血清/血浆游离 DNA(cfDNA) 提取试剂盒


cfPure™血清/血浆游离  DNA(cfDNA) 提取试剂盒

(磁珠法)

 

目录号:K5011610, K5011625

 

产品内容

产品号:K5011610(100ml 血清/血浆样本提取试剂盒)

组分

产品号

规格

1.  裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer

K5011610-1

1 x 115 ml

2.  洗涤液 Wash Buffer

K5011610-2

2 x 55 ml

3.  洗脱液 Elution Buffer

K5011610-3

1 x 6 ml

4.  磁珠溶液 Magnetic Bead Solution

K5011610-4

2 x 1.33 ml

产品号:K5011625(250ml 血清/血浆样本提取试剂盒)

组分

产品号

规格

1.  裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer

K5011625-1

3 x 95 ml

2.  洗涤液 Wash Buffer

K5011625-2

5 x 55 ml

3.  洗脱液 Elution Buffer

K5011625-3

1 x 15 ml

4.  磁珠溶液 Magnetic Bead Solution

K5011625-4

5 x 1.33 ml

 

储存条件

该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存 12 个月。

特点

l 无毒。

l 高回收率。

l 操作灵活的实验程序。

l 纯化的 DNA 可用于二代测序(NGS), 荧光定量 PCR 和亚硫酸氢盐测序等。

产品简介

本试剂盒可率从血清/血浆中提取游离 DNA,磁珠法程序适用于多种核酸自动化提取 仪,所得游离 DNA 可直接用于 PCR 模  板、qPCR、二代测序(NGS)和其他应用程序。 规格

100ml 血清/血浆样本提取试剂盒

250ml 血清/血浆样本提取试剂盒 质量控制 所有试剂均经过纯度和有效性测试。

注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项

样本:新鲜和冻存血清/血浆均可使用,新鲜样本会有较高的得率。

量化:每毫升血清/血浆游离 DNA 得率为 1-100 微克。用分光光度法定量(例如. Nanodrop)

可能无法准确地测定得率。可使用 Qubit™  dsDNA High Sensitivity Assay。

聚合酶链反应(PCR)的建议:由于血清/血浆中提取 DNA 多数为小片段特性,设计引物时需谨

慎。游离 DNA 往往为小片段 170bp 左右,因此,PCR 引物设计应该生成的产物为小于 150 bp

范围。健康人血浆游离 DNA 浓度低,PCR 的循环次数在某些情况下需达到 40 个循环。

treck Cell-Free DNA BCT Tube(s) 基因检测无创采血管:  无创管经蛋白酶 K 处理可分离高质

量的无细胞 DNA,否则 DNA 得率会减少 50%。

自备设备和试剂

l     移液管

l     涡流混合器

l     磁力架

l     1.5 ml 不黏离心管

l     无水乙醇

使用前:裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer 及 Wash Buffer 洗涤液为浓缩液。若溶液发生 沉淀,放置 37°C 水浴中预热 30 分钟,以溶解沉淀。*次使用试剂盒时,请按照提示在裂 / Lysis/Binding Buffer 涤液 Wash Buffer 入无 28°C 年, 盖紧瓶盖以确保长期存储。

产品号:K5011610

l    加入 23ml 无水乙醇至裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer 中,轻轻颠倒混匀。

l     加入 51 ml 无水乙醇至每个洗涤液 Wash Buffer 中,轻轻颠倒混匀。

l     每次提取前配制新鲜 80%乙醇。

产品号:K5011625

l    加入 19ml 无水乙醇至每个裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer 中,轻轻颠倒混匀。

l 加入 51 ml 无水乙醇至每个洗涤液 Wash Buffer 中,轻轻颠倒混匀。

l 每次提取前配制新鲜 80%乙醇。

实验/浆量100µl~10ml  均可计算/

Lysis/Binding Buffer 和 Magnetic Bead Solution 磁珠溶液使用量。

 

血清/血浆

裂解/结合液

 

Lysis/Binding Buffer

磁珠溶液 Magnetic

 

Bead Solution

离心管尺寸

x (x=ml of 血清/血浆)

1.25x

0.025x

N/A

500 µl

750 µl

12.5 µl

2 ml

1 ml

1.25 ml

25 µl

15 ml

5 ml

6.25 ml

125 µl

15 ml or 或 50ml*

10 ml

12.50 ml

250 µl

50 ml

 

*5ml 或以上血清/血浆建议使用 50ml 离心管,使用 15ml 离心管造成泄露会造成得率降低。

蛋白酶 K 处理

如果样品使用基因检测无创采血管 Streck Cell-Free DNA BCT Tube(s)采集,蛋白酶 K 处理可

确保高回收率。非该采血管采集的样本可直接进行裂解/结合 Lysis/Binding 步骤。

 

血清/血浆

蛋白酶 K

20% SDS 溶液

x (x=ml of 血清/血浆)

0.015 x

0.050 x

500 µl

7.5 µl

25 µl

1 ml

15 µl

50 µl

5 ml

75 µl

250 µl

10 ml

150 µl

500 µl

 

1. 加入适量血清/血浆到适合的离心管中。

2.  1ml / 15 µl 蛋白酶 K20 mg/ml

3. 每 1ml 血清/血浆加入 50 µl SDS(20%)溶液。

4. 颠倒混匀 5 次。

5. 60°C 孵育 20 分钟。

6. 冰上预冷 5 分钟,放置室温。

7. 放置室温后可进行裂解/结合 Lysis/Binding 第二步

裂解/结合 Lysis/Binding

1. 加入适量血清/血浆到适合离心管中。

2.  1ml 血清/血浆加入 1.25ml 裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer

3. 每 1ml 血清/血浆加入 25µl 磁珠溶液 Magnetic Bead Solution。 注意:加入之前混匀磁珠溶液,确保溶液无磁珠沉淀。磁珠会迅速下沉所以每次加样前都 要混匀磁珠,以免造成 DNA 得率不一致。

4. 室温涡流混合或用力摇动离心管 10 分钟。*为获得高产量,确保血样本/缓冲溶液在管内混 合,推荐使用旋涡混合器。

5. 将离心管置于磁力架磁分离 2~5 分钟或直至溶液清透。

6. 保持离心管置于磁力架上小心去除上清,不要触碰磁珠。

7. 保持离心管置于磁力架上 1 分钟,去除残液。

*次洗涤

8. 加入 1000µl 洗涤液 Wash Buffer 至第 7 步裂解/结合 Lysis/Binding 管中。 9. 涡流混合 10 秒或移液管吹打 6 次重悬磁珠。

10.  将重悬液移至 1.5ml 离心管置于磁力架。

11.  置于磁力架 10~30 秒。

12.  移液管抽取上清至裂解/结合 Lysis/Bindin 管。

13. 将裂解/结合 Lysis/Bindin 管中剩余磁珠全部移至 1.5ml 离心管。

14.  1.5ml 离心管置于磁力架磁分离 10~30 秒至液体清澈。

15.  用 1000µl 移液枪头尽量去除上清。

16. 用装有离心管的磁力架轻轻敲击实验台 5 次,用 200µl 移液枪头去除废液。

17.  离心管移至试管架上加入 1000µl 洗涤液 Wash Buffer。

18.  涡流混合 20 秒或移液管吹打 6 次重悬磁珠。

19.  短暂离心。*离心仅用于涡流混合之重悬磁珠,短暂离心仅为去除离心管盖上的吸附液体。

20.  离心管置于磁力架磁分离 10~30 秒。

21.  用 1000µl 移液枪头尽量去除上清。

22. 用装有离心管的磁力架轻轻敲击实验台 5 次,用 200µl 移液枪头去除废液。

第二次洗涤

23.  离心上加 1000µl 醇(80%

24.  涡流混合 20 秒或移液管吹打 6 次重悬磁珠。

25. 短暂离心。

26.  离心管置于磁力架磁分离 10~30 秒至溶液清澈。

27.  用 1000µl 移液枪头尽量去除上清。

28. 用装有离心管的磁力架轻轻敲击实验台 5 次,用 200µl 移液枪头去除废液。

29.  离心上加 1000µl 醇(80%

30. 涡流混合 20 秒或移液管吹打 6 次重悬磁珠。

31. 短暂离心。

32.  离心管置于磁力架磁分离 10~20 秒。

33.  用 1000µl 移液枪头尽量去除上清并保持管盖打开。

34.  用装有离心管的磁力架轻轻敲击实验台 5 次。

35.  用 200µl 移液枪头去除废液。

36. 保持管盖打开 2 分钟,磁力架轻轻敲击实验台 5 次,用 200µl 移液枪头去除废液。

37.  继续干燥 1-3 分钟。*注意不要过分干燥以免磁珠粘在管壁上。

洗脱

38.  离心适量脱液 Elution Buffer注意血清/浆加入 12.5

µl 洗脱液 Elution Buffer 以确保*得率。 39.  涡流混合或用力摇动离心管 5 分钟。

40. 短暂离心。

41.  置于磁力架 10~30 秒。

42.  上清移至新 1.5ml 离心管。

cfDNA文库快速制备试剂盒(MGI平台),Fast cfDNA Library Prep Set for MGI,货号-规格:CW3012S-48次

cfDNA文库快速制备试剂盒(MGI平台),Fast cfDNA Library Prep Set for MGI,货号-规格:CW3012S-48次

市场价: 5598.0
价格:
5598.00
品牌: 康为世纪
规格: 48次
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参考文献


cfDNA文库快速制备试剂盒(MGI平台)

Fast cfDNA Library Prep Set for MGI

产品货号:CW3012S

产品规格:48次

cfDNA文库快速制备试剂盒(MGI平台)

因二代测序建库试剂保存温度的特殊性,需自己承担运费和干冰费用。


产品简介


本试剂盒提供了DNA文库构建中所需的全部组分,可以将游离DNA制备成华大智造(MGI)测序平台专用的DNA文库。采用高保真DNA聚合酶进行文库富集,无偏好的PCR扩增,扩大了序列的覆盖区域,可高效制备用于MGI测序平台的DNA文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性。


产品优势


自主研发接头,连接效率高

性价比高

文库转化率高

低起始量建库2-6 ng

超保真扩增,扩增偏好性超低

自动化生产,供货速度快

预先分装多个管子,防止反复冻融影响文库产量;


产品组分

cfDNA文库快速制备试剂盒(MGI平台),Fast cfDNA Library Prep Set for MGI,货号-规格:CW3012S-48次cfDNA文库快速制备试剂盒(MGI平台),Fast cfDNA Library Prep Set for MGI,货号-规格:CW3012S-48次

建库流程


cfDNA文库快速制备试剂盒(MGI平台),Fast cfDNA Library Prep Set for MGI,货号-规格:CW3012S-48次

文库质量

试剂盒

样本类型

起始量(ng

出库浓度(ng/μl

文库体积(μl

循环数

CW3012

cfDNA

2

33.1

30

12

cfDNA

6

61

30

12

MGI

cfDNA

2

23.8

30

12

cfDNA

6

37.8

30

12

同一cf DNA样本,相同建库起始量条件下,分别使用康为世纪CW3012MGI的游离DNA文库构建试剂盒按照各自说明书进行文库构建,Qubit定量。可见,CW3012在文库产量方面表现优异。



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cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台),NGS Library Quantification Kit(cfDNA),货号-规格:CW2679S-1ml(100×20 µL)反应

cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台),NGS Library Quantification Kit(cfDNA),货号-规格:CW2679S-1ml(100×20 µL)反应

市场价: 698.0
价格:
698.00
品牌: 康为世纪
规格: 1ml(100×20 µL reactions
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参考文献


cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台)

NGS Library Quantification Kit(cfDNA)

产品货号:CW2679S

产品规格:1ml(100×20 µL)反应


cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台)

本产品是针对cfDNA的染料法(SYBR Green I)qPCR NGS文库定量试剂盒,提供了qPCR过程所需的反应混合液,DNA引物混合物、标准品以及样品稀释液,试剂体系完整,操作简单方便。反应混合物中所含的荧光染料SYBR Green I 可以与所有的双链DNA结合。本试剂盒使用的是一种经化学修饰的全新高效热启动聚合酶,酶的激活需在95℃下孵育10 min。该产品特异性强、扩增效率高,试剂盒中的标准品长度(约270 bp)与cfDNA NGS文库的平均长度(250-300 bp)相当,能够对构建的cfDNA文库浓度进行快速准确的定量。


ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同,因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。

不需要ROX校正的仪器: Roche LightCycler 480,Roche LightCyler 96,Bio-radiCyler iQ,iQ5,CFX96等。

需要Low ROX校正的仪器: ABI Prism7500/7500 Fast,QuantStudio® 3 System,QuantStudio® 5 System, QuantStudio® 6 Flex System,QuantStudio® 7 Flex System,ViiA 7 system, Stratagene Mx3000/Mx3005P,Corbett Rotor Gene 3000等。

需要High ROX校正的仪器: ABI Prism7000/7300/7700/7900,Eppendorf,ABI Step One/Step One Plus等。

注:High Rox和Low Rox 的配制方法见使用方法2中说明。


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cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台),NGS Library Quantification Kit(cfDNA),货号-规格:CW2679M-5ml(500×20µL)反应

cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台),NGS Library Quantification Kit(cfDNA),货号-规格:CW2679M-5ml(500×20µL)反应

市场价: 2998.0
价格:
2998.00
品牌: 康为世纪
规格: 5ml(500×20 µL reactions
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cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台)

NGS Library Quantification Kit(cfDNA)

产品货号:CW2679M

产品规格:5ml(500×20µL)反应


cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台)

本产品是针对cfDNA的染料法(SYBR Green I)qPCR NGS文库定量试剂盒,提供了qPCR过程所需的反应混合液,DNA引物混合物、标准品以及样品稀释液,试剂体系完整,操作简单方便。反应混合物中所含的荧光染料SYBR Green I 可以与所有的双链DNA结合。本试剂盒使用的是一种经化学修饰的全新高效热启动聚合酶,酶的激活需在95℃下孵育10 min。该产品特异性强、扩增效率高,试剂盒中的标准品长度(约270 bp)与cfDNA NGS文库的平均长度(250-300 bp)相当,能够对构建的cfDNA文库浓度进行快速准确的定量。


ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同,因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。

不需要ROX校正的仪器: Roche LightCycler 480,Roche LightCyler 96,Bio-radiCyler iQ,iQ5,CFX96等。

需要Low ROX校正的仪器: ABI Prism7500/7500 Fast,QuantStudio® 3 System,QuantStudio® 5 System, QuantStudio® 6 Flex System,QuantStudio® 7 Flex System,ViiA 7 system, Stratagene Mx3000/Mx3005P,Corbett Rotor Gene 3000等。

需要High ROX校正的仪器: ABI Prism7000/7300/7700/7900,Eppendorf,ABI Step One/Step One Plus等。

注:High Rox和Low Rox 的配制方法见使用方法2中说明。


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NGS Fast cfDNA Library Prep Set (Illumina),货号-规格:CW2681S-24次

NGS Fast cfDNA Library Prep Set (Illumina),货号-规格:CW2681S-24次

市场价: 2998.0
价格:
2998.00
品牌: 康为世纪
规格: 24次
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参考文献


NGS Fast cfDNA Library Prep Set (Illumina)

产品货号:CW2681S

产品规格:24次

NGS Fast cfDNA Library Prep Set (Illumina)

本试剂盒针对Illumina二代测序平台设计,提供cfDNA文库构建所需要的酶预混体系、接头和反应缓冲液,包含除PCR引物外的所有成分。建库过程中的DNA末端补平,磷酸化,加A一步完成;不需纯化,直接加接头,采用高保真DNA聚合酶进行文库富集,无偏好的PCR扩增,扩大了序列的覆盖区域。所得文库能够用于IlluminaGAIIx,HiSacnSQ、HiSeq 2500/2000/1000和MiSeq sequencing等测序平台的测序。


产品特点

● 末端补平,磷酸化,加A一步完成。

● 不需纯化,直接加接头。

● 超保真扩增,最大程度上降低了扩增偏好性。

● 支持多种样本,且所得文库能够用于Illumina GAIIx,HiSacnSQ、HiSeq 2500/2000/1000和MiSeq sequencing等测序平台的测序。


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