EagleBio已迅速成为ELISA检测试剂盒，HPLC检测试剂盒，分子生物学检测，抗体和蛋白质的先进供应商。通过我们的所有产品，我们始终致力于提供有助于医学研究和临床实验室的深奥和创新产品。此外，Eagle Biosciences致力于提供，友好和知识渊博的客户服务。
Eagle Bioscience 9HO00-A100说明书
Eagle Biosciences 9-HODE多克隆抗体仅供参考，不用于诊断目的。
9-HODE多克隆抗体数量
SKU：9HO00-A100
仅供研究使用
目录号：9HO00-A100
分装：100μg
储存：-80°C
描述：特异于9（±） – 羟基十八碳二烯酸（HODE）酸的山羊抗血清。
浓度：1 mg / mL
储存：-80°C储存避免反复冻融。
储存缓冲液：PBS
免疫原：9（S） – 阴离子; 9（R）-HODE
纯化：硫酸铵分馏
分类：IgG
应用：RIA：2mg /孔ELISA：2mg /孔
物种特异性：不是物种特异性的。在山羊实验模型中使用时可能不具有实用性。
Eagle Biosciences人完整成纤维细胞生长因子(FGF-21)ELISA
目录号：
F2131-K01（1 × 96孔）
仅供研究使用。不得用于诊断程序。
v. 1.0
EagleBiosciences,Inc.
Eagle Biosciences人完整成纤维细胞生长因子21(FGF-21)ELISA检测试剂盒（酶联免疫分析试剂盒）预期用于定量测定血清中人完整成纤维细胞生长因子21(FGF-21)的水平。Eagle Biosciences人完整成纤维细胞生长因子21(FGF-21)ELISA检测试剂盒仅供研究使用，不用于诊断程序。
成纤维细胞生长因子21(FGF-21)属于FGF-19亚家族，包括FGF-19、FGF-21和FGF-23。FGF-19家族成员是调节多种生理稳态的强效内分泌激素。
完整的FGF-21是由181个氨基酸组成的小蛋白。在一系列胰岛素抵抗动物模型中，给予重组FGF21可降低血糖和胰岛素水平，降低肝脏和循环甘油三酯和胆固醇水平，并改善胰岛素敏感性、能量消耗、肝脏脂肪变性和肥胖。FGF-21的生理功能依赖于其N末端和C末端区域的完整分子结构和氨基酸序列。N端截短的FGF-21(7-181)是一种强效抑制剂，可竞争性抑制完整FGF-21(1-181)的生物活性。因此，测量循环完整FGF-21水平在生理和病理生理状况评估中具有重要意义。测定FGF-21片段的试验可能高估供试品中蛋白的生物活性。
循环FGF-21是一种生物标志物，在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、2型糖尿病、妊娠期糖尿病和肥胖患者中其水平升高。在库欣综合征患者、HIV-1诱导的脂肪代谢障碍患者和慢性肾病或终末期肾病(ESRD)患者中也发现循环FGF-21增加。
试验原理
Eagle Biosciences人完整成纤维细胞生长因子21(FGF-21)ELISA检测试剂盒的设计、开发和生产用于定量测定血清和EDTA血浆样本中的人完整FGF-21。该试验采用双位点“夹心”技术和与人完整FGF-21不同表位结合的两种选定抗体。其中一种抗体与N-末端人FGF-21(1-7)特异性结合，另一种与C-末端人FGF-21(175-181)特异性结合。
将试验标准品、对照品和患者样本直接加入包被抗人FGF-21(1-7)特异性抗体的微孔板孔中。同时，向各孔中加入辣根过氧化物酶结合的抗人FGF-21(175-181)特异性抗体。一个孵育期后，微量滴定孔壁上的抗体捕获样本中的人FGF-21，并洗去每个微量滴定孔中的未结合蛋白。形成“抗FGF-21抗体人完整FGF-21 HRP结合示踪抗体”的“夹心”。在随后的清洗步骤中除去未结合的示踪抗体。为检测该免疫复合物，将微孔与底物溶液在定时反应中孵育，然后在分光光度酶标仪中测定。与微量滴定孔壁上人完整FGF-21结合的免疫复合物的酶活性与样本中完整FGF-21的量成正比。通过绘制吸光度与相应人完整FGF-21浓度的曲线生成标准曲线
直接根据该标准曲线测定供试品中的FGF-21。
接收后，该完整成纤维细胞生长因子21(FGF-21)ELISA检测试剂盒必须储存在2-8 ℃下。关于试剂盒的失效日期，请参阅试剂盒包装盒上的标签。所有组分在失效日期前均保持稳定。
使用前使所有试剂恢复至室温。不同试剂盒批号的试剂不得合并或互换。
一个微孔板，含有12 x 8孔可破碎条带（共96孔），包被有人FGF-21抗体。将板框定并密封在含有干燥剂的箔拉链袋中。该试剂应在2-8 ℃下储存，并在试剂盒包装盒上的失效日期前保持稳定。
一个小瓶含有0.4 mL浓HRP标记的抗人FGF-21抗体（稳定蛋白基质中）。使用前，必须用FGF-21示踪剂抗体稀释剂稀释该试剂。该试剂应在2-8 ℃下储存，并在试剂盒包装盒上的失效日期前保持稳定。
一个含有8 mL即用型缓冲液的小瓶。根据测定程序，应仅用于示踪抗体稀释。该试剂应在2-8 ℃下储存，并在试剂盒包装盒上的失效日期前保持稳定。
每瓶含30 mL 30倍浓缩液。使用前，必须用870 mL去离子水稀释内容物，并混匀。稀释后，得到含有表面活性剂的工作清洗液，溶于含有非叠氮化物、非汞防腐剂的磷酸盐缓冲盐水中。稀释液应在室温下储存，并在试剂盒上显示的失效日期前保持稳定。
一瓶含有12 mL四甲基联苯胺(TMB)和稳定的过氧化氢。该试剂应在2-8 ℃下储存，并在试剂盒包装盒上的失效日期前保持稳定。
每瓶含12 mL 0.5 M硫酸。该试剂应储存在2-8 ℃或室温下，并在试剂盒包装盒上的失效日期前保持稳定。
6个小瓶分别含有不同浓度的人FGF-21，溶于冻干牛血清基质中，基质中含非叠氮化物、非汞防腐剂。各标准品的准确浓度参见小瓶。标准品可直接使用。这些试剂应在2-8 ℃下储存，并在试剂盒包装盒上的失效日期前保持稳定。
两个小瓶分别含有不同浓度的人FGF-21，溶于冻干牛血清基质中，含非叠氮化物、非汞防腐剂。有关各质控品的准确浓度范围，请参见小瓶。质控品准备就绪。两种质控品均应储存在2-8 ℃下，并在试剂盒包装盒上标注的失效日期前保持稳定。
人完整成纤维细胞生长因子21(FGF-21)检测试剂盒试剂必须在专业实验室环境中使用，且仅供研究使用，不得用于诊断程序。仅牛血清试剂来源的原材料来自美国连续48个国家。仅从兽医监督下饲养的供体健康动物中获得，发现无传染病。进行本试验时佩戴手套，并将这些试剂视为具有潜在传染性进行处理。避免接触含有TMB、过氧化氢或硫酸的试剂。TMB可能会刺激皮肤和粘膜，引起皮肤过敏反应。TMB是一种疑似致癌物。硫酸接触皮肤可能引起严重刺激。请勿接触眼睛、皮肤或衣服。请勿摄入或吸入烟雾。接触后，用大量水冲洗至少15 min。使用药物非临床研究质量管理规范。
· 能够递送25µL、50µL、100µL和1000µL的精密单通道移液器
· 重复适用于递送100µL的分配器。
· 适用于上述体积分配的一次性移液器吸头。
· 一次性12 x 75 mm或13 x 100玻璃管或塑料管。
· 带盖的一次性100 mL和1000 mL塑料瓶。
· 铝箔。
· 去离子水或蒸馏水。
· 塑料微量滴定孔盖或聚乙烯膜。
· ELISA多通道洗瓶或全自动（半自动）洗涤系统。
· 能够读取450 nm处吸光度的分光光度酶标仪。
仅需要50µL人EDTA血浆用于单峰人FGF-21测定。标本采集前无需对个体进行特殊准备。应使用紫色盖的真空采血管采集全血，并通过离心（850-1500xg离心10 min）将血浆与细胞分离。应在采集后立即或至少在采血后1小时内将血浆与细胞分离。离心后应立即将血浆转移至洁净试管中。如果在48小时内不进行测定，血浆样本应储存在-20 ℃下。避免标本冻融循环超过3次。
血清样本也可用于FGF-21测定。血清样本采集应按照样本采集管制造商的建议进行。
收集的EDTA-血浆或血清样本应在冷冻条件下用干冰运送至实验室。如果冷冻条件不可用，样本应在
冷藏运输，例如，使用蓝色冰袋运输。
1. 使用前，使所有试剂恢复至室温。不同试剂盒批号的试剂不得组合或互换。
2. 使用前，必须将ELISA清洗浓缩液稀释至工作溶液。详细信息请参见试剂章节。
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试纸编号。 |
FGF-21示踪抗体稀释液 |
FGF-21示踪抗体 |
|
1 |
500 µL |
25 µL |
|
2 |
1000 µL |
50 µL |
|
3 |
1500 µL |
75 µL |
|
4 |
2000 µL |
100 µL |
|
5 |
2500 µL |
125 µL |
|
6 |
3000 µL |
150 µL |
|
7 |
3500 µL |
175 µL |
|
8 |
4000 µL |
200 µL |
|
9 |
4500 µL |
225 µL |
|
10 |
5000 µL |
250 µL |
|
11 |
5500 µL |
275 µL |
|
12 |
6000 µL |
300 µL |
试验程序
1. 将足够数量的鼠IgG包被微孔板条/孔置于支架中，以一式两份运行人FGF-21标准品、对照品和未知样品。
2. 测试配置
|
世界其他地区 |
试剂条1 |
试剂条2 |
试剂条3 |
|
A |
标准品1 |
标准品5 |
样本1 |
|
B |
标准品1 |
标准品5 |
样本1 |
|
C |
标准品2 |
标准品6 |
样本2 |
|
D |
标准品2 |
标准品6 |
样本2 |
|
E |
标准品3 |
C 1 |
样品3 |
|
F |
标准品3 |
C 1 |
样品3 |
|
G |
标准品4 |
C 2 |
|
|
H |
标准品4 |
C 2 |
|
3. 向微孔中加入50µL标准品、对照品和患者血浆/血清样本。
4. 向各孔中加入50µL 1:21稀释的示踪抗体
5. 用封板覆膜覆盖微孔板，并在室温下通过定轨振摇170 rpm孵育微孔板2小时。
6. 取下封板膜。吸取各孔内容物。向各孔中加入350µL工作清洗液，清洗各孔5次，然后*吸出内容物。或者，可以使用自动微孔板洗板机。
7. 向各孔中加入100µL ELISA HRP底物。
8. 用封板覆膜覆盖微孔板，同时用铝箔覆盖，避免暴露于光照下。平板在室温下孵育20 min。
9. 取下铝箔和封板膜。向各孔中加入100µL ELISA终止液。轻轻混合。
10. 在酶标仪中读取450/650 nm下10 min内的吸光度
1. 建议所有标准品、对照品和未知样品重复测定两次。每份重复样本的平均吸光度读数应用于数据简化和结果计算。
2. 将光敏试剂保存在原始琥珀色瓶中。
3. 将任何未使用的抗体包被条储存在含有干燥剂的箔拉链袋中，以防止受潮。
4. 为确保试验的重现性，必须采用仔细的技术并使用适当校准的移液装置。
5. 除本说明书中规定的孵育时间或温度外，其他孵育时间或温度可能影响结果。
6. 避免微孔中出现气泡，因为这可能导致结合效率较低和重复读数的CV%较高
7. 所有试剂在使用前应轻轻充分混匀。避免起泡。
1. 计算每对重复检测结果的平均吸光度。
2. 从所有其他读数的平均吸光度中减去STD 1(0 ng/mL)的平均吸光度，得到校正吸光度。
3. 通过所有标准品的吸光度生成标准曲线。还可使用适当的计算机辅助数据简化程序进行结果计算。
使用各自的校正吸光度，直接从标准曲线读取对照品和患者样本的人完整FGF-21浓度。
显示了人完整成纤维细胞生长因子21(FGF-21)ELISA检测试剂盒的典型吸光度数据和所得标准曲线。不得使用该曲线代替每次试验的标准曲线运行。
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孔I.D. |
OD 450/650 nm吸光度 |
结果pg/mL |
||
|
|
读数 |
平均值 |
已纠正 |
|
|
0 pg/mL |
0.037 0.036 |
0.037 |
0.000 |
|
|
32.5 pg/mL |
0.087 0.086 |
0.087 |
0.050 |
|
|
91 pg/mL |
0.172 0.169 |
0.170 |
0.133 |
|
|
255 pg/mL |
0.398 0.399 |
0.399 |
0.302 |
|
|
714 pg/mL |
1.067 1.069 |
1.068 |
1.031 |
|
|
2000 pg/mL |
2.835 2.903 |
2.869 |
2.946 |
|
|
对照1 |
0.126 0.129 |
0.127 |
0.371 |
|
|
|
|
|
60.83 |
|
|
对照2 |
0.736 0.721 |
0.729 |
1.200 |
|
|
|
|
|
481.29 |
|
用该人完整FGF-21 ELISA测定32份正常成人血浆样本。发现正常范围小于200 pg/mL。强烈建议各实验室根据正常供体EDTA血浆或血清样本建立自己的正常范围。
1. 由于没有可用于人完整FGF-21测量的金标准浓度，因此通过与高纯度FGF-21标准品的相关性确定试验标准品的值。
2. 对于读数高于高标准的样本值，建议使用稀释液重新测定样本。
3. 血浆标本或试剂的细菌或真菌污染，或试剂之间的交叉污染可能导致错误的结果。
4. 用聚酯树脂去离子的水可能使辣根过氧化物酶失活。
为确保结果的有效性，每项试验应包括具有已知人完整FGF-21水平的适当对照。我们建议，除本试剂盒提供的检测试剂盒外，所有检测试剂盒还包括实验室自己的FGF-21对照。
灵敏度(LoD)
通过比20次零标准品重复测定的平均值高2倍标准差的相应OD值测定的该人完整FGF-21 ELISA的灵敏度（低）为1.7 pg/mL。
该试验表明，高达20,000 pg/mL时无任何高剂量“钩状”效应。
通过在单次测定中测量3份供体EDTA血浆样本（重复测定16次），验证试验内精密度。
|
人完整FGF- 21值(pg/mL) |
CV (%) |
|
63.2 |
5.7 |
|
171 |
4.2 |
|
480 |
5.4 |
通过在12次单独试验中一式两份测定3份对照样品，验证试验间精密度。
|
人完整FGF- 21值(pg/mL) |
CV (%) |
|
69.8 |
6.9 |
|
181 |
3.0 |
|
486 |
1.9 |
用0.01M PBS(pH 7.4)稀释2份人EDTA血浆样本并进行分析。以pg/mL为单位的结果如下：
|
# |
稀释 |
观测值 |
预期值 |
回收率 % |
|
1 |
纯品 |
286 |
– |
– |
|
|
1:2 |
138 |
143 |
96 |
|
|
1:4 |
75 |
72 |
104 |
|
|
1:8 |
37.9 |
36 |
105 |
|
|
1:16 |
19.5 |
18 |
108 |
|
2 |
纯品 |
61.8 |
– |
– |
|
|
1:2 |
32.1 |
30.9 |
104 |
|
|
1:4 |
15.9 |
15.5 |
103 |
|
|
1:8 |
7.2 |
7.7 |
94 |
向两份患者样本中加标不同量的人完整FGF-21(1 vol. + 1 vol.)。混合物）并测定。结果单位为ng/mL，如下所示：
|
# |
初始值 |
加标量 |
观察值 |
预期值 |
恢复 % |
|
1 |
45.9 |
91 |
64.9 |
68.5 |
95 |
|
|
（血清） |
255 |
150 |
151 |
100 |
|
|
|
714 |
388 |
380 |
102 |
|
2 |
40.4 |
91 |
71.2 |
65.7 |
108 |
|
|
（血浆） |
255 |
148 |
148 |
100 |
|
714 |
406 |
377 |
108 |
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