goryochemical通过许可和内部增值创造创新荧光探针，方法是扩大细胞生物学的应用，并方便地将其带给学术界、小型生物技术公司和大型制药公司的研究人员。

在invitro和invivo与生命科学仪器公司建立了*的合作关系。

实验阶段创造了理解假设驱动和发现研究的解决方案。与光学探针相关的坚实的化学背景，通过与东京大学(长野教授和乌拉诺教授)和北海道大学(诺贝尔奖获得者铃木教授)的关系，使高阳成为连接invitro和invivo以及人类翻译的荧光试剂的主要供应商。

在临床试验中，我们还开发了新的荧光探针，可以在日本的临床前和临床试验中用于荧光图像引导手术检测癌症。

在不久的将来，我们将为患者提供荧光图像引导手术的新方法。

goryochemical GC301说明书

AcidiFluor™ ORANGE

酸性荧光橙色

活细胞酸性细胞器的荧光探针(试验尺寸)

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• 高信噪比
• 橙色荧光，可用于多色成像
• *的光稳定性

acid Fluor ORANGE是一种荧光成像探针，可在酸性环境中显著增强荧光。该探针能选择性地染色溶酶体、晚期内体和颗粒等酸性细胞器。其优异的选择性能够检测酸性环境。即，在pH5.0的条件下，与酸性细胞器的环境相同，荧光强度是物理pH 7.4的50倍或更多。acid Fluor ORANGE对照射激发光表现出很强的光稳定性。由于它通过在532纳米或514纳米激发发出橙色荧光，多色成像通过与蓝色荧光(CFP、赫希斯特等)结合成为可能。)，绿色荧光(绿色荧光蛋白、荧光素等。)和近红外荧光。acid Fluor ORANGE可用于检测酸性细胞器、观察颗粒释放、胞吞/胞吐成像等。

酸性荧光橙的特点

λabs 535 nm
λfl 560 nm

pKa 5.1

高信噪比

图1。酸荧光橙的荧光光谱与酸碱度的关系

酸性荧光橙的荧光光谱分别在pH 5.0或pH 7.4的磷酸盐缓冲液中测定。pH 5.0缓冲液对应于酸性细胞器中的条件，pH 7.4对应于生理细胞质条件。酸性荧光橙在pH 5.0时的荧光强度比pH 7.4缓冲液中的荧光强度提高了50倍。(λex 532 nm / λem 568 nm)

发出橙色荧光，可用于多色成像

图2使用HeLa细胞的多色成像的例子

用酸性荧光橙和Hoechst33342对表达线粒体-绿色荧光蛋白的HeLa细胞进行多重染色。溶酶体用酸性荧光橙色染色，细胞核用Hoechst33342染色为蓝色，线粒体用绿色荧光蛋白染色为绿色。如图2所示，酸性荧光橙色可用于多色成像

*的光稳定性

图3通过光浸试验与竞争对手产品的比较

样品被连续照射180秒，并在共焦显微镜下观察。尽管溶血跟踪器绿色DND-26和溶血跟踪器红色DND-99显著变色，但酸性荧光橙色的荧光仍然存在。溶血传感器绿色DND-189不适合连续观察，因为荧光通过激发光照射泄漏到细胞质中。
高阳化学公司在广濑贤三教授(东京大学神经生物学系医学研究生院教授)的指导下，将酸性荧光橙商业化。酸性荧光橙获得东京大学的许可。该产品的开发得到日本科学技术署(JST)项目“测量和分析系统和技术的开发”的支持。

酸性荧光橙问答

我能用于固定样品吗？

不。不幸的是，酸性荧光橙色不能用于固定样品。据推测，酸性荧光橙在固定样品中可能不发荧光，因为酸性环境不能通过固定作用保持在酸性细胞器中。酸性细胞器中的酸性环境似乎只有在细胞存活时，才能利用三磷酸腺苷作为能源。

什么样的成像是可能的？

酸性荧光橙可用于溶酶体成像、RBL-2H3脱颗粒成像(如应用笔记所示)和使用中性粒细胞或胰岛素瘤的胞吐成像等。一旦我们准备好，这些应用程序将在应用笔记中发布。

除了pH 7.4和pH 5.0外，荧光光谱如何？

在pH 3.0-pH8.0缓冲溶液中测得的酸性荧光橙色的荧光强度光谱如下所示。酸碱值变得越小，荧光发射的强度增加。

关于细胞内转运的研究:酸性荧光橙色能标记抗体或蛋白质吗？

使用酸性荧光橙-NHS(GC302)可以使蛋白质进入酸性细胞器时发出荧光。

荧光强度在小于3的酸碱度下波动吗？

酸性荧光橙的强度在小于3的酸碱度下波动不大。

酸性荧光橙-NHS问答

标签产量是如何确定的？

标记产率可以通过使用以下公式来确定。用酸性荧光橙-NHS的浓度除以目标蛋白的浓度，可以估算出与目标蛋白分子结合的酸性荧光橙分子的数量。

A544,280:标记蛋白在544纳米或280纳米的吸光度

CF:校正系数(0.12)

e酸性荧光橙-NHS:酸性荧光橙-NHS的摩尔吸光系数(80，000)

e蛋白质:目标蛋白质的摩尔吸光系数(例如IgG为216，000)

有效标记目标蛋白的宜方法是什么？

我们建议使用纯化的抗体或蛋白质。如果您想标记蛋白质混合物，请通过超滤或凝胶过滤去除污染物质。尤其是胺的污染(例如。Tris)导致标记效率降低。

值得注意的是，如果过量的染料结合到目标蛋白上(每个蛋白分子7-8个分子)，就会导致荧光信号饱和或目标蛋白变性。

酸性荧光橙色染料可用于固定细胞成像吗？

很抱歉，酸化荧光橙色-NHS仅用于“活”细胞成像。这是因为囊泡中的酸性环境被固定过程破坏了。

CaSiR-1/CaSiR-1AM的问答

什么是调幅酯？

氨基甲烷代表乙酰氧基甲基，氨基甲烷酯由羧酸衍生而来，以增加质膜的渗透性。如下图所示，CaSiR-1AM渗透细胞膜，其乙酰氧基甲基被细胞内酯酶裂解，形成能与钙相互作用的CaSiR-1结构2+。当乙酰氧基甲基被裂解产生CaSiR-1时，水溶性显著增加，这变得难以泄漏胞外液体。

CaSiR-1/CaSiR-1调幅对其他阳离子有响应吗？

卡西尔-1和卡西尔-1调幅在高达1毫米毫克的情况下几乎没有发射2+或者高达100毫米纳+或者国王+。

当我用卡西尔-1上午给细胞染色时，有必要添加普朗尼克F-127(清洁剂)吗？

不仅卡西尔-1调幅，而且所有调幅酯探针都具有*的亲脂性。因此，在调幅酯溶解在二甲基亚砜中，然后直接分散在缓冲溶液中的情况下，它们聚集并变得难以进入细胞。因此，有必要通过添加去污剂和在某些情况下，另外对去污剂和氨基甲酸酯的溶液进行超声处理来制备很好地结合到细胞中的染色溶液。

CaSiR-1/CaSiR-1调幅的细胞毒性如何

虽然我们还没有进行细胞毒性试验，但我们计划比较我们的产品和竞争对手的产品的细胞毒性。我们一做实验，就把结果上传到惠普。此外，由于激发光毒性是小波长%3E长波长，与蓝色、绿色或红色钙探针相比，近红外探针CaSiR-1不会对细胞造成太大伤害。

POLARIC问答

为什么颜色会改变？

因为亲和力不同。

POLARIC通过改变溶剂来改变颜色，我们称之为溶剂变色。(左侧图片显示。)

溶剂有一个叫做极性的指数。POLARIC荧光探针对溶剂的亲和力受溶剂极性的影响，如类水或类油。这改变了溶解的POLARIC荧光探针，例如，蓝色代表色拉油，绿色代表酒精，红色代表水。因此，POLARIC荧光探针和溶剂之间的亲和力差异可以表现为颜色的变化。

这一特性使我们能够替代各种现象，如温度变化、压力变化、酸碱度变化和硬度变化等。POLARIC荧光探针的颜色变化。

图1贾布朗斯基图和溶剂重取向的模式图

光吸收激发POLARIC荧光探针后，它们的激发状态通过周围溶剂的重新定向而稳定。

由于处于激发状态的探针分子的电荷很大程度上是局部的，极性溶剂比非极性溶剂更有效地稳定激发状态。稳定性的差异反映在荧光波长的差异上。

ET(30)每种溶剂的值如表所示。如图2所示，当POLARIC溶解在每种溶剂中时，颜色从蓝色(左侧)变为黄色(右侧)。这是因为当ET(30)当ET(30)价值大。

ET(30)每种溶剂的值

图2溶解POLARIC的各种溶剂的紫外图像照片