标签归档：裂解

红细胞裂解液

发表于由

红细胞裂解液

￥300.00

货号：BL503B

规格：500ml

品牌：Jinpan

红细胞裂解液 

产品简介：

红细胞裂解液是一种用于从人或鼠等的血液或组织样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。经过优化配方,在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。主要有效成分为氯化铵。不适用于有细胞核红细胞的裂解,例如鸟或禽类的红细胞。已经过无菌处理,处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。

使用说明：

对于组织细胞样品：

1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。

2、加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml,则加入3-5ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。

3、400-500g离心5分钟,弃红色上清。4℃离心效果更佳。

4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

5、洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g离心2-3分钟,弃上清。可再重复1次,共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。

6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤：

1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。

2、对于0.2ml细胞沉淀加入1ml红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。本步骤在室温或4度操作均可。

3、加入15-20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,混匀。

4、400-500g离心5分钟,弃红色上清。4℃离心效果更佳。

5、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

说明：对于常规步骤,多一步洗涤过程中的离心,但可以节省洗涤液的用量,并且洗涤效果也更好一些,同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心,但洗涤效果略差一些,同时需要大体积的离心管。

对于血液样品：

1、取新鲜抗凝血,400-500g离心5分钟,离心弃上清。

2、加入6-10倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml,则加入6-10ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。注意：对于鼠的血液,裂解1-2分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至4-5分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。

3、 400-500g离心5分钟,弃红色上清。4℃离心效果更佳。

4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

5、洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g离心2-3分钟,弃上清。可再重复1次,共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。

6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

注意：对于微量或少量的血液样品,可在第一步中不进行离心弃上清的操作,直接在第二步中加入10倍血液体积的红细胞裂解液,并在室温或4℃裂解4-5分钟。对于鼠的血液,裂解4-5分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至10分钟,但通常不宜超过15分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。后续步骤相同。

对于血液样品无需洗涤的快速操作步骤：

1、每1ml新鲜抗凝血中加入10ml红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解4-5分钟。本步骤在室温或4度操作均可。注意：对于鼠的血液,裂解4-5分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至10分钟,但通常不宜超过15分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。

2、加入20-30ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,混匀。

3、 400-500g离心5分钟,弃红色上清。4℃离心效果更佳。

4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

5、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

注意：对于常规步骤,多一步洗涤过程的离心,但可以节省洗涤液的用量,并且洗涤效果也更好一些,同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心,但洗涤效果略差一些,同时需要大体积的离心管。

注意事项：

1、本裂解液为无菌产品,请注意保持无菌,使用本产品时宜在超净工作台内进行。

2、 如果经过红细胞裂解液处理后的样品后续用于总RNA的提取,在处理细胞时不必使用经过DEPC处理过的溶液。

3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

4℃保存,一年有效。室温保存,3个月有效。

规格：500ml/瓶  6瓶/箱

货号 BL503B
规格 500ml
品牌 Jinpan
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  • 红细胞裂解液

RIPA裂解液(强)

发表于由

RIPA裂解液(强)

￥270.00

货号：BL504A

规格：100ml

品牌：Jinpan

RIPA裂解液(强) 

别名：RIPA Lysis Buffer

产品简介：

该RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。

RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。

用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用说明：

对于培养细胞样品：

1、融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。

2、对于贴壁细胞：去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。

3、充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。

对于组织样品：

1、把组织剪切成细小的碎片。

2、融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。

3、按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)

4、用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

5、充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。

注意事项：

1、为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2、需自备PMSF。

3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

4、关于裂解液,也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。

5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

-20℃保存,一年有效。

货号 BL504A
规格 100ml
品牌 Jinpan
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  • RIPA裂解液(强)

Western及IP细胞裂解液

发表于由

Western及IP细胞裂解液

￥280.00

货号：BL509A

规格：100ml

品牌：Jinpan

Western及IP细胞裂解液 

别名：Cell lysis buffer for Western and IP

产品简介：

Western及IP细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP),是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀(immunol precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)。

 Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris (pH7.5),150mM NaCl,1% Triton X-100,以及sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,EDTA,Na3VO4,leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用说明：

对于培养细胞样品：

1、融解Western及IP细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。

2、对于贴壁细胞：去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(若血清中的蛋白没有干扰,可不洗)。按照6孔板每孔加入100-200ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。

  对于悬浮细胞：离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应无明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。

3、充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加100ul裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150或200ul。

对于组织样品：

1、把组织剪切成细小的碎片。

2、融解Western及IP细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。

3、按照每20mg组织加入100-200ul裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)

4、用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

5、充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注意事项：

1、为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2、需自备PMSF。

3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

4、可能需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。

5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

-20℃保存,一年有效。

货号 BL509A
规格 100ml
品牌 Jinpan
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  • Western及IP细胞裂解液

Western及IP细胞裂解液（非变性）

发表于由

上海金畔生物科技有限公司提供Western及IP细胞裂解液（非变性） ，欢迎访问官网了解更多产品信息。

产品编号 C-0013
英文名称 WIP (Lysis Buffer for WB/IP Assays, Nondenaturing)
中文名称 Western及IP细胞裂解液（非变性）
别    名 Tissue and Cell Lysis Reagent; Cell lysis buffer for Western and IP; Mammalian Total Protein Extraction Kit; Protein Extraction Kit; Lysis Buffer for WB/IP Assays; WIP (Lysis Buffer for WB/IP Assays)  非变性组织/细胞裂解液; Western/IP细胞裂解液; Western/IP组织细胞裂解液; WB/IP细胞裂解液; 免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液; WB/IP组织细胞裂解液; Western及IP细胞裂解液
Western及IP细胞裂解液（非变性）
Specific References  (3)     |     C-0013 has been referenced in 3 publications.
[IF=3.38] Wei F et al. Diagnostic significance of methylation of PTEN and DAPK in thyroid tumors. Clin Endocrinol (Oxf) . 2020 Aug;93(2):187-195.  WB ;  human.  
PubMed:32286703

[IF=2.65] Zong Chunxiao. et al. Huayu Sanjie Enema Liquid Relieves Pain in Endometriosis Model Rats by Inhibiting Inflammation, Peripheral Sensitization, and Pelvic Adhesion. EVID-BASED COMPL ALT. 2022;2022:5256578  
PubMed:35800014

[IF=1.664] Sun Y et al. Effect on the liver cancer cell invasion ability by studying the associations between autophagy and TRAP1 expression.Oncol Lett. 2018 Jul;16(1):991-997.  Other ;  
PubMed:29963174

保存条件 Store at -20℃ stable for 12 months.
注意事项 This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍 Tissue and Cell Lysis Reagent for Western Blot and Immunoprecipitation.
A proprietary, non-denaturing formulation of zwitterionic detergents used for the lysis of bacterial cells and extraction of recombinant proteins.

一. Western及IP细胞裂解液使用说明书
产品简介
WIP组织细胞裂解液(Tissue and Cell lysis solution for Western Blot and Immunoprecipitation )，是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本产品裂解细胞获得的裂解产物，可用于PAGE，蛋白印迹（Western Blot），免疫沉淀(immnolprecipitation，IP)，免疫共沉淀(co-IP) 和蛋白与多肽的分离纯化。
WIP裂解液的主要成分为Tris(pH 7.5，20mM)，150mM NaCl，去垢剂Triton X-100以及多种蛋白酶抑制剂,无需自备PMSF、磷酸酶抑制剂等蛋白酶抑制剂。WIP不仅可以用于细胞培养物的裂解，也可直接用于大多数动物组织的裂解。在有效地裂解组织和细胞的同时，可强烈地抑制蛋白、多肽的降解，并保持原有的分子结构和蛋白间相互作用。
用WIP裂解得到的组织细胞蛋白样品，可以用金畔生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford试剂盒测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
包装清单
WIP组织细胞裂解液 30ml
PMSF（100X） 0.3ml
保存条件：
-20°C保存，一年有效。
注意事项：
1．为获得最佳的实验效果，可适当分装使用，以尽量避免反复冻融。
2．PMSF应现用现加。
3．裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4°C进行。
4．蛋白酶抑制剂均有较高的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦直接接触，请立即用流水冲洗，再向医疗保健结构咨询。

二.使用方法说明
1．培养细胞
取出WIP裂解液，待融化后，颠倒混匀数次，适量分装冻存。在使用前取出，按比例加入PMSF（使其最终浓度为1mM），混匀，立即使用。
贴壁细胞，去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗2-3遍(如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗)。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入WIP。用枪吹打数下，使WIP和细胞充分接触。通常WIP接触细胞数秒后细胞就会被裂解。
悬浮细胞，收集培养细胞，离心去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗2-3遍(如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗)，用手指把细胞用力弹散，按6孔板每孔细胞加入100-200微升的比例加入WIP。如果细胞数量较大，应按50-100万细胞/管分装或根据细胞数量按比例增加WIP。用手指轻弹管底以促进WIP和细胞充分接触，裂解完全时应无明显的细胞颗粒。
裂解物经10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。
2．组织样品
取Ep管，分别称重标记，把组织剪切成小块装入Ep管中，称重。按每20毫克组织加100-200微升的比例加入WIP(如裂解不完全，可以适当增加WIP的用量；如需要的蛋白样品浓度较高，可以适当减少WIP的用量)。用手握式电动组织细胞匀浆器匀浆约1分钟或直至充分裂解。10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
如果组织样品本身非常细小，如淋巴细胞，可直接加入WIP裂解，通过振荡（Vortex）以使样品裂解完全

　

RIPA裂解液(W)/RIPA裂解液(弱)

发表于由

上海金畔生物科技有限公司提供RIPA裂解液(W)/RIPA裂解液(弱) ，欢迎访问官网了解更多产品信息。

产品编号 C05-01001
英文名称 RIPA Lysis Buffer
中文名称 RIPA裂解液(W)/RIPA裂解液(弱)
别    名 Radio Immunoprecipitation Assay Lysis Buffer; RIPA Lysis Buffer, Medium; RIPA Lysis Buffer (Medium); Medium; RIPA Lysis Buffer (M); Medium RIPA Lysis Buffer; Mammalian Total Protein Extraction Kit; Protein Extraction Kit;  细胞裂解液; 组织细胞裂解液; 蛋白提取液; RIPA裂解液(弱);
RIPA裂解液(W)/RIPA裂解液(弱)
Specific References  (19)     |     C05-01001 has been referenced in 19 publications.
[IF=6.638] Wang Z et al. Light-activatable dual prodrug polymer nanoparticle for precise synergistic chemotherapy guidedby drug-mediated computed tomography imaging. Acta Biomater. 2019 May 22.  Other ;  
PubMed:31128323

[IF=6.064] Tianyu Zhang. et al. Different Extracellular β-Amyloid (1-42) Aggregates Differentially Impair Neural Cell Adhesion and Neurite Outgrowth through Differential Induction of Scaffold Palladin. BIOMOLECULES. 2022 Dec;12(12):1808  
PubMed:36551236

[IF=5.878] Hong-He Xiao. et al. Icarisid II rescues cognitive dysfunction via activation of Wnt/β-catenin signaling pathway promoting hippocampal neurogenesis in APP/PS1 transgenic mice. 2022 Mar 01  Other ;  Other.  
PubMed:35230733

[IF=5.572] Jiayuan Luo. et al. Effects of saponins isolated from Polygonatum sibiricum on H2O2-induced oxidative damage in RIN-m5F cells and its protective effect on pancreas. FOOD CHEM TOXICOL. 2023 May;175:113724  
PubMed:36935075

[IF=5.443] Li Wenjing. et al. CGF Membrane Promotes Periodontal Tissue Regeneration Mediated by hUCMSCs through Upregulating TAZ and Osteogenic Differentiation Genes. Stem Cells Int. 2021;2021:6644366  WB ;  Human.  
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[IF=4.757] Yunna Zhang. et al. Two-Pore-Domain Potassium Channel TREK–1 Mediates Pulmonary Fibrosis through Macrophage M2 Polarization and by Direct Promotion of Fibroblast Differentiation. BIOMEDICINES. 2023 May;11(5):1279  
PubMed:10.3390/biomedicines11051279

[IF=3.212] Shang-Ping Zhao. et al. Long Non-coding RNA FENDRR Modulates Autophagy Through Epigenetic Suppression of ATG7 via Binding PRC2 in Acute Pancreatitis. 2021 Jan 08  
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[IF=2.985] Tao Song. et al. FLOT2 upregulation promotes growth and invasion by interacting and stabilizing EphA2 in gliomas. Biochem Bioph Res Co. 2021 Apr;548:67  other ;  
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[IF=2.967] An Liu. et al. MiRNA-3662 reverses the gemcitabine resistance in pancreatic cancer through regulating the tumor metabolism. 2021 May 15  Other ;  
PubMed:33993382

[IF=2.737] A. Liu. et al. Circ_03955 promotes pancreatic cancer tumorigenesis and Warburg effect by targeting the miR-3662/HIF-1α axis. 2021 Apr 17  Other ;  
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PubMed:32724428

[IF=2.089] Zhongxue Ye. et al. DNMT3B attenuated the inhibition of TET3 on epithelial-mesenchymal transition in TGF-β1-induced ovarian cancer by methylating the TET3 promoter. REPROD BIOL. 2022 Dec;22:100701  Other ;  Other.  
PubMed:36242939

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PubMed:32202926

[IF=1.871] Bi H et al. Interleukin‑8 promotes cell migration via CXCR1 and CXCR2 in liver cancer. ONCOLOGY LETTERS.2019 18: 4176-4184.  WB ;  
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[IF=1.785] Hui Yang. et al. Upregulated LINC00319 aggravates neuronal injury induced by oxygen‑glucose deprivation via modulating miR‑200a‑3p. Exp Ther Med. 2021 Aug;22(2):1-10  Other ;  
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[IF=1.785] An J et al. A clinical and basic study of optimal endometrial preparation protocols for patients with infertility undergoing frozen‑thawed embryo transfer. Exp Ther Med . 2020 Sep;20(3):2191-2199.  WB ;  
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[IF=1.777] Wenbo Zhao. et al. The effect of the WKYMVm peptide on promoting mBMSC secretion of exosomes to induce M2 macrophage polarization through the FPR2 pathway. J Orthop Surg Res. 2021 Dec;16(1):1-14  Other ;  
PubMed:33658070

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PubMed:30484490

保存条件 RIPA裂解液于2-8℃可保存一年；PMSF置于-20 ℃保存。
注意事项 This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍

简介：<br />
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。<br />
RIPA裂解液的主要成分为主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，0.1% SDS、EDTA等，另加有蛋白酶抑制剂Aprotinin等可以有效抑制蛋白降解。<br />
<br />
使用说明：<br />
根据使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。混匀备用（PMSF现用现加）。<br />
1、样品前处理：<br />
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。<br />
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。<br />
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。<br />
用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。<br />
2、后处理：<br />
将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。<br />
<br />
注意事项：<br />
1、 因SDS在低温易析出，如发现RIPA有沉淀，请先使其恢复室温，沉淀即可溶解。<br />
2、 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。<br />