 

产品简介

红细胞裂解液是一种用于从人或鼠等的血液或组织样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。经过优化配方,在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。主要有效成分为氯化铵。不适用于有细胞核红细胞的裂解,例如鸟或禽类的红细胞。已经过无菌处理,处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。

使用说明

对于组织细胞样品:

1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。

2、加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml,则加入3-5ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。

3400-500g离心5分钟,弃红色上清。4离心效果更佳。

4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

5、洗涤1-2次:加入适量PBSHBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g离心2-3分钟,弃上清。可再重复1次,共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4离心效果更佳。

6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤:

1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。

2、对于0.2ml细胞沉淀加入1ml红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。本步骤在室温或4度操作均可。

3、加入15-20ml PBSHBSS、生理盐水或无血清培养液,混匀。

4400-500g离心5分钟,弃红色上清。4离心效果更佳。

5、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

说明:对于常规步骤,多一步洗涤过程中的离心,但可以节省洗涤液的用量,并且洗涤效果也更好一些,同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心,但洗涤效果略差一些,同时需要大体积的离心管。

对于血液样品:

1、取新鲜抗凝血,400-500g离心5分钟,离心弃上清。

2、加入6-10倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml,则加入6-10ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。注意:对于鼠的血液,裂解1-2分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至4-5分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。

3 400-500g离心5分钟,弃红色上清。4离心效果更佳。

4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

5、洗涤1-2次:加入适量PBSHBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g离心2-3分钟,弃上清。可再重复1次,共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4离心效果更佳。

6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

注意:对于微量或少量的血液样品,可在第一步中不进行离心弃上清的操作,直接在第二步中加入10倍血液体积的红细胞裂解液,并在室温或4裂解4-5分钟。对于鼠的血液,裂解4-5分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至10分钟,但通常不宜超过15分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。后续步骤相同。

对于血液样品无需洗涤的快速操作步骤:

1、1ml新鲜抗凝血中加入10ml红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解4-5分钟。本步骤在室温或4度操作均可。注意:对于鼠的血液,裂解4-5分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至10分钟,但通常不宜超过15分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。

2、加入20-30ml PBSHBSS、生理盐水或无血清培养液,混匀。

3 400-500g离心5分钟,弃红色上清。4离心效果更佳。

4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

5、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

注意:对于常规步骤,多一步洗涤过程的离心,但可以节省洗涤液的用量,并且洗涤效果也更好一些,同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心,但洗涤效果略差一些,同时需要大体积的离心管。

注意事项

1、本裂解液为无菌产品,请注意保持无菌,使用本产品时宜在超净工作台内进行。

2 如果经过红细胞裂解液处理后的样品后续用于总RNA的提取,在处理细胞时不必使用经过DEPC处理过的溶液。

3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件

4保存,一年有效。室温保存,3个月有效。

规格:500ml/瓶  6瓶/箱

货号 BL503B
规格 500ml
品牌 Jinpan
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  • 红细胞裂解液

动物血浆系列 (去红细胞、无菌过滤)H0101


动物血浆系列 (去红细胞、无菌过滤)

  • 产品型号:H0101
  • 简要描述:动物血浆系列 (去红细胞、无菌过滤)金畔生物公司供应:荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器。
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  • 产品简介

动物血浆系列 (去红细胞、无菌过滤)上海金畔生物科技有限公司供应:血清,光度计,检测仪,移液器吸嘴,离心管,冻存管,培养皿,全系荧光定量PCR耗材。

规格包装:100ml/500ml/500ml*20

动物血浆系列

H0101 胎牛血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/500ml/500ml*20
H0201 兔血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/500ml/500ml*20
H0301 新生牛血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/500ml/500ml*20
H0401 小牛血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20
H0501 大牛血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20
H0601 马血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20
H0701 山羊血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20
H0801 绵羊血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20
H0901 鸡血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20
H1001 猪血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20
H1201 驴血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20
H1301 大鼠血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml
H1401 小鼠血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml
H1501 豚鼠血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml

血清的主要成分

血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。

动物血浆系列 (去红细胞、无菌过滤)适应客户:医院检验科PCR实验室,中心实验室,肝病中心;第三方检测机构,科研院所,大专院校,制药厂,试剂生产厂家,疾控中心,检验检疫。

 

温馨提示:不可用于临床治疗。