名称：线性PEI转染试剂,
化学名: 线性聚乙烯亚胺,
cas号：9002-98-6
分子量：25KD
用途：用于转染核酸到哺乳动物细胞
产品编号：78002qf01 78002qf02 78002qf03
包装规格：1 mL / 50 mL / 500 mL
储存条件：4℃~8℃密闭保存，可保持稳定至少 12 个月，常温运输。 ?
产品概述 线性PEI转染试剂是一种阳离子聚合物，分子量25000，它能与核酸形成复合物，并使该复合 物进入哺乳动物细胞。线性PEI转染试剂广泛适用于常见细胞系，如 HEK-293、HEK293T、 Hep G2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3 和 Sf9 等。该试剂即使在有血清存在的情况下， 它仍然能的将核酸导入细胞。 jinpanbio公司提供的 线性PEI转染试剂具有如下优点： 优越的转染效率 , 重组蛋白的高表达水平 ,与含血清的培养基相兼容, 低细胞毒性 ,易于操作 ?
质量控制 每批次线性PEI转染试剂均经过转染测试。将 eGFP 表达质粒（GeneCopoeia Cat.No. EX-EGFP-Lv01）用 EndoFectinTM-Plus 转染试剂转入亚融合状态的 HEK-293 细胞，转染 16 h 后， 超过 95%的细胞表达 eGFP。 ?
注意事项
质粒质量：请务必使用高质量转染级无内毒素质粒（推荐使用QIAGEN或者MN公司去内毒素质粒提取试剂盒）。通过 260 nm 光吸收测定 DNA 浓度，260 nm / 280 nm 比值确定 DNA 纯度（比值应该在 1.8~2.0 的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测 质粒的完整性。
细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果 细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者jinpanbio公司血清培养细胞。 ?
瞬时转染方法
1. 接种细胞： 转染前一天，用胶原酶消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，总体积如表 1 所示，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。
2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表 1 所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 2-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液 的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙 烯管，例如 Falcon 5 mL /14 mL 离心管。
3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染 3 h 后，添加?体积的包含 30%血清的生长培养基。
4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后zui快 7 h 即可检测到转入基因的表达。 请自行确定检测时间。 ?
稳定转染方法
1. 接种细胞： 转染前一天，用胰酶消化细胞并计数。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，总体积如表 1 所示，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。
2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表 1 所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 2-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液 的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙 烯管，例如 Falcon 5 mL /14 mL 离心管。
3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染 3 h 后，添加?体积的包含 30%血清的生长培养基。
4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后zui快 7 h 即可检测到转入基因的表达。
5.转染 24 h 后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释 10 倍 以上），在 CO2培养箱中 37℃孵育过一晚。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可 筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。 ?
特别提醒
1. 对于某些类型的细胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 细胞，在转染前两天铺板可显著 提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞 的汇合度仍为 70~80%。
2. 对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。
3. 即使在有蛋白（如 10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是 DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用 Opti-MEM ITM 培养 基以达到*转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。
4. 对大多数细胞来而言，每 1 μg DNA 使用 3.0 μL EndoFectinTM 试剂都能获得较高转染效率。使用 者也可尝试每 1 μg DNA 使用 1~4 μL 体积线性PEI转染试剂进行优化。
订货信息
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货号 |
品名 |
价格￥ |
规格 |
品牌 |
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78002qf01 |
线性PEI转染液 |
200 |
1ml |
jinpanbio |
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78002qf02 |
线性PEI转染液 |
800 |
50ml |
jinpanbio |
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78002qf03 |
线性PEI转染液 |
5500 |
500ml |
jinpanbio |