fivephoton DnsylD-1说明书


 

fivephoton DnsylD-1说明书

荧光多巴胺| 荧光神经递质 – 丹磺酰5-C共轭| FIVEPHOTON BIOCHEMICALS | 丹磺酰 – 多巴胺| 部分DNSYLD-1

 

价钱: $ 195.00
可用性: 有现货
模型: DnsylD-1
制造商: Fivephoton Biochemicals

 

荧光多巴胺神经递质 

 

(用通过5碳间隔臂连接的丹磺酰基标记的多巴胺:Ex / Em:333 / 515nm)。Syn:Dansyl-Dopamine,Part DnsylD-1TM

 

Fivephoton Biochemicals的专有产品

 

图标图像:在96孔培养皿的孔上方的多个标记细胞的低放大倍数视图。

 

强调

  1. Pharmalogical属性几乎与天然多巴胺相同。
  2. DnsylD-1在纳摩尔浓度下选择性地在摄取和结合测定中操作。 
  3. 天然多巴胺化学结构是该荧光儿茶酚胺的主要成分,产生对所有多巴胺受体亚型以及多巴胺转运蛋白具有高亲和力的荧光神经递质分子。
  4. 带有5碳多联体多巴胺的小丹参标记产生稳定,明亮的荧光信号,空间位阻可忽略不计。 
  5. 丹酰荧光标签提供大的斯托克斯位移,使自发荧光和非特定背景信号小化:(Ex / Em:313 / 515nm)。
  6. DnsylD-1 TM的荧光信号 可被多巴胺受体和DAT的标准抑制剂阻断。
  7. 标准抑制剂可用于区分DnsylD-1 TM  与多巴胺受体和DAT 的相互作用。
  8. 来自DnsylD-1 TM的荧光 与酪氨酸羟化酶共定位并鉴定多巴胺能神经元。
  9. 为了测定多巴胺受体结合,首先将提供的固体悬浮于DMSO(10-50μl)中。离心机,澄清,并收集DMSO可溶部分,其可被等分并储存在-20 ø C:DnsylD-1 TM  悬浮于DMSO时和冷冻于-20 Ô C是至少2年的稳定。将DMSO溶解的物质稀释到测定缓冲液(例如PBS-BSA)中至所需的测定浓度。 通过荧光显微镜,荧光板读数器或流式细胞术检测DnsylD-1 TM。将荧光检测设备设置为Ex / Em:333/515 nm。

 

数量1

 块 成本
为0.5mg 1μmole $ 195
为1mg 2μmole $ 365产品
5毫克 10μmole $ 898
为15mg 30μmole $ 2398

 

可提供批量和定制合成。请咨询customersupport@fivephoton.com

 

1为了估计 您需要的DnsylD-1 TM的量,使用多巴胺Kd的10到100倍的测定浓度用于您正在研究的多巴胺受体亚型或转运蛋白(使用文献综述来确定平均报告的Kd值多巴胺受体亚型或转运蛋白)。然后估计所需您的测定中的总的外部测定缓冲液体积(例如50微升每孔的测定缓冲液在96孔培养皿乘以孔的数目),以计算DnsylD-1的量TM  整个所需检测。如需技术支持,请联系technicalsupport@fivephoton.com或致电:800.462.4507(:858.395.4026)。

 

产品规格

  • 光谱特征和测定波长:Ex:Em:333:515nm
  • MW:499.62(质量和QC由MALDI验证)
  • 外观:冻干的灰白色固体
  • 纯度:≥95%(HPLC;查看批次纯度的COA)
  • 溶解度:DMSO
  • 分析性QC测试:MALDI MS和HPLC
  • 使用10X Kd的未标记多巴胺对各自的多巴胺受体亚型或转运蛋白
  • 存储(冻干粉):4 ø C,暗,变干。存储在DMSO中溶解时:-20 Ó C,等分试样。
  • 运输:环境温度。

 

荧光多巴胺神经递质配体(丹磺酰 – 多巴胺),概述

这种荧光标记的多巴胺儿茶酚胺神经递质类似物(产品名称:DnsylD-1 TM),丹磺酰基通过5-碳间隔臂与多巴胺连接,提供了*的药理学工具。DnsylD-1 TM 是一种稳定的受体选择性和高亲和力药理配体,可通过荧光显微镜和FLIPR装置检测。与近报道的合成荧光神经递质类似物不同,DnsylD-1 TM  含有与5-碳多接头连接的完整天然多巴胺结构部分至小荧光标记丹酰。这种结构修饰使空间位阻小化,使DnsylD-1 TM成为可能 纳摩尔浓度的多巴胺配体结合和转运蛋白摄取试验的有效试剂。 

 

丹毒荧光标签在激发和发射大值之间提供大的斯托克斯位移(Ex:Em,313:515 nm),与其他荧光标签如FITC不同,有助于以小的自发荧光进行高信噪比检测。丹磺酰部分还改变分子间接触的光谱特征,促进配体 – 受体相互作用的生物物理表征。DnsylD-1 TM  是放射性配体的合适替代物。

 

荧光多巴胺配体 – 神经递质(DnsylD-1 TM)的应用

DnsylD-1 TM 具有以下适用性,因为丹酰荧光标记的分子尺寸小,多巴胺结构和荧光标记之间的长间隔臂,水溶液中的稳定性和周围细胞或组织培养基的低自发荧光。

  1. 药理学应用作为放射性配体的替代品。
  2. 多巴胺能神经元检测:生物标志物检测。
  3. 多巴胺摄取分析。
  4. 体内和体外多巴胺受体表达的组织化学成像和定量。
  5. 多巴胺代谢和营业额分析。
  6. 分析与改变的多巴胺合成,多巴胺受体表达或多巴胺摄取相关的疾病状况:人类疾病研究在以下方面的适用性:a)帕金森氏病。b)心理障碍,包括ADHD,精神分裂症和药物滥用。c)心血管,肾脏和免疫功能的生理调节。

图像:   DnsylD-1 TM (丹酰基 – 多巴胺)与神经母细胞瘤细胞结合,并通过低倍荧光显微镜在96孔板的孔中观察。显示多个单元格。  

小组。内源性表达多巴胺受体的大鼠神经母细胞瘤细胞在96孔培养皿的孔中生长,与DnsylD-1 TM孵育30分钟, 浓度为多巴胺对D2多巴胺受体的Kd浓度的10倍。用荧光显微镜在孔顶部以50X放大率拍摄图像。

 

底部面板。在暴露DnsylD-1 TM之前,将LD X Xd浓度的未标记多巴胺预曝光15分钟,以DX 的Kd浓度为10倍,如上图所示。未标记的多巴胺的预暴露有效地阻断DnsylD-1 TM的结合, 表现出高亲和力和选择性。

 

产品参考

May S,Andreasson-Ochsner M,Fu Z,Low YX,Tan D,de Hoog HP,Ritz S,Nallani M,Sinner EK。2013.体外表达的GPCR插入聚合物膜用于配体结合研究。Angew。化学。诠释。Ed,52,749-753

 

 

fivephoton TMPER-200说明书

fivephoton TMPER-200说明书

TRANSMEMBRANE PROTEIN EXTRACTION REAGENT (TMPER-200; PLASMA PROTEIN ISOLATION)

跨膜蛋白提取试剂 
(质膜蛋白分离)
 
零件 tmper-200。100 毫升体积。

适用于300个10cm的汇合细胞培养皿。根据培养皿的表面积,体积可扩展到其他尺寸的培养皿。
  • 对于大跨膜蛋白,跨膜蛋白的溶解和分辨能力明显高于 RIPA 缓冲液。 

  • 促进 蛋白质印迹中高分子量跨膜蛋白的分离。 

  • 非常适用于否则会聚集的多通道(4+ 跨膜结构域)蛋白质。

  • 含有一种成分,可提取嵌入脂筏中的蛋白质。

  • pH 值 7.4。1X 解决方案。100毫升

  • 与 BCA 蛋白检测兼容。

  • 储存:4 o C。在环境温度下运输。

 

跨膜蛋白提取

FIVEphoton Biochemicals 跨膜蛋白提取试剂 (tmPER-200 TM 是一种细胞裂解蛋白提取缓冲液,含有专有成分,有助于提取和分离高分子量跨膜蛋白,否则由于聚集趋势、脂筏结合或其他不溶性问题,这些蛋白在标准细胞裂解缓冲液中很难分离。Transmembrane Protein Extraction Reagent 旨在提取具有 4 个或更多跨膜结构域的蛋白质,同时也能有效分离不太复杂的跨膜蛋白质。FIVEphoton Biochemicals 跨膜蛋白提取试剂的适用性示例包括在蛋白质印迹下游应用中提高 ABC 转运蛋白、离子通道、离子交换器和 GPCR 的分辨率。


跨膜蛋白提取试剂:通用方案

研究人员首先采用协议手册中描述的技术来限制内吞作用和溶酶体靶向,否则可能导致多膜跨越蛋白的细胞质域的蛋白水解切割。在第二步中,加入添加了蛋白酶抑制剂的跨膜蛋白提取试剂以从细胞培养皿中去除细胞并溶解细胞膜。膜溶解后,使用短暂离心从含有提取的跨膜蛋白的上清液中去除细胞碎片。在 SDS-PAGE 凝胶中拆分之前,将上清液加入 Laemmli 样品缓冲液中,加热但未煮沸。对于蛋白质印迹,转移发生在添加了 SDS 和少量甲醇的转移缓冲液中。


图例。野生型 (WT) 和 deltaF508 CFTR,一种 12 TM 结构域蛋白,由 MDCK 细胞中的腺病毒感染表达,并用跨膜蛋白提取试剂提取。WT CFTR 揭示了一个 170 kD 的上带,反映了复杂的糖基化,以及一个核心糖基化带。相比之下,deltaF508 CFTR 的运输受损,保留在内质网中,因此仅与核心糖基化带合成。运输障碍是囊性纤维化的根本原因。
 
图标图像:   CFTR 在 HEK293 细胞中稳定表达并用跨膜蛋白提取试剂提取。捕获核心和复杂糖基化的野生型变体的蛋白质印迹。

 

Price: $195.00
Availability: In Stock
Model: TmPER-200 (300 plates)

fivephoton蛋白质提取产品列表

fivephoton蛋白质提取产品列表


我们提供多种蛋白质提取试剂,适用于包括细胞膜裂解、脂筏蛋白提取、跨膜蛋白分离、免疫沉淀和从组织中提取蛋白质的应用。有关蛋白质提取试剂的概述,请参见下表。

蛋白质提取试剂概述

试剂 零件号 提取高分子量跨膜蛋白

保持天然构象
和蛋白质相互作用

用于 IP 和 ELISA 脂筏提取 强力萃取 温和萃取
跨膜蛋白提取试剂    tmPER X
X
X
CHAPS 细胞裂解和免疫沉淀缓冲液 CIB-1 X X X
组织蛋白提取缓冲液 TEB-1 X
X
X
Triton 免疫沉淀缓冲液 TIB-1 X X X
ELISA 裂解和蛋白质提取缓冲液
ELSP-1 X
X X

 

 

TRANSMEMBRANE PROTEIN EXTRACTION REAGENT (PART NO. TMPER-50; PLASMA PROTEIN ISOLATION)

模型: TmPER-50(100片)
跨膜蛋白提取试剂
(膜蛋白分离。哺乳动物细胞和植物细胞) 

部分:tmper-50:30 毫升体积。 
 
适合百10厘米细胞文化前进重新汇合细胞的菜肴。可扩展到其他数量和尺寸的培养板。
  • 与 RIPA 缓冲液相比,对大跨膜蛋白的溶解和分辨能力显着提高。

  • 适用于哺乳动物和植物细胞蛋白的提取。请参阅下面的产品引用。

  • 聚合的大型多通道(4+ 跨膜结构域)蛋白质的理想选择。

  • 包含提取嵌入脂筏中的 TM 蛋白的专有成分。

  • pH 值 7.4。1X 解决方案。30毫升体积。

  • 与 BCA 检测兼容。

  • 储存:4 o C。在环境温度下运输。

跨膜蛋白提取试剂(tmPER-50 TM);概述
FIVEphoton Biochemicals跨膜蛋白提取试剂 (tmPER-50 TM )是一种细胞裂解蛋白提取缓冲液,含有专有成分,有助于高分子量多膜跨膜蛋白的分离和溶解,否则由于聚集趋势、脂筏结合或其他不溶性问题,这些蛋白在标准细胞裂解缓冲液中很难分离。Transmembrane Protein Extraction Reagent 旨在提取具有 4 个或更多跨膜结构域的蛋白质,同时也能有效分离不太复杂的跨膜蛋白质。FIVEphoton Biochemicals 跨膜蛋白提取试剂的适用性示例包括 ABC 转运蛋白、离子通道、离子交换器和 GPCR 在蛋白质印迹下游应用中的提取和拆分。

跨膜蛋白提取试剂(tmPER-50 TM);通用协议
研究人员首先采用技术来限制内吞作用和溶酶体靶向,这可能导致多膜跨越蛋白的细胞质结构域的蛋白水解切割。第二步,加入跨膜蛋白提取试剂,将细胞从细胞培养皿中取出,然后溶解细胞膜。膜溶解后,使用短暂离心从含有提取的跨膜蛋白的上清液中去除细胞碎片。在 SDS-PAGE 凝胶中拆分之前,将上清液加入 Laemmli 样品缓冲液中,加热但未煮沸。对于蛋白质印迹,转移发生在添加了 SDS 和少量甲醇的缓冲液中。允许转移进行的时间比通常用于蛋白质印迹协议的时间长约 25%。  

Transmembrane Protein Extraction Reagent 包含一个易于遵循的细胞裂解和蛋白质印迹样品制备方案,或者可以通过单击手册选项卡以 pdf 格式下载。  

图标图像:  应用跨膜蛋白提取试剂对复杂的多通道跨膜蛋白 CFTR 进行蛋白质印迹分析。deltaF508 和野生型 CFTR 的蛋白质印迹。第一条泳道:突变体 ABC 转运蛋白的 150 kD 变体的蛋白质印迹,显示仅具有核心糖基化的同种型。第二条泳道:捕获核心糖基化和复杂糖基化的同一 ABC 转运蛋白的野生型变体的蛋白质印迹。右侧显示的具有复杂糖基化的成熟加工野生型亚型的分子量为 170 kD,包含 12 个跨膜结构域。  


跨膜蛋白提取试剂的体积选项

可用卷
价钱
零件号
30毫升
120 美元
TMPER-50
50毫升
135 美元
TMPER-100
100毫升
195 美元
TMPER-200

 *使用可用选项菜单订购音量选项。

 

fivephoton2021年价格表

Fivephoton Biochemicals 为学术、工业制药和政府研究机构提供研究套件和试剂。我们支持基础研究、靶向发现、产品开发、药物筛选、临床前评估和生产。

上海金畔生物fivephoton2021年价格表

货号 品名 规格 价格 品牌
HPT1901 3'-Amino-modifier C7 CPG 1 g 7225 fivephoton2021
HPT1801 3’-Biotin LCAA CPG (HPT1801) 1 g 8500 fivephoton2021
HPT2101 3’-dA CPG (Part No HPT2101) 1 g 357 fivephoton2021
HPT1501 3’-Dabcyl LCAA CPG (HPT1501) 1 g 7650 fivephoton2021
HPT1401 3’-FAM LCAA CPG (HPT1401) 1 g 7650 fivephoton2021
HPT1701 3'-Thiol-modifier C6 S-S CPG (HPT1701) 1 g 6800 fivephoton2021
HPT2001 3'-dC CPG (Part No. HPT2001) 1 g 357 fivephoton2021
HPT2301 3'-dG CPG (Part No. HPT2301) 1 g 357 fivephoton2021
HPT2201 3'-dT CPG (Part No. HPT2201) 1 g 357 fivephoton2021
ADAM10-ELISA(96T) ADAM10 ELISA Kits (for human, mouse, rat, rabbit) 1 Kit, 96T 10166 fivephoton2021
hADAM10-ELISA Biotin ADAM10: A Disintegrin And Metalloprotease ELISA Kit – 96T 1 Kit, 96T 9945 fivephoton2021
hm, ms ADAM10-ELISA ADAM10: A Disintegrin And Metalloprotease ELISA Kit – 96T 1 Kit, 96T 9452 fivephoton2021
APC-1-FIVE-25 ALLOPHYCOCYANIN Fluorescent protein 250mg 250mg 4250 fivephoton2021
XL-APC-FIVE-25 ALLOPHYCOCYANIN, CROSS-LINKED 25mg 25mg 6630 fivephoton2021
hSNCA-ELISA Alpha-Synuclein (α-Synuclein, Alpha Synuclein, SNCA; Human) High Sensitivity ELISA Assay Kit 1 Kit, 96T 10795 fivephoton2021
27717 Amyloid-Beta (1-38) (FL) ELISA Kit 1 Kit, 96T 13260 fivephoton2021
APLP2 (Amyloid-Like Protein 2 0 fivephoton2021
h,r,m,APPBP2-ELISA Amyloid Protein Binding Protein 2 (APPBP2) ELISA Kit 1 Kit, 96T 9894 fivephoton2021
Anti-Mullerian Hormone(AMH) ELISA Kit  Human  96T 1 Kit, 96T 9945 fivephoton2021
p65Ab Antibody to p65 subunit of NF-kappa B (P65Ab; kw: p65 Antibody) ) 200 ul 4895.15 fivephoton2021
ApoE-ELISA Apo E ELISA Kits (for human, mouse, rat) 1kit, 96T 19550 fivephoton2021
B-PE-FIVE-25 B-Phycoerythrin Fluorescent Protein 25mg 25mg 4250 fivephoton2021
BACE1-ELISA BACE1 ELISA Kits (for human, mouse, rat, canine) 1 kit, 96T 10183 fivephoton2021
h, m, r BACE1-ELISA3 BACE1 ELISA Kits (human, mouse, rat) 1 Kit, 96T 9588 fivephoton2021
hKLB-ELISA Beta-Klotho ELISA Kit, human 1 Kit, 96T 9265 fivephoton2021
BSyn-ELISA  Beta-Synuclein ELISA Kits (for human, mouse , rat ,canine) 1 kit, 96T 10880 fivephoton2021
HPT1802 Biotin-NHS Ester ((+) Biotin N-hydroxysuccinimide ester; HPT1802)). Label peptides and oligonucleotides  1g 5270 fivephoton2021
CP-1 (100 plates) Calcium Phosphate Transfection Kit (CP-1) k 4318 fivephoton2021
CP-4 (200 plates) Calcium Phosphate Transfection Kit (CP-4) 1 kit 6545 fivephoton2021
CP-5 Calcium Phosphate Transfection Kit Refills (CP-5) varies on solution 935 fivephoton2021
CIB-1-8.0-60 Chaps Lysis and Immunoprecipitation Buffer, pH 8.0,  60 ml 60ml 1870 fivephoton2021
CIB-1-8.0-120 Chaps Lysis and Immunoprecipitation Buffer, pH 8.0, 120 ml 120 ml 3128 fivephoton2021
CIB-1-7.4-60 Chaps Lysis and Immunoprecipitation Buffer, pH 7.4, 60 ml 60 ml 1870 fivephoton2021
CIB-1-7.4-120 Chaps Lysis and Immunoprecipitation Buffer, pH 7.4, 120 ml 120 ml 3128 fivephoton2021
hCOMT-ELISA1 Catechol-O-Methyltransferase (COMT) ELISA Kit, human 1 Kit, 96T 10880 fivephoton2021
rCOMT-ELISA 1 Catechol-O-Methyltransferase (COMT) ELISA Kit, rat 1 Kit, 96T 10540 fivephoton2021
mCOMT-ELISA 1 Catechol-O-Methyltransferase (COMT) ELISA Kit, mouse 1 Kit, 96T 10540 fivephoton2021
HPT1001-0010 CPG-Ferrocene (HPT1001-0010)  100mg 100 mg 3825 fivephoton2021
HPT1001-0020 CPG-Ferrocene (HPT1001-0020) 200mg 200mg 5525 fivephoton2021
HPT-1001-1000 CPG-Ferrocene (HPT1001-1000)  1g 1g 16150 fivephoton2021
MCC-1.5 Custom Microfluidic Chips, 5 Chips 5 Chips 20400 fivephoton2021
MCC-1.10 Custom Microfluidic Chips, 10 Chips 10 Chips 24650 fivephoton2021
MCC-1.15 Custom Microfluidic Chips 15 Chips 15 Chips 29750 fivephoton2021
DNAbd-1-30 DNA-Binding Glass Micro-needle  30 glass needles 30 glass needles 3825 fivephoton2021
DNAbd-1-100 DNA-Binding Glass Micro-needle  100 glass needles 100 glass needles 10370 fivephoton2021
PCD-250 ECL Chemiluminescence High Sensitivity Western Blot Detection Kit (PCD-250 and PCD-500) 1 kit 3059.15 fivephoton2021
PCD-500 ECL Chemiluminescence High Sensitivity Western Blot Detection Kit (PCD-250 and PCD-500) 1 kit 3654.15 fivephoton2021
EGTA01-10 EGTA (0.1M EGTA in 0.1N Tris, pH 7.5) For Calcium Imaging. Part No. EGTA01-10 20 ml 1359.15 fivephoton2021
ELSP-1 ELISA Lysis and Protein Extraction Buffer 60 ml 1360 fivephoton2021
EIF-1 Extracellular Immunofluourescene Labeling (Staining) Kit (EIF-1) 1 kit 3910 fivephoton2021
REIF-1 Extracellular Immunofluorescence Labeling Kit Refills (REIF-1) varies on solution 951.15 fivephoton2021
HPT1002-0001 Ferrocene NHS Ester (Amine Reactive Electrochemical Reporter: No. HPT1002) – 10 mg 10 mg 2550 fivephoton2021
HPT1002-0005 Ferrocene NHS Ester (Amine Reactive Electrochemical Reporter: No. HPT1002) – 50 mg 50 mg 4063 fivephoton2021
HPT1002-0010 Ferrocene NHS Ester (Amine Reactive Electrochemical Reporter: No. HPT1002) –  100 mg 100 mg 7140 fivephoton2021
HPT1002-0500 Ferrocene NHS Ester (Amine Reactive Electrochemical Reporter: No. HPT1002) –  500 mg 500 mg 18360 fivephoton2021
HPT1002-0100 Ferrocene NHS Ester (Amine Reactive Electrochemical Reporter: No. HPT1002)- 1g 1g 28560 fivephoton2021
HPT1002-0700 Ferrocene NHS Ester (Amine Reactive Electrochemical Reporter: No. HPT1002)- 5 x 10 mg 5 x 10 mg 4063 fivephoton2021
HPT1003 Ferrocene phosphoramidite (Electrochemical Oligonucleotide Label: HPT1003) 100 umole 2125 fivephoton2021
mpHTS-Kit FIVEphoton Fluorescent Membrane Potential Assay Kit – High Throughput Format 1 kit;  Option A 25840 fivephoton2021
mpHTS-Kit FIVEphoton Fluorescent Membrane Potential Assay Kit – High Throughput Format 1 kit;  Option B 25840 fivephoton2021
MPFKit1 FIVEphoton Membrane Potential Assay Kit (part MPFKit1) I kit for 5 ml assay buffer 4420 fivephoton2021
MPFKit2 FIVEphoton Membrane Potential Assay Kit (part MPFKit2) I kit for 10 ml assay buffer 7939 fivephoton2021
MPFKit3 FIVEphoton Membrane Potential Assay Kit (part MPFKit3) I kit for 20 ml assay buffer 13566 fivephoton2021
MPFKit4 FIVEphoton Membrane Potential Assay Kit (part MPFKit4) I kit for 30 ml assay buffer 16796 fivephoton2021
MPFKit5 FIVEphoton Membrane Potential Assay Kit (part MPFKit5) 1 vial dye-quencher 5610 fivephoton2021
MPFkit6 FIVEphoton Membrane Potential Assay Kit (part MPFKit6) 1 vial dye-quencher 7650 fivephoton2021
MPFkit7 FIVEphoton Membrane Potential Assay Kit (part MPFKit7) 1 vial dye-quencher 8500 fivephoton2021
DnsylD-1 – .5mg Fluorescent Dopamine Neurotransmitter Ligand (DnsylD-1) 0.5mg 3315 fivephoton2021
DnsylD-1 – 1mg Fluorescent Dopamine Neurotransmitter Ligand (DnsylD-1) 1mg 6545 fivephoton2021
DnsylD-1 – 5mg Fluorescent Dopamine Neurotransmitter Ligand (DnsylD-1) 5mg 15266 fivephoton2021
CP-1 (100 plates) HEK293 Cell Calcium Phosphate Transfection Kit (CP-1) 1 kit 4318 fivephoton2021
hAB1-40ELISA  Human Amyloid-Beta (1-40) 1  kit, 96T 10523 fivephoton2021
hA-beta42 ELISA (96T) Human Amyloid-Beta (1-42) ELISA Assay Kit. Part No. hA-beta42, 96T  1kit, 96T 10455 fivephoton2021
hNFKB-4 Human Cell NF-kappa B (NF-kB) Activation Assay Kit (Part No. hNFKB-4) 1 kit 6545 fivephoton2021
hCysC-Biotin Human Cystatin C ELISA Kit 1 kit, 96T 9945 fivephoton2021
hIDE-Biotin 96T Human Insulin Degrading Enzyme (IDE) ELISA Kit (96T Part hIDE-Biotin 96T) 1 Kit, 96T 10370 fivephoton2021
NEP-ELISA Biotin Human Neprilysin (NEP) ELISA Kit 1 Kit, 96T 9945 fivephoton2021
NEP2-ELISA Biotin Human Neprilysin 2 (NEP2) ELISA Kit 1 Kit, 96T 9945 fivephoton2021
hQA-ELISA1 Human Quinolinic Acid (Part No hQA-ELISA1) ELISA Kit 1 Kit, 96T 9945 fivephoton2021
NFKB-ELISA(h, 96T) Human RelA (p65) NF-kappa B (NF-kB, Nuclear Factor-kappa B) ELISA Assay Kit 1 Kit, 96T 10795 fivephoton2021
INF-1 Immunofluorescence Labeling Kit (INF-1) 1 kit 3910 fivephoton2021
TIB-1 Immunoprecipitation Buffer w/ Triton X-100 (TIB-1) 150 ml 2133.5 fivephoton2021
hIDE-Biotin Insulin Degrading Enzyme ELISA Kit Format 1 (Human) 1kit, 96T 10370 fivephoton2021
mIDE-Biotin Insulin Degrading Enzyme ELISA Kit Format 1 (mouse) 1 Kit, 96T 10370 fivephoton2021
IDE-ELISA-3 Insulin Degrading Enzyme ELISA Kit Format 3 (mouse,human) 1 Kit, 96T 10370 fivephoton2021
IDE-ELISA Insulin Degrading Enzyme (IDE) ELISA Kits Format 2 (human, mouse, rat, canine, rabbit) 1 kit, 96T 10370 fivephoton2021
INF-1 Intracellular Immunofluorescence Labeling Kit (INF-1) I kit 3910 fivephoton2021
RIF-1 Intracellular Immunofluorescence Labeling Kit Refills (RIF-1) varies on solution 951.15 fivephoton2021
KLK6-ELISA Kallikrein-6 ELISA Kit (KLK6; Part No. KLK6-ELISA, 96T) 1 kit, 96T 10115 fivephoton2021
hKL-ELISA(96T) Klotho ELISA Kit, Human, 96T 1 kit,96T 9775 fivephoton2021
mKI-ELISA Klotho ELISA Kit, Mouse, 96T 1 kit, 96T 9775 fivephoton2021
HPT1103-0001 Leuco-Malachite Green-NHS Ester (HPT1103) 50mg 50 mg 4250 fivephoton2021
HPT1103-0010 Leuco-Malachite Green-NHS Ester (HPT1103)100mg 1OO mg 5950 fivephoton2021
HPT1103-0100 Leuco-Malachite Green-NHS Ester (HPT1103) 1g 1 g 23800 fivephoton2021
HPT1103-1000 Leuco-Malachite Green-NHS Ester (HPT1103) 10g 10 g 110500 fivephoton2021
HPT1103-0101 Leuco-Malachite Green -NHS Ester (HPT1103 (reaction pack: 5x10mg) 5x10mg 5950 fivephoton2021
HPT1104 Leuco-Malachite Green Phosphoramidite (HPT1104) 80mg 4063 fivephoton2021
HPT1103 Leuco-Malachite Green-NHS Ester (HPT1103) 5 x 10 mg 4063 fivephoton2021
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MGM-1A-1-30 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-1-30) 1um tip, 30 pipettes 30 pipettes 5253 fivephoton2021
MGM-1A-1-100 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-1-30) 1um tip, 100 pipettes 100 pipettes 14688 fivephoton2021
MGM-1A-1.2-30 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-1.2-30) 1.2um tip, 30 pipettes 30 pipettes 5253 fivephoton2021
MGM-1A-1.2-100 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-1.2-30) 1.2um tip, 100 pipettes 100 pipettes 14688 fivephoton2021
MGM-1A-3-30 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-3-30) 3um tip, 30 pipettes 30 pipettes 5253 fivephoton2021
MGM-1A-3-100 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-3-30) 3um tip, 100 pipettes 100 pipettes 14688 fivephoton2021
MGM-1A-5-30 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-5-30) 5um tip, 30 pipettes 30 pipettes 5253 fivephoton2021
MGM-1A-5-100 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-5-30) 5um tip, 100 pipettes 100 pipettes 14688 fivephoton2021
MGM-1A-10-30 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-10-30) 10um tip, 30 pipettes 30 pipettes 5253 fivephoton2021
MGM-1A-10-100 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-10-30) 10um tip, 100 pipettes 100 pipettes 14688 fivephoton2021
MGM-1A-20-30 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-20-30) 20um tip, 30 pipettes 30 pipettes 5253 fivephoton2021
MGM-1A-20-100 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-20-30) 20um tip, 100 pipettes 100 pipettes 14688 fivephoton2021
MGM-1A-30-30 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-30-30) 30um tip, 30 pipettes 30 pipettes 5253 fivephoton2021
MGM-1A-30-100 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-30-30) 30um tip, 100 pipettes 100 pipettes 14688 fivephoton2021
MGM-1A-40-30 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-40-30) 40um tip, 30 pipettes 30 pipettes 5253 fivephoton2021
MGM-1A-40-100 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-40-30) 40um tip, 100 pipettes 100 pipettes 14688 fivephoton2021
MGM-1A-50-30 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-50-30) 50um tip, 30 pipettes 30 pipettes 5253 fivephoton2021
MGM-1A-50-100 Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM-1A-50-30) 50um tip, 100 pipettes 100 pipettes 14688 fivephoton2021
MGM1A-C Microfluidics Glass Micropipettes (Part No. MGM1A-C) Option 9, two tip sizes 100 pipettes 15198 fivephoton2021
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ATS-1 Microscopy Stainless Steel Forcep Set (ATS-1) 2 forceps 544 fivephoton2021
hMAO-A ELISA 1 Monoamine Oxidase A ELISA Kit Human 1 Kit, 96T 10880 fivephoton2021
rMAO-A ELISA1 Monoamine Oxidase A ELISA Kit Rat 1 Kit, 96T 10540 fivephoton2021
mMAO-A ELISA1 Monoamine Oxidase A ELISA Kit Mouse 1 Kit, 96T 10540 fivephoton2021
hMAO-B ELISA 1 Monoamine Oxidase B ELISA Kit Human 1 Kit, 96T 10030 fivephoton2021
rMAO-B ELISA1 Monoamine Oxidase B ELISA Kit Rat 1 Kit, 96T 10540 fivephoton2021
mMAO-B ELISA1 Monoamine Oxidase B ELISA Kit Mouse 1 Kit, 96T 10540 fivephoton2021
mIDE-Biotin Mouse Insulin Degrading Enzyme (IDE) ELISA Kit 1 Kit, 96T 10625 fivephoton2021
mIDE-Biotin 2x96T Mouse Insulin Degrading Enzyme ELISA Kit (2x96TPart mIDE-Biotin 2x96T) 2 kits 19550 fivephoton2021
mKLK-6 Biotin Mouse Kallikrein-6 (KLK6) ELISA Kit 1 Kit, 96T 10795 fivephoton2021
ELISA-NFKB(m) Mouse RelA p65 NF-kappa B (NF-kB, Nuclear Factor-kappa B) ELISA Assay Kit. Part No. ELISA-NFKB(m, 96T)  1 kit 96T 10795 fivephoton2021
NFKB-3 NF-kappa B (NF-KB) – p65 (RelA) Immunofluorescence Labeling Kit (NF-kB, NF-kappaB, NFKB-3) 1 kit 6715 fivephoton2021
NFKB-1  NF-kappa B, NF-B, NF-kB, Nuclear Factor-Kappa B, Activation Assay Kit (Part No. NFKB-1) 1 kit 3059.15 fivephoton2021
NFKB-2  NF-kappa B, NF-kB, NF-kappaB, NF-B, Nuclear Factor-Kappa B, Activation Assay Kit (NFKB-2) 1 kit 7123 fivephoton2021
NPI-1 Nuclear Protein Isolation-Translocation Kit (NPI-1) I kit 3723 fivephoton2021
P65-Trans p65(RelA) Translocation Assay Kit (Part No. p65-Trans) 1 kit 6715 fivephoton2021
Prk-ELISA Parkin ELISA Kits (PARK2;  human, mouse, rat, canine) 96T 1 kit, 96T 10795 fivephoton2021
PCPs-1a(30f) Patch Clamp Pipettes with filament (Pre-Pulled Microfluidics Borosilicate Micropipettes; Part No. PCPs-1 (30)) 30 pipettes 5253 fivephoton2021
PCPs-1a(30wf) Patch Clamp Pipettes without filament  (Pre-Pulled Microfluidics Borosilicate Micropipettes; Part No. PCPs-1 (30)) 30 pipettes 5253 fivephoton2021
PCPs-1(100f) Patch Clamp Pipettes with filament (Pre-Pulled Microfluidics Borosilicate Micropipettes; Part No. PCPs-1 (100)) 100 pipettes 14688 fivephoton2021
PCPs-1(100wf) Patch Clamp Pipettes without filament (Pre-Pulled Microfluidics Borosilicate Micropipettes; Part No. PCPs-1 (100)) 100 pipettes 14688 fivephoton2021
PDTK Perfusion Dye Tracer Kit (Part Nos. PDTK-1 and PDTK-2) 1 Kit 2363 fivephoton2021
Percp-Five-25 Peridinin-Chlorophyll-Protein Complex (PerCP) 25mg 25mg 8330 fivephoton2021
PS1-ELISA Presenilin 1 Elisa Kit  (human, mouse, rat, canine) 1 kit, 96T 10795 fivephoton2021
PS2-ELISA Presenilin 2 Elisa Kit  (human, mouse, rat, canine) 1 kit, 96T 13005 fivephoton2021
PRB-1 Pharmacophore Perception (PRB-1) 1 book 1869.15 fivephoton2021
PIC1 Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X; Broad Spectrum. Part No. PIC1;  1ml) 1 ml (100X) 1334.5 fivephoton2021
PIC1 Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X; Broad Spectrum. Part No. PIC1;  5ml) 5 ml (100X) 5440 fivephoton2021
PI-1 Protease Inhibitor Cocktail (100X; PI-1) 1 ml 1971.15 fivephoton2021
PI-2 Protease Inhibitor Cocktail w/ EDTA (100X; PI-2) 1 ml 1971.15 fivephoton2021
PCS-1 Protein Crystallization (PCS-1) 1 book 2039.15 fivephoton2021
SGB-1 Protein Crystallization Strategies for Structural Genomics (SGB-1) 1 book 2039.15 fivephoton2021
PSP-11 Protein Structure Prediction (PSP-11) 1 book 2039.15 fivephoton2021
hQA-ELISA1 Quinolic Acid ELISA Kit 96T 1 kit, 96T 9945 fivephoton2021
R-PE-Five-25 R-Phycoerythrin Fluorescent Protein 25mg 6630 fivephoton2021
rbAB1-40ELISA Rabbit Amyloid-Beta (1 – 40) ELISA Assay Kit, 96T 1 Kit, 96T 10795 fivephoton2021
rbAbetaELISA(42) Rabbit Amyloid-Beta (1 – 42) ELISA Assay Kit, 96T 1 Kit, 96T 10795 fivephoton2021
rKLK6-Biotin Rat Kallikrein-6 (KLK6) ELISA Kit 1 Kit, 96T 10795 fivephoton2021
NFKB-ELISA(h) RelA p65 NF-kappa B (NF-kB, Nuclear Factor-kappa B) ELISA Assay Kit, Human Specificity (NFKB-ELISA(h)) 1kit, 96T 10795 fivephoton2021
  NFKB-ELISA (r, 96T) RelA p65 NF-kappa B (NF-kB, Nuclear Factor-kappa B) ELISA Assay Kit, Rat Specificity (  NFKB-ELISA (r, 96T)  1 kit, 96T 10795 fivephoton2021
hm, ms, rt NFKB-ELISA p65 – RelA (NF-kappa B) Total ELISA Kits 1 kit, 96t 8670 fivephoton2021
RIPA-50 RIPA Buffer (RIPA-50) 30 ml 1224 fivephoton2021
sAPPalpha-ELISA(96T) hsAPPalpha-ELISA sAPPalpha ELISA Kits (human, mouse, rat, rabbit) 1 Kit (96T) 10183 fivephoton2021
h, m, r, SAA-ELISA Serum Amyloid A (SAA) ELISA Kits 1 kit (96T) 9945 fivephoton2021
sAPPbeta-ELISA(96T) hsAPPbeta-ELISA sAPPbeta ELISA Kits (human, mouse, rat, rabbit) 1 Kit (96T) 10132 fivephoton2021
ACTVO-4 Sodium  Orthovanadate 6ml 1955 fivephoton2021
ACTVO-4 Sodium  Orthovanadate 12ml 2975 fivephoton2021
ACTVO-4 Sodium  Orthovanadate 20ml 3536 fivephoton2021
ACTVO-4 Sodium  Orthovanadate 30ml 4335 fivephoton2021
ACTVO-4 Sodium  Orthovanadate 50ml 7650 fivephoton2021
hklotho-elisa Soluble Alpha Klotho ELISA Kit, Human, 96T 1 kit, 96T 9265 fivephoton2021
27601 Soluble Alpha Klotho ELISA Kit, Mouse, 96T 1 Kit, 96T 14025 fivephoton2021
hSUMO1ELISA-biotin Sumo1 (SUMO 1, SUMO-1, Small Ubiquitin-Related Modifier 1, human specificity) ELISA Kit 1 kit, 96T 9962 fivephoton2021
hSUMO2ELISA-biotin SUMO2 (Human SUMO 2, SUMO-2, Sentrin-2, Small ubiquitin-Related Modifier 2) ELISA Kit 1 Kit, 96T 9962 fivephoton2021
TEB-1 Tissue Protein Extraction Buffer (1X, 100 ml; Part No TEB-1) 100 ml 1445 fivephoton2021
RNAstb-20 Tissue RNA Stabilizer Solution 20 ml 20 ml 1105 fivephoton2021
RNAstb-100 Tissue RNA Stabilizer Solution 100 ml 100 ml 3145 fivephoton2021
TmPER-50 (100 plates) Transmembrane Protein Extraction Reagent (Part No. tmPER-50) 30 ml 2040 fivephoton2021
tmPER-100 (150 plates) Transmembrane Protein Extraction Reagent (tmPER-100) 50 ml 2295 fivephoton2021
TmPER-200 (300 plates) Transmembrane Protein Extraction Reagent (tmPER-200) 100 ml 3315 fivephoton2021
hTH-ELISA1 Tyrosine Hydroxylase ELISA Kit, human 1 Kit, 96T 10030 fivephoton2021
rTH-ELISA1 Tyrosine Hydroxylase ELISA Kit, rat 1 Kit, 96T 10030 fivephoton2021
mTH-ELISA1 Tyrosine Hydroxylase ELISA Kit, mouse 1 Kit, 96T 10030 fivephoton2021
GDNA-1 Two-Step Genomic DNA Isolation-Extraction Kit (GDNA-1) 1 kit, 96T 3570 fivephoton2021
hUb-ELISA Ubiquitin (Ub, Ubiquitin, human specificity) ELISA Kit 1 kit, 96T 9911 fivephoton2021
hE1UBAE-ELISA Ubiquitin Activating Enzyme (E1, E1/UBAE, ubiquitin-activating.  Human specificity) ELISA Kit 1kit, 96T 10795 fivephoton2021
hE2UBCE-ELISA Ubiquitin Conjuating Enzyme (E2/UBCE) ELISA Kit 1 kit, 96T 10795 fivephoton2021
hE3UBPL-ELISA Ubiquitin Ligase (E3) ELISA Kit 1 Kit, 96T 9962 fivephoton2021

fivephoton hBACE1-ELISA

fivephoton hBACE1-ELISA

人 BACE1试剂盒

部件编号hBACE1-ELISA

ELISA 

 

仅用于研究。不适用于诊断应用。

储存:4oC,到达后 6 个月

安全性:终止液含有酸。避免眼睛和皮肤接触标准肽浓度:225 pg/mL

分析范围:5-200 pg/mL 灵敏度:2.5 pg/mL

实验原理

试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA) 测定 BACE1 浓度。将样品应用于预先包被亲和纯化的多克隆抗 BACE1 抗体的微量 elisa 微孔中。孵育样品,然后清洗。加入第二种山羊抗 BACE1-HRP 结合物抗体,然后孵育并清洗。加入显色液 A 和 B,导致颜色变为蓝色。应用终止液终止反应,使溶液变为黄色。采用与标准肽浓度对应的 450 nm 处的吸光度读数测定样品中 BACE1 的浓度。

 

由于 BACE1 是在分泌途径(包括内质网、高尔基体和质膜 1)中加工的跨膜蛋白,其从细胞中提取和 ELISA 试验中检测的主要方法涉及使用非变性去污剂缓冲液通过细胞裂解和溶解进行制备。还在生物体液(如 CSF 2)中检测到 BACE1:根据您计划测定的组分,按照以下所述制备样本。请注意,说明 7 与膜包埋部分相关。

 

参考文献:

1、颜氏等。等人《生物化学杂志》2001 年 9 月 28 日;276 (39) :36788-96。电子版 2001 年 7 月 20 日。

2. Zetterberg H 等。Arch Neurol.2008 Aug;65 (8) :1102-7.

 

样品制备:以下作为样品制备的通用指南。研究应进行部门内文献分析,以确定制备样品的宜方法。

1. 血清:室温下凝固 10-20 min。以 2000-3000 rpm 离心 20 min。

收集上清液进行测定。如果出现沉淀,再次离心。测定上清液部分。

2. 血浆:使用适当的 EDTA 或肝素作为抗凝剂。使用搅拌棒混合 10-20 min。以 2000-3000 rpm 离心 20 min。收集上清液。如果出现沉淀,再次离心。

3. 尿液:收集于无菌容器中。以 2000-3000 rpm 离心 20 min。收集上清,如出现沉淀,再次离心。收集上清液进行测定。

4. 细胞培养上清液:分泌成分检测:培养液以 2000-3000 rpm 离心 20 min。收集上清液进行测定。

  • 细胞浆:用 PBS (pH7.2-7.4) 将细胞悬液稀释至细胞浓度为 100 万个/ml。进行反复冻融循环,使细胞膜断裂并释放细胞内成分。以 2000-3000 rpm 离心 20 min。收集上清液进行测定。如果出现沉淀,再次离心并测定

上清液。

  • 组织(细胞质成分):切割组织切片并称重。在 PBS (pH7.2-7.4) 中加入切片。用液氮快速冷冻。将样品解冻至 2-8 ℃,加入 PBS 并均质化。以 2000-3000 rpm 离心 20 min。除去上清液。

7. 细胞和组织匀浆和裂解物:使用非变性去污剂蛋白提取试剂(例如,FIVEphoton Biochemicals 部件号ELSP-1)在冰上存在蛋白酶抑制剂的情况下匀浆组织/和裂解细胞。离心细胞碎片,并使用上清液进行 ELISA 试验。

8. 样本可在-80 ℃ 下储存。避免反复冻融循环。您可以将样本等分用于随后的 ELISA 测定。

9. 避免含有 SDS 的变性细胞裂解缓冲液如 RIPA 缓冲液。

 

表 1. 试剂盒包含的材料。在 4 ℃ 下储存所有材料

1

标准肽

0.5ml

 

7

显色液 A

6ml

2

标准稀释液

1.5 ml

 

8

显色液 B

6ml

3

Microelisa 板条

12 孔 ×8 条

 

9

终止液

6ml

4

HRP 结合物-检测抗体

6 ml

 

10

指导手册

1

5

30× 清洗液

20ml

 

11

密封袋

1

6

样品稀释剂

6ml

 

 

 

 

 

需要但未提供的材料

1. 37oC 培养箱

2. 标准吸光度酶标仪

3. 精密移液器和一次性移液器枪头

4. 去离子水

5. 一次性样本稀释管

6. 吸水纸

7. 转移至 ELISA 皿前,用于制备溶液的 96 孔板

8. 96 通道移液管

 

 

试验的重要注意事项和准备

1. 实验者应进行初步试验,以确定符合试验范围的样品稀释液。使用本试剂盒测定范围内的低和高浓度的标准肽,对您的样本进行初步测定。用“样品稀释剂(表 1,组分 6)”混悬并稀释实验样品,以符合测定范围(或者,用含有蛋白质阻断剂(例如 0.25% 酪蛋白)的 PBS 稀释样品)。可能需要对多个样本进行系列稀释,以确定符合测定范围的正确样本浓度。如果需要调整,浓缩或稀释实验样品。留出足够的实验样品留样,用于重复试验。

2. 通过仅进行溶剂对照,确定溶剂缓冲液是否无意中与试验发生交叉反应并产生颜色变化。此外,通过在溶剂中稀释提供的标准肽,确定溶剂缓冲液中的成分是否抑制测定反应,并进行测定试验。将结果与样品稀释剂中的相同标准肽稀释液进行比较(表 1,组分 6)。为了补救,在

 

 

“样品稀释剂”(表 1,组分 6)或在另一种溶剂(如 PBS)中制备样品,以防止意外的实验读数或试验失活。

  • 进行测定前,应将试剂盒平衡至室温 30 min。将打开的 microelisa 板保存在密封的塑料袋中,4 ℃ 保存。推荐使用多通道移液器同时点样。试验期间应密封平板。不应使微孔干燥。

4. 在单独的试管或 96 孔板中制备标准品和样品,而不是在 ELISA 板孔中。将标准品和样品同时转移至 ELISA 板中。

5. 建议对样本进行一式两份分析,以解决移液错误。

6. 使用新的加样枪头和 ELISA 板密封剂,以避免交叉污染。

7. 请勿混合其他 ELISA 试剂盒中的试剂。

8. 避免 ELISA 板底部和侧面出现指纹、污迹、划痕、气泡或液滴。

9. 请注意,未被冲洗掉的样本中的叠氮化纳可能会抑制产生测定颜色反应的辣根过氧化物酶 (HRP)。

10. 当根据含量测定计算样品浓度时,应考虑稀释因子。

11. 如果清洗液在 4 ℃ 下储存期间结晶,则在 37 ℃ 下加热溶液并振摇直至结晶混悬。

 

试验程序

标准品和样品制备。标准品和样品应同时加入孔中。在单独的 96 孔板中制备标准品和样品,并同时转移至 ELISA 板中。不得在 ELISA 板中制备溶液。

 

检测方法

  • 留出 12 个孔,标记用于标准肽稀释液。如下表 2 所示,一式两份配置 6 个浓度的标准肽。切勿直接使用 ELISA 孔进行稀释。各孔的终总体积应为 50 l。

 

表 2. 标准品稀释液该稀释系列用于 225 pg/mL 标准肽。

 

标准品浓度

标准编号

稀释说明

1

150 pg/mL

1

将 100 μL 标准肽(表 1,组分 1)与 50 μL 标准稀释剂(表 1,组分 2)混合。移取 100 μL,制备标准品 3。

2

150 pg/mL

2

将 100 μL 标准肽与 50 μL 标准稀释剂混合。移取 100 μL,制备标准品 4。

3

100 pg/mL

3

将 100 l1 号标准品与 50 μL 标准品稀释剂混合。取出 100 l,制备标准品 5。

4

100 pg/mL

4

将 100 l2 号标准品与 50 μL 标准品稀释剂混合。取出 100 l,制备标准品 6。

5

50 pg/mL

5

将 100 l3 号标准品与 100μl 标准品稀释剂混合。取出 100 l 制成

标准品 7. 取出 50 l,弃去。

6

50 pg/mL

6

将 100 l4 号标准品与 100μl 标准品稀释剂混合。取 100 l,制成标准品 8。取 50 l,弃去。

7

25 pg/mL

7

将 100 l5 号标准品与 100 μL 标准品稀释剂混合。取出 100 l 制成

标准品 9. 取出 50 l,弃去。

8

25 pg/mL

8

将 100 l6 号标准品与 100 μL 标准品稀释剂混合。取出 100 l,制备标准品 10。取下 50 l,弃去。

9

12.5 pg/mL

9

将 100 l7 号标准品与 100 μL 标准品稀释剂混合。取出 50 l,制成

标准 11。取下 100 l,弃去。

 

 

10

12.5 pg/mL

10

将 100 l8 号标准品与 100 μL 标准品稀释剂混合。取出 50 l,制备标准品 12。取下 100 l,弃去。

11

6.2 pg/mL

11

将 50 l9 号标准品与 50 μL 标准品稀释剂混合。取 50 l,制备标准品溶液。

12

6.2 pg/mL

12

将 50 l10 号标准品与 50 μL 标准品稀释剂混合。取出 50 l,制备标准品溶液

 

2. 空白、标准品和样品制备:(在单独的多孔培养皿中预混合溶液,并将溶液同时转移至 ELISA 培养皿中。不得在 ELISA 皿中预混合溶液)。

 

a) 空白孔:设置两个“空白孔”:“重现样品溶剂(不含样品)相对于空白溶液中样品稀释剂的比例。空白溶液重现了不含抗原的样品溶液的含量。对于每个空白孔,制备 50 μL 混合的“空白溶液”。

 

b) 标准品溶液孔:在各稀释度下制备 50 μL 标准品。

 

c) 样品孔:对于每个孔,制备 50 μL 样品(可能已经预先稀释以满足测定范围)。

 

d) 同时将空白、标准品和样品分配到 ELISA 试纸条中。

 

e) 立即分配 50 μL HRP 结合物检测抗体溶液(组分 4 表

1) 至各孔。然后用封闭膜覆盖微孔板。

 

f) 在 37 ℃ 培养箱中轻轻混合 30 min。

 

3. 孵育期间,制备清洗液:用 dH20 将 30 倍清洗液稀释至 1 倍。每孔制备 600 μL 1X 清洗液。

 

4. 清洗:小心移除密封件膜:请勿交叉污染液体。轻轻抽吸

去除每个孔中的液体。翻转平板并在吸水纸上拍干。加入 100 μL 清洗液

溶液并在抽吸前在孔中渗滤 3 min。轻轻旋转酶标板。重复清洗步骤 5 次,清洗 30 秒。因此,每孔总共需要 600 μL 清洗液。也可以使用自动清洗器清洗 ELISA 孔。吸干微孔板,但不允许微孔干燥。

 

5. 显色:每孔先同时加显色液 A 50 μL,再每孔同时加显色液 B 50 μL。轻轻混合溶液 A 和 B。将平板在 37 ℃ 下避光孵育 10 min。

 

6. 终止:每孔加入 50 μL 终止液终止反应(蓝色变为黄色)。佩戴护目镜:终止液含有酸。

 

  • 在加终止液 10 min 内,在 450 nm 处读取样品:设空白孔为零,测定各孔在 450 nm 处的吸光度 (OD)。

数据分析

1. 用空白标准溶液和相应的 OD 值绘制标准曲线。您可能希望计算线性回归方程,以确定您样本的浓度。请记住,在终计算中,样品在试验中稀释了 5 倍。用于计算样品浓度的其他数据分析方法也适用。

 

 

程序流程图

 

制备标准品、空白和样品

向孔中加入样品和 HPR 检测抗体结合物,在 37 ℃ 下室温孵育 30 min。

每孔洗涤 6 次

加入显色液 A 和 B,37 ℃,10 min,暗处 

加入终止液