X-gal溶液 20mg/ml

X-gal溶液 20mg/ml

¥80.00

货号:BL546A

规格:5ml

品牌:Jinpan

IPTG/X-Gal即用型溶液 

产品简介:

蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏阅读框,但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能,这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此,宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性,但它们同时存在时,可形成具有酶学活性的蛋白质。这样,lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补,称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落,因而易于识别。然而,当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段,使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选,又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37倒置培养12-16h后,含有插入片段重组质粒的细菌形成白色菌落,而没有插入片段的质粒细菌形成蓝色菌落。

配制方法:

50mg/ml IPTG  5 ml:取250 mg IPTG,溶于5 ml无菌水中,过滤除菌后-20贮存。

20mg/ml X-Gal  5 ml:取100 mg X-gal,溶于5 ml 二甲基甲酰胺(DMF),棕色瓶中-20贮存。此试剂无需灭菌。

实验程序:

1、转化平板的制备:

向铺好的含有相应抗生素的固体琼脂平板表面加入16 µlIPTG(50 mg/ml)40 µlX-gal (20 mg/ml),使用无菌的弯头玻璃棒将其均匀的涂开,尽量使溶解X-gal的二甲基甲酰胺挥发干净。

2、转化

1)取部分连接产物加到50-100 µl感受态细胞中(感受态细胞应刚从-70冰箱取出放于冰浴上,待刚刚解冻时加入连接产物,连接产物的加入量不超过感受态细胞体积的十分之一),轻弹混匀,冰浴30分钟。

2)将离心管置于精确42水浴90秒,取出管后立即置于冰浴中放置2-3分钟,其间不

要摇动离心管。

3)向离心管中加入250-500 µl 37预热的SOCLB(不含抗生素)培养基,150rpm,37振荡培养45分钟。此步目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4)将离心管中的菌液混匀,吸取100 μl加到含相应抗生素的SOBLB固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。待平板表面干燥后,倒置平板,37培养12-16小时。

3、检测

将得到的白色菌落接种1-5 ml LB培养基,37摇床振荡培养过夜,保存菌种后提取质粒,应用PCR或酶切方法鉴定插入片段是否正确。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件:

-20保存,一年有效。

货号 BL546A
规格 5ml
品牌 Jinpan
说明书下载 点击下载
  • X-gal溶液 20mg/ml

X-α-Gal(cas:107021-38-5)现货


X-α-Gal(cas:107021-38-5)现货

简要描述:X-α-Gal是一种酵母半乳糖苷酶 (MEL1) 的显色底物,用于在培养基上直接检测GAL4系统的酵母双杂交作用。通过蓝白颜色筛选,快速和简便地识别阳性的蓝色克隆,无需费时的β-半乳糖苷酶报告基因检测。

详细介绍

产品咨询

  • X-α-Gal
    X-α-Gal是一种酵母半乳糖苷酶 (MEL1) 的显色底物,用于在培养基上直接检测GAL4系统的酵母双杂交作用。通过蓝白颜色筛选,快速和简便地识别阳性的蓝色克隆,无需费时的β-半乳糖苷酶报告基因检测。         
    X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活,MEL1GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码分泌型的α-半乳糖苷酶。该酶可水解无色的X-α-Gal底物并zui终产生蓝色产物。表达α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培养基上显蓝色,即阳性的双杂交作用。
    用 途:
    (1)α-半乳糖苷酶的显色底物,形成蓝色沉淀。在培养基上直接检测酵母双杂交相互作用,利用此底物可以省去双杂交体系中的β-半乳糖苷酶溶液和filter-lift assays;
    (2)用于区分肠杆菌科内的不同菌种以及区分双歧杆菌和乳酸菌;
    (3)在组织化学中用于酶活性的检测;
    储存液的配制及使用步骤:
    A)涂布于预制平板:溶解24mg X-α-gal于6 mL DMF,终浓度为4mg/ mL的溶液。
    ①涂布200ul(15cm) 或者100ul(10cm)X-α-gal 储存液于预制平板上;
    ②放于37℃培养箱至液体被吸收(由于DMF挥发性低,zui长可放4小时);
    ③将转化细菌或酵母涂于平板上,于37或30培养直至蓝色菌落出现。
    B)直接加入琼脂中:溶解60mg X-α-gal于3 mL DMF,终浓度为20mg/ mL的溶液。
    ①将已灭菌琼脂培养基冷却至50-55 ℃;
    往已冷却的培养基中直接加入2 ml -10 ml 20 mg/ ml X-α-Gal储存液,混匀,快速倒平板。
    外 观:白色或灰白色结晶粉末,或者无色结晶;
    溶 解 度(1%甲醇溶液):无色,清澈;
    储 存:-15°C避光避潮保存;
    产品信息:现货供应!
    产品名称
    产品货号
    规格
    价格(¥)
    X-α-Gal
    XA250
    250mg
    1800
    XA500
    500mg
    2830
    XA1
    1g
    3980