HTI 凝血因子Xa

haemtech Coagulation Factor Xa

 

 

 

因子Xa在凝血酶原
酶中的参与说明了丝氨酸蛋白酶因子Xa在凝血酶原酶复合物中的参与。膜结合因子Xa与膜结合因子Va结合以形成凝血酶原酶复合物。该复合物通过蛋白水解除去凝血酶原的片段1.2（F1.2）部分，有效地将酶原凝血酶原（II）转化为活性丝氨酸蛋白酶凝血酶（IIa）。

 

 

 

 

HCXA-0060

尺寸	100微克，1毫克
公式	50％甘油/水（v / v）

 

 

存储	-20℃下
纯度	通过SDS-PAGE> 95％

 

 

活动决定	因子X凝固测定或显色测定
保质期（妥善保存）	12个月

 

 

 

 

HCBXA-0061 

尺寸	100微克
公式	50％甘油/水（v / v）

 

 

存储	-20℃下
纯度	通过SDS-PAGE> 95％

 

 

活动决定	因子X凝固测定或显色测定
保质期（妥善保存）	12个月

 

 

HCXA-GD Human gla-Domainless Factor Xa

 

 

尺寸	100微克
公式	10mM Hepes，50mM NaCl，pH 7.4

 

 

存储	-80℃下
纯度	通过SDS-PAGE> 95％

 

 

活动决定	因子X凝固测定或显色测定
保质期（妥善保存）	12个月

 

 

 

 

HCXA-EGR

尺寸	100微克
公式	20mM Hepes，150mM NaCl，pH 7.4

 

 

存储	-80℃下
纯度	通过SDS-PAGE> 95％

 

 

活动决定	因子X凝固测定或显色测定
保质期（妥善保存）	12个月

 

 

 

 

 

 

HCXA-DEGR 

 

 

尺寸	100微克
公式	20mM Hepes，150mM NaCl，pH 7.4

 

 

存储	-80℃下
纯度	通过SDS-PAGE> 95％

 

 

活动决定	因子X凝固测定或显色测定
保质期（妥善保存）	12个月

 

 

HCXA-BEGR

 

 

尺寸	100微克
公式	20mM Hepes，150mM NaCl，pH 7.4

 

 

存储	-80℃下
纯度	通过SDS-PAGE> 95％

 

 

活动决定	因子X凝固测定或显色测定
保质期（妥善保存）	12个月

 

 

BCXA-1060

尺寸	100微克
公式	50％甘油/水（v / v）

 

 

存储	-20℃下
纯度	通过SDS-PAGE> 95％

 

 

活动决定	因子X凝固测定或显色测定
保质期（妥善保存）	12个月

 

 

 

 

BCXA-EGR 

尺寸	100微克
公式	20mM Hepes，150mM NaCl，pH 7.4

 

 

存储	-80℃下
纯度	通过SDS-PAGE> 95％

 

 

活动决定	因子X凝固测定或显色测定
保质期（妥善保存）	12个月

 

 

 

 

 BCXA-DEGR

尺寸	100微克
公式	20mM Hepes，150mM NaCl，pH 7.4

 

 

存储	-80℃下
纯度	通过SDS-PAGE> 95％

 

 

活动决定	因子X凝固测定或显色测定
保质期（妥善保存）	12个月

 

 

 

 

 

 

MCXA-5060 鼠标因子Xa

 

 

尺寸	50微克
公式	50％甘油/水（v / v）

 

 

存储	-20℃下
纯度	通过SDS-PAGE> 95％

 

 

活动决定	因子X凝固测定或显色测定
保质期（妥善保存）	12个月

 

 

 

 

通过内在或外在因子Xase复合物激活酶原因子X产生活性丝氨酸蛋白酶因子Xa（1,2）。因子X的活化需要重链的蛋白水解切割，导致活化糖肽的释放。因子Xa中的重链区含有丝氨酸蛋白酶催化结构域，而如酶原中的轻链含有膜结合结构域。

因子Xa参与凝血酶原酶复合物，其催化凝血酶原快速转化为凝血酶。凝血酶原酶是由在血浆存在下组装在细胞表面上的因子Xa（酶）和因子Va（辅因子）组成的酶复合物。尽管因子Xa可以独立地催化凝血酶原的活化，但是在*组装凝血酶原酶复合物的情况下，该反应发生的速率增加了近300,000倍。在解体凝血酶原酶复合物后，通过辅因子的失活，因子Va或通过抑制剂如ATIII直接抑制因子Xa来终止因子Xa在体内的凝固活性。

近年来，分子生物学家利用因子Xa对细菌中表达的融合蛋白进行位点特异性切割（9-12）。将Xa因子敏感位点掺入目标重组蛋白和促进纯化和/或表达的肽或蛋白质之间。通过用因子Xa切割，从表达的杂交种中释放靶蛋白。然后可以通过亲和层析容易地除去因子Xa。

因子Xa通过用从罗素的毒蛇毒液中分离的因子X活化剂活化纯化的因子X来制备。通过在苯甲脒 – 琼脂糖上的色谱法从活化混合物中纯化因子Xa，然后进行凝胶过滤（1,3）。还可获得几种因子Xa的修饰形式，包括：A）含有三肽氯甲基酮抑制剂EGRck或荧光抑制剂Dansyl-EGRck的活性位点阻断因子Xa; 和B）人Gla-domainlessβ-因子Xa。该酶以50％（体积/体积）甘油/ H2O供应，应储存在-20℃。通过SDS-PAGE分析测定纯度，并在因子Xa凝固测定和/或显色底物测定中测量活性。

除了其在凝血研究中的广泛应用之外，因子Xa还可用于融合蛋白的位点特异性切割。将因子Xa敏感位点掺入目的重组蛋白和促进纯化和/或表达的肽或蛋白质之间。通过用因子Xa切割，从表达的杂交种中释放靶蛋白。然后可以通过亲和层析容易地除去因子Xa。批次一致性确保每次都可重现的结果。对于涉及细胞培养的实验，请与我们联系，讨论用于细胞培养的定制低内毒素批次。

 

凝胶	Novex 4-12％Bis-Tris
加载	人因子Xa，每泳道1μg
缓冲	MOPS
标准	SeeBluePlus 2; 肌球蛋白（191 kDa），磷酸化酶B（97 kDa），BSA（64 kDa），谷氨酸脱氢酶（51 kDa），酒精脱氢酶（39 kDa），碳酸酐酶（28 kDa），肌红蛋白红（19 kDa），溶菌酶（14 kDa的）
特别说明	由于存在高达50％的β形式，重链是双重链。α-Xa向β-Xa的转化通过α-Xa对α-Xa的自动切割发生，导致COOH末端肽的丧失。

 

 

 

 

本土化	等离子体
行动方式	凝血酶原酶复合物的酶组分
分子量	46,000（人类）（4） 45,300（牛）（5）
消光系数	Ë 1％ 1厘米，280纳米

= 11.6（人类）（9）     = 12.4（牛）（7）

具体活动	约1000单位/毫克
结构体	两个亚基，Mr = 16,200和29,000（人）（6），Mr = 16,500和28,800（牛）（5），NH2末端gla结构域，两个EGF结构域
碳水化合物百分比	3.0％（人类）（8） 2.1％（牛）（8）
翻译后修改	11个gla残基， 一个β-羟基天冬氨酸

参考

1. Jesty，J.，et al。，Methods Enzymol。，45,95（1976）。

2. 杰克逊，CM，安。Rev.Biochem。，49,765（1980）。

3. Krishnaswamy，S.，et al。，J.Biol。Chem。，262,3291（1987）。

4. Discipio，RG等，Biochemistry，16,5253（1977）。

5. Fujikawa，K。和Davie，EW，Methods Enzymol。，45,89（1976）。

6. Krishnaswamy，S.，et al。，J.Biol。Chem。，261,8997（1986）。

7. Discipio，RG等，Biochemistry，16,698（1977）。

8. Jackson，CM等，Biochemistry，7,4506（1968）。

9. Fujikawa，K.，Biochemistry，13,5290（1974）。

10. Nagai，K。，et al。，Proc。国家科。科学院。科学。USA，82,7252（1985）。

11. Aurell，L.，et al。，Thromb。Res。，11,595（1984）。

12. Nagai，K。和Thogersen，H.，Nature，309,810（1984）。

样本出版物

1. Monteiro，S.，Biochem。J.（2005）387,871-877。（凝血酶原激活）

2. Zhang，D.，et al。，Biochemistry。2006年11月28日; 45（47）：14175-14182。（凝血酶原激活）

3. K. Garai等人。/ Protein Expression and Purification 66（2009）107-112（融合蛋白的切割）

4. Kamata，K。，et al。，Proc。国家科。科学院。科学。美国，卷。95，pp.6630-6635，1998年6月（结晶）

5. Yang，Y。等，J Immunol。2006年12月1日; 177（11）：8219-8225。（用作ELISA中的捕获）

6. Krisinger。，等，Journal Biol Chem。（2009）VOL。284，没有。9，pp.5896-5904（表面等离子体共振分析）

 

 

 

 

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