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文章摘要：对恶性肿瘤患者，肿瘤细胞疫苗通过激活宿主主动免疫，可以延长患者的生存期。有效的免疫应答需要肿瘤抗原在肿瘤基质中，由细胞通过组织相容性抗原（MHC）递呈来实现。以往的体外试验、动物实验和在新鲜组织标本中已证实肿瘤抗原与抗原递呈细胞上的MHC相互作用。但还无法应用于临床。德国癌症研究中心的Lukas Bunse等通过邻位连接技术（proximity ligation assay, PLA）优化临床检测过程，在胶质瘤的石蜡切片中验证肿瘤抗原与MHCⅡ的相关性。结果发表在2015年2月的《The Journal of Clinical Investigation》上。

【Ref: Bunse L, et al. J Clin Invest. 2015 Feb;125(2):593-606. doi: 10.1172/JCI77780. Epub 2015 Jan 2.】

对恶性肿瘤患者，肿瘤细胞疫苗通过激活宿主主动免疫，可以延长患者的生存期。有效的免疫应答需要肿瘤抗原在肿瘤基质中，由细胞通过组织相容性抗原（MHC）递呈来实现。以往的体外试验、动物实验和在新鲜组织标本中已证实肿瘤抗原与抗原递呈细胞上的MHC相互作用。但还无法应用于临床。德国癌症研究中心的Lukas Bunse等通过邻位连接技术（proximity ligation assay, PLA）优化临床检测过程，在胶质瘤的石蜡切片中验证肿瘤抗原与MHCⅡ的相关性。结果发表在2015年2月的《The Journal of Clinical Investigation》上。

PLA是一种高灵敏度蛋白质检测新技术，通过一对核酸适体探针识别目标蛋白分子。当目标蛋白相互作用时，它们在空间位置上相互接近，并与特异核酸链连接，并经PCR反应扩增特异核酸链，来实现对相互作用的目标蛋白分子检测、定位和定量。

该研究结果显示，通过PLA方法可以原位检测胶质瘤内MHCⅡ分子和突变型异柠檬酸脱氢酶1（IDH1R132H）蛋白的相互作用，确定这些蛋白的免疫抗原性和抗原表位。作者认为该检测技术能用于获得在胶质瘤组织中是否存在特异性抗原的必要信息，有助于指导临床上对具有特异性抗原胶质瘤的免疫治疗。

图1. A图示突变型IDH1R132H单克隆抗体（H09）在弥漫性星形细胞瘤上的免疫组化染色；B图示IDH1蛋白包含第132位氨基酸的15肽和20肽；C图示B中多肽与H09的ELISA结果，p122-136、p124-138、p123-142、p126-140的免疫原性zui强；D和E图示IDH1R132H多肽与MHC II复合物可以*抑制游离IDH1R132H与H09的ELISA结果。

图2. A图为抗HLA-DR和H09进行PLA的示意图，其中红圈表示PCR扩增循环，α和β为HLA-DR链，pIDH为IDH1抗原表位多肽。B图为胶质瘤细胞株LN229的流式和免疫荧光结果。C图为IDH1及其突变型的生化反应，后者特征性产生2HG。D图为野生型IDH1、突变型IDH1R132H和IDH1D252G基因代谢产物2HG的浓度。E和F图为LN229过度表达突变型IDH1的Western blot和免疫荧光结果。

图3. A图通过PLA技术可以看到IDH1R132H和HLA-DR在IDH1R132H过表达的LN229细胞株中存在共定位（colocalization）。B图通过RNA干扰抑制HLA-DR表达可以消除这种共定位现象。C图通过流式试验证实RNA干扰可以显著降低HLA-DR表达。D图示IDH1R132H和HLA-DR的PLA（红色）和IDH1R132H染色（绿色）。E图示IDH1R132H和HLA-DR的PLA和IDH1R132H表达在过度表达IDH1R132H的LN229细胞中的相关性。

图4. A图示NCH620细胞株的IDH1R132H-HLA-DR的PLA、IDH1R132H的IHC和HLA-DR的IHC。B图和C图分别示胶质瘤细胞株NPH001和NCH645的IDH1R132H-HLA-DR的PLA。D图示NCH620细胞株的IDH1R132H-HLA-DR的PLA和HLA-DR的荧光共标。

（感谢 ：复旦大学附属华山医院小卡西乌斯编译，复旦大学附属华山医院陈灵朝博士审校，复旦大学附属华山医院陈衔城教授终审）