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MCLAB 大肠杆菌 DNA连接酶

发表于由

 

Molecular Cloning Laboratories（MCLAB）成立于1998年，是为生命科学界提供基因组研究耗材和服务的先进者。

MCLAB提供具有成本效益的消耗品和试剂，专注于代以及新一代测序和DNA片段分析。我们提供大量分子生物学相关产品，包括抗体，生化试剂，克隆试剂盒，酶，PCR试剂盒，蛋白质凝胶和溶液等。作为我们自己的制造商，我们可以控制生产流程，并大限度地减少定制和大规模订单的延迟。它有助于确保我们的客户获得高的质量和价值。

MCLAB拥有一支由20 多位经验丰富的科学家组成的团队，致力于为研究人员提供高质量的服务。我们专注于基因组学领域，拥有DNA测序，发酵，片段分析，分子克隆，过表达，蛋白质纯化和蛋白质合成方面的专家。我们采用量身定制的客户服务方式，让您有机会定制您的项目，并直接与我们的科学家团队交流以获得技术支持。凭借二十多年的经验，我们才华横溢，技术的员工致力于为您提供所需的成果。

大肠杆菌 DNA连接酶

E. coli DNA Ligase

大肠杆菌 DNA连接酶是NAD +依赖性酶，其催化dsDNA的互补3'-羟基和5'-磷酰基末端之间的磷酸二酯键的形成。

 

名称

货号

尺寸

浓度

大肠杆菌DNA连接酶

EDLA-100

1,000个单位

10,000 U / ml

大肠杆菌DNA连接酶

EDLA-200

5,000个单位

10,000 U / ml

大肠杆菌DNA连接酶

EDLA-OEM

任何尺寸

 

描述：
大肠杆菌 DNA连接酶是NAD +依赖性酶，其催化dsDNA的互补3'-羟基和5'-磷酰基末端之间的磷酸二酯键的形成。该酶与内聚的dsDNA末端一金畔挥*作用，并且对切口DNA也有活性。平末端可以在冷凝试剂例如聚乙二醇或聚蔗糖的存在下结扎®。酶提供10x反应缓冲液。

来源：
大肠杆菌含有的过量生产克隆菌株大肠杆菌 DNA连接酶。

应用：
– 克隆连接
– 冈山和Berg cDNA克隆

单位定义：
一个单位的大肠杆菌DNA连接酶定义为在标准温度16°C下30分钟内提供连接（> 50％）Hind III消化的噬菌体λDNA（5'-DNA末端浓度为0.12μM，300μg/ ml）所需的酶量测定条件。

反应条件：
10× 大肠杆菌 DNA连接酶反应缓冲液
温育在16℃下

10倍的大肠杆菌 DNA连接酶反应缓冲液：
300mM的Tris-盐酸
40毫摩尔MgCl 2
260μMNAD 
的10mM DTT 
的pH 8.0 @ 25℃

具体活动：  10,000单位/ m g

推荐储存条件： -20°C 

参考文献：
1。Zimmerman，SB和Pheifer，BH（1983）Proc。国家科。科学院。Sci。，USA 80,5852-5856。
2. Okayama，H。和Berg，P。（1982）Mol。细胞。生物学。2,161-170。

 

 

上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

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jembio DNA连接酶说明书

发表于由

jembio DNA连接酶说明书

DNA连接酶（大肠杆菌）

DNA 连接酶（大肠杆菌）催化双链 DNA 中并列的 5' 磷酸和 3' 羟基粘性末端之间形成磷酸二酯键。

描述：

• 催化具有粘性末端的双链 DNA 片段之间形成磷酸二酯键。

• 5'-磷酰基与相邻的 3'-羟基的缩合伴随着 NAD+ 的水解。

• 适用于全长cDNA（1、2）的高效克隆。

单位定义：一个单位定义为产生 50% 的 λ DNA 的 Hind III 片段连接所需的酶量。

在 20 µl DNA 末端浓度为 0.02 µM (50 µg/ml) 的测定混合物中在 16oC 下孵育。

储存条件：储存于-20oC。

反应缓冲液：30 mM Tris-HCl（22°C 时 pH 8.0）、1 mM 二硫苏糖醇、4 mM MgCl2、26 µM NAD+、50 µg/ml 牛血清白蛋白。

最佳连接发生在 16°C。

储存缓冲液：10 mM Tris-HCl（22°C 时 pH 7.4）、50 mM KCl、0.1 mM EDTA、10 mM 硫酸铵、1 mM 二硫苏糖醇和 50% (v/v) 甘油。

质量控制：所有制备物都经过了内切核酸酶和外切酶活性的污染测试，以及连接反应中的功能测试。

连接分析条件：30 mM Tris-HCl（22°C 时 pH 8.0）、4 mM MgCl2、1.2 mM EDTA、1 mM 二硫苏糖醇、0.026 mM NAD+、50 µg/ml 牛血清白蛋白和 λ DNA 的 Hind III 片段。在 16°C 下孵育 30 分钟。

avidity BirA生物素蛋白连接酶说明书

发表于由

avidity BirA生物素蛋白连接酶说明书

 

BirA500-BirA500：BirA生物素-蛋白质连接酶标准反应试剂盒，250.00美元

 

 

BirA生物素蛋白连接酶（EC 6.3.4.15）激活生物素形成5'-腺苷酸生物素，并将生物素转移至生物素受体蛋白（例如AviTag™肽）。它还起着生物素操纵子阻遏物的作用。该蛋白质由birA基因编码。

请注意：我们强烈建议使用AviTag™氨基酸序列，而不是其他生物素化肽序列。BirA酶以2倍于天然底物（BCCP）的反应速率对AviTag™序列进行生物素化处理，并且比使用中的其他肽序列高出一个数量级或更多。与其他Biotinylation-of-Peptide序列相比，AviTag™需要较少的酶量和较短的孵育时间，从而大程度地减少了与蛋白酶和蛋白质不稳定性相关的辅助问题。

 

产品信息

套件随附以下内容：

  • 两（2）个小瓶，每瓶20uL 1mg / mL BirA生物素蛋白连接酶（总共40ug）
  • 两（2）个每瓶1.5mL的BiomixA（0.5M Bicine缓冲溶液，pH 8.3）
  • 两（2）个每瓶1.5mL的BiomixB（100mM ATP，100mM Mg（OAc）2、500uM d-生物素）
  • 两（2）个每小瓶1.5mL的BIO-200（500uM d-生物素）

BirA生物素蛋白连接酶（EC 6.3.4.15）通过ATP中间体（生物素5'-腺苷酸）以高效，针对性的方式将d-生物素共价添加到生物素受体肽/蛋白质上。酶促生物素化蛋白的下游应用是多种，重要和强大的。通常利用*的生物素-亲和素/链霉亲和素相互作用来进行亲和层析或将蛋白质固定在表面或底物上。通过抗生物素抗体或抗生物素蛋白/链霉亲和素-报告酶偶联物（-HRP，-碱性磷酸酶）或荧光探针进行蛋白质检测成为可能。生物素化的MHC分子的多聚体形式是免疫生物学中流行的工具。

当与我们的AviTag™生物素受体肽氨基酸序列结合使用时，生物素化作用是天然大肠杆菌BCCP底物的两倍，并且比其他肽序列生​​物素化作用高一个数量级或更多。因此，与其他可用序列相比，AviTag™序列需要更少的BirA酶和较短的孵育时间即可完成生物素化反应。如果需要考虑蛋白质的不稳定性或蛋白酶活性，这对于下游的成功可能很重要。

我们的BirA酶是野生型大肠杆菌，由birA基因编码，并通过传统方法纯化至纯度超过99％。该酶的其他名称包括：生物素连接酶；生物素操纵子阻遏蛋白 birA; 生物素全酶合成酶；生物素-[乙酰-CoA羧化酶]合成酶；生物素-[乙酰-CoA-羧化酶]连接酶；生物素-[乙酰-CoA羧化酶]合成酶；乙酰辅酶A全羧化酶合成酶；乙酰辅酶A全羧化酶合成酶；生物素：脱羧羧化酶连接酶；生物素全酶合成酶；HCS。

Avidity BirA生物素蛋白连接酶标准反应试剂盒说明书

发表于由

Avidity，LLC于1996年由Millard Cull，Larry Lansing，Ron Gill博士和Mark Seville博士创立，基于生物素对抗生物素蛋白或链霉亲和素的非凡亲和力开发肽标签和分子生物学产品。在Affymax担任研究人员的同时，Millard参与了AviTag技术的发现，发现了其商业潜力，并获得了Affymax的*权利。他开始使用Avidity作为试剂公司，将AviTag技术的使用权授予其他公司，并销售与该技术一起使用的产品。

带有AviTag标签的人类全长ORF克隆已经被构建在多种T7和CMV启动子表达系统,可以立即购买使用。AviTag标签蛋白可以被体内或体外的生物素连接酶生物素化，而且抗生物素蛋白或链霉亲和素可以专一地与生物素结合，正基于这两个反应，AviTag?技术可以应用于蛋白的固定，纯化和显影。 虽然Avidity是一个小公司，科学带来的好处及其AviTag已得到认可。目前， AviTag技术已经在22个国家的世界制药公司和研究人员中得到认可。 

随着Avidity成熟，该公司正在扩大其科学视野，并调查使用生物发光 – 如在深海生物体中发现 – 使其产品对科学界更有用。Prolume有限公司的Bruce Bryan博士于2004年接触AvidTag与Prolume的高斯荧光素酶和绿色荧光蛋白（GFP）结合使用。*款高斯AviTag产品于2007年11月发布。

此外，Avidity正在与几家公司合作，通过将非常灵敏的光学传感器与基于荧光素酶的测定相结合，开发出新一代高度移动，简单，廉价且功能强大的诊断功能。结合BP蛋白质组学（新型测定生物化学），Prolume（发光/荧光分子和硬件创新专家），黑森林工程（光学器件工程），Avidity正在开发用于检测和鉴定的蛋白质和DNA微阵列生物芯片和生物传感器的疾病病原体和复合高通量筛选（HTS）。

 

 

  BirA生物素蛋白连接酶标准反应试剂盒

货号：BirA500 

品名：BirA-500: BirA biotin-protein ligase standard reaction kit

 

产品信息

生物素蛋白连接酶（BirA的EC 6.3.4.15）activates形成生物素生物素和5′- adenylate转移到生物素蛋白的生物素接受（如avitag™肽）。它也抑制功能的生物素操纵子。该基因编码的蛋白是由BirA的基因。

 

BirA生物素 – 蛋白质连接酶（EC 6.3.4.15）以和靶向的方式通过ATP中间体（生物素5'-腺苷酸）共价加入生物素受体肽/蛋白质中的d生物素。酶促生物素化蛋白质的下游应用是多样的，重要和有力的。*的生物素 – 抗生物素蛋白/链霉抗生物素蛋白相互作用通常用于亲和层析或蛋白质固定在表面或底物上。通过抗生物素抗体或抗生物素蛋白/链霉亲和素 – 报道酶结合物（-HRP，碱性磷酸酶）或荧光探针进行蛋白质检测成为可能。生物素化MHC分子的多聚体形式是免疫生物学中的常用工具。

当与我们的AviTag TM生物素受体肽氨基酸序列组合使用时，生物素化发生在天然大肠杆菌BCCP底物的两倍，比其他肽序列的生物素化多达一个数量级。因此，与其他可用序列相比，AviTagTM序列需要较少的BirA酶和较短的生物素化孵育时间才能完成。如果蛋白质不稳定或蛋白酶活动是关注的，这对下游成功可能是重要的。

我们的BirA酶是由birA基因编码的大肠杆菌野生型，并通过传统方法纯化至大于99％的纯度。

该酶的其他名称包括：生物素连接酶;生物素操纵子阻遏蛋白;的birA;生物素全酶合成酶;生物素 – [乙酰-CoA羧化酶]合成酶;生物素 -[乙酰辅酶A羧化酶]连接酶;生物素 -[乙酰-CoA羧化酶]合成酶;乙酰CoA高脱羧酶合成酶;乙酰CoA高脱羧酶合成酶;生物素：apocar​boxylase连接酶;生物素全酶合成酶;HCS。

 

试剂盒组成：

l 两瓶，每瓶20uL，1mg/mL BirA生物素蛋白连接酶（共40ug）

l 两瓶，每瓶1.5mL，BiomixA（0.5M双甘酯缓冲溶液，pH8.3）

l 两瓶，每瓶1.5mL，BiomixB（100mM ATP，100mM镁(OAC)2，500uM d-生物素）

l 两瓶，每瓶1.5mL，额外的BIO-200（500uM d-生物素）

 

储存条件：

试剂盒，干冰运输，-80度保存。如解冻后使用，4度保存。解冻后的酶可以在液氮中重新储存，-80度储存。

其他组份，biomixa，biomixb和bio-200，-20度长期保存。biomixa和bio-200，在4度可短期储存。Biomixb，-20度保存或者更低温度储存。

稳定性：生物素蛋白连接酶BirA，4度存放一个月，活性保留>80。长期保存-80度，每次解冻，酶活性降低10%。

实验步骤：

以700 µl纯化好的 MHC/peptide 复合物（1-2mg）为例，加入：100 µl BiomixA，100 µl BiomixB，100 µl d-biotin，10 µl BirA enzyme (30 µg)，0.5 ul pepstatin (2 mg/ml in DMSO)，0.5 µl leupeptin (2 mg/ml in dH2O)室温孵育过夜（反应液中不要有EDTA）

 

 

 

https://www.avidity.com/avitag/bira-500-bira-biotin-protein-ligase-standard-reaction-kit

 

Avidity BirA酶（生物素连接酶）说明书

发表于由

Avidity，LLC于1996年由Millard Cull，Larry Lansing，Ron Gill博士和Mark Seville博士创立，基于生物素对抗生物素蛋白或链霉亲和素的非凡亲和力开发肽标签和分子生物学产品。在Affymax担任研究人员的同时，Millard参与了AviTag技术的发现，发现了其商业潜力，并获得了Affymax的*权利。他开始使用Avidity作为试剂公司，将AviTag技术的使用权授予其他公司，并销售与该技术一起使用的产品。

带有AviTag标签的人类全长ORF克隆已经被构建在多种T7和CMV启动子表达系统,可以立即购买使用。AviTag标签蛋白可以被体内或体外的生物素连接酶生物素化，而且抗生物素蛋白或链霉亲和素可以专一地与生物素结合，正基于这两个反应，AviTag?技术可以应用于蛋白的固定，纯化和显影。 虽然Avidity是一个小公司，科学带来的好处及其AviTag已得到认可。目前， AviTag技术已经在22个国家的世界制药公司和研究人员中得到认可。 

随着Avidity成熟，该公司正在扩大其科学视野，并调查使用生物发光 – 如在深海生物体中发现 – 使其产品对科学界更有用。Prolume有限公司的Bruce Bryan博士于2004年接触AvidTag与Prolume的高斯荧光素酶和绿色荧光蛋白（GFP）结合使用。*款高斯AviTag产品于2007年11月发布。

此外，Avidity正在与几家公司合作，通过将非常灵敏的光学传感器与基于荧光素酶的测定相结合，开发出新一代高度移动，简单，廉价且功能强大的诊断功能。结合BP蛋白质组学（新型测定生物化学），Prolume（发光/荧光分子和硬件创新专家），黑森林工程（光学器件工程），Avidity正在开发用于检测和鉴定的蛋白质和DNA微阵列生物芯片和生物传感器的疾病病原体和复合高通量筛选（HTS）。

 

 

BirA酶（生物素连接酶）

货号：BirA500

品名：BirA biotin-protein ligase standard reaction kit(BirA生物素蛋白连接酶标准反应试剂盒)

 

生物素连接酶(Biotin Protein Ligase)用于催化生物素化反应，将生物素连接到特定的蛋白上。同时它也是生物素诱导抑制剂，常见类型包括大肠杆菌中的BirA。BirA已经被广泛应用到各类实验中，包括真核细胞实验。

 

BirA受体-多肽系统在生物素化多肽底物时，具有超高的特异性。BirA可以识别一段多肽序列（生物素受体标签BAT）。当融合BAT的蛋白和BirA共表达时，BAT序列可以被有效生物素化。被生物素化的蛋白质可以通过与之有高亲和力的抗生物素蛋白或者链霉亲和素进行一步纯化。

BirA催化的生物素化过程一般包含两个步骤：1. 将生物素和ATP反应生成biotinoyl-5‘-AMP, 此过程将活化的生物素被固定在BirA的活性位点上。2. 将活化的生物素通过反应偶联到BAT序列的特定赖氨酸残基上  。

 

 

一、BirA酶产品性质：

货号

BirA500

浓度

1.0mg/ml

来源：    

E. coli.

酶活性:

5000 Units/µg

Mol wt    

33.5kDa

规格

20ul

储存缓冲液

50mM 咪唑(pH 6.8), 50mM NaCl, 10% 甘油, 5mM (DTT)

纯度：

> 99%通过考马斯亮蓝染色

储存条件：  

 

于干冰中运送，到达后要立刻置于-80°C中。解冻后分装，近期使用可保存于4°C，长时间的使用需保存于在-80°C.

 

二、典型的BirA动力学活性测定

 

 

三、BirA酶的12%聚丙烯酰胺SDS-PAGE凝胶图谱*

 

https://www.avidity。。ｃｏｍ/avitag/bira-500-bira-biotin-protein-ligase-standard-reaction-kit