kamiyabiomedical KT-12247说明书

Rat Creatine Kinase MB Isoenzyme (CKMB) ELISA

大鼠肌酸激酶同工酶（CKMB）ELISA
货号：KT-12247

预期用途
该试剂盒是一种用于大鼠CKMB体外定量测定的夹心酶免疫分析方法
血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体。为了
仅供研究使用。

COMPONENTS

Reagents Quantity

Pre-coated, ready to use 96-well strip plate 1

Calibrator 2

Calibrator Diluent 1 × 20 mL

Detection Reagent A 1 × 120 μL

Detection Reagent B 1 × 120 μL

Assay Diluent A 1 × 12 mL

Assay Diluent B 1 × 12 mL

TMB Substrate 1 × 9 mL

Stop Solution 1 × 6 mL

Wash Buffer (30X concentrate) 1 × 20 mL

Plate sealer for 96 wells 4

需要但未提供的材料
一。带450±10纳米滤光片的微孔板阅读器。
2。单通道或多通道移液管，具有高精度和一次性。
3。微离心管。
4。去离子水或蒸馏水。
5。吸墨纸吸墨纸吸墨纸。
6。洗涤液容器。
7。0.01 mol/L（或1x）磷酸盐缓冲盐（PBS），pH值7.0-7.2。

储存
所有试剂应按小瓶上的标签保存。校准器，检测试剂A，
检测试剂B和96孔板条板在收到后应存放在-20℃下，其他试剂应存放在-20℃下
应为4°C。未使用的板条应保存在密封袋中，并提供干燥剂
尽量减少暴露在潮湿空气中。打开的测试包将保持稳定1个月，前提是它存储为
如上所述。

试验原理
本试剂盒中提供的微孔板已预涂有CKMB特异性抗体。然后将校准品或样品添加到适当的微孔板上，微孔板上有一种针对CKMB的生物素结合抗体。接着，将亲和素与辣根过氧化物酶（HRP）结合后，加入到每个微孔板中并孵育。加入TMB底物溶液后，只有含有CKMB、生物素结合抗体和酶结合亲和素的微孔才会出现颜色变化。加入硫酸溶液终止酶-底物反应，并测量颜色变化
在450 nm±10 nm波长下进行分光光度测定。然后通过比较样品的外径和校准曲线来确定样品中CKMB的浓度。
样品收集和储存
血清
使用血清分离管，使样品在室温下凝结2小时，或在4℃下凝结过夜，然后在约1000×g的条件下离心20分钟。立即对新制备的血清进行分析，或在-20℃或-80℃下将样品分批储存，以备日后使用。避免反复冻融
循环。

等离子体
用EDTA或肝素作为抗凝剂收集血浆。在收集后30分钟内，将样品在1000 x g、4°C下离心15分钟。立即取出血浆并进行分析，或在-20°C或-80°C下将样品分批储存，以备日后使用。避免重复冻融循环。
组织匀浆
组织匀浆的制备取决于组织类型。
一。组织在冰冻PBS中冲洗以*去除多余的血液，并在均质前称重。
2。将组织切成小块，在新鲜的裂解缓冲液（根据目标蛋白的亚细胞位置需要选择不同的裂解缓冲液）（w:v=1:20-1:50，例如在20-50毫克的组织样品中加入1毫升裂解缓冲液）中用玻璃均质机在冰上均质（微型组织研磨机也可以）。
三。所得悬浮液用超声波细胞破胶剂进行超声处理，直到溶液澄清。
四。然后，将匀浆在10000×g下离心5分钟，收集上清液，立即或等分测定，并在≤-20℃下保存。
细胞裂解物在按照以下说明进行分析之前，需要对细胞进行裂解。
一。贴壁细胞用冷PBS轻轻洗涤，用胰蛋白酶分离，1000×g离心5分钟（悬浮细胞可直接离心收集）。
2。在冷PBS中清洗细胞三次。
三。在浓度为107个/mL的新鲜溶解缓冲液中重新培养细胞，如有必要，可对细胞进行超声波处理，直至溶液澄清。
四。在1500 x g下，在4°C下离心10分钟，以去除细胞碎片。立即测定或等分，并储存在≤-20°C下。
细胞培养上清液和其他生物液体
在1000 x g下离心样品20分钟。收集上清液并立即进行分析，或在-20°C或-80°C下分批储存样品以备日后使用。避免重复冻融循环。

KAMIYA BIOMEDICAL COMPANY由Kohji Kamiya于1983年3月在加利福尼亚州千橡市成立，并于1996年搬迁至华盛顿州西雅图。我们公司的目的是为生命科学和医学界提供高质量的创新实验室研究和诊断工具。 。 KAMIYA 是一家独立的美国公司，服务于市场。

公司'批产品是蛋白激酶抑制剂，星形孢菌素及其类似物K252a。Staurosporine于1977年由Satoshi Ohmura博士发现，他是2015年诺贝尔奖获得者。这是个商业上可获得的星形孢菌素。如今，staurosporine是生命科学研究领域受欢迎的研究工具之一。

如今，神谷 ' 生命科学产品线包括数以千计的人类和动物的生物标志物的检测与ELISA试剂盒在世界上大的选择之一临床前试验。 神谷继续提供各种其他生命科学研究产品，包括酶抑制剂和单克隆/多克隆抗体，用于多种领域，包括细胞凋亡，多药耐药，氧化/ DNA损伤和修复，骨生物学，癌症，心脏健康，炎症，压力，肥胖和糖尿病。

1997年，KAMIYA推出了全系列临床诊断和研究免疫测定产品，用于基于免疫比浊技术的脂质评估，凝血，炎症，糖尿病，营养评估和血清蛋白测量。在K-测定法 开发的试剂用于标准化学分析仪，不需要混合，溶解或稀释试剂或样品，具有特殊的价值。

近，KAMIYA推出了 用于胰岛素，D-二聚体，因子XIII，血浆FDP，血清/尿液FDP和总IgE测试的新型创新K-ASSAY化学分析仪试剂。

KAMIYA现在拥有美国任何公司广泛的液体血清蛋白免疫分析试剂产品系列。我们为先进的医院，医疗中心，临床实验室，临床参考实验室，研究机构，分销商和诊断仪器公司提供临床诊断试剂。

寻找KAMIYA BIOMEDICAL COMPANY继续为生命科学和医学界提供创新和先进的实验室研究和诊断工具

上海金畔生物kamiyabiomedical KT-354现货

大鼠微量白蛋白酶联免疫吸附试验
微量白蛋白的定量测定
在大鼠生物样品中
货号：KT-354

Rat Microalbumin ELISA 

微量白蛋白酶联免疫吸附试验大鼠
货号KT-354
预期用途
大鼠微量白蛋白酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种高灵敏度的双位点酶联免疫分析方法，用于大鼠生物样品中微量白蛋白的定量测定。仅供研究使用。
引言
白蛋白是一种多功能蛋白，通过血流动力学、转运和营养机制促进体内平衡。在所有哺乳动物和许多低等脊椎动物的血管内和血管外都发现了白蛋白。它是由肝脏合成的约67000道尔顿的分子。通常只有极少量的白蛋白逃过肾小球的再吸收，并被排泄到尿液中。许多隐匿性疾病可导致肾脏损害，这可能导致过量的血清蛋白，包括白蛋白，被肾脏和尿排出。
该ELISA可用于测定血清、组织提取物和其他生物流体中的白蛋白。
原则
双抗体夹心酶联免疫吸附试验的原理如图1所示。在本试验中，样品中的白蛋白与已吸附到聚苯乙烯微滴定孔表面的抗-alb抗体反应。清洗去除未结合蛋白后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗-Album抗体。这种HRP结合抗体与先前结合的白蛋白形成复合物。在另一洗涤步骤之后，通过添加显色底物3,3'，5,5’-四甲基联苯胺（TMB）来分析与免疫吸附剂结合的酶。结合酶的数量与被测样品中白蛋白的浓度直接相关；因此，在450 nm处的吸收是对被测样品中白蛋白浓度的测量。这个
从校准器建立的校准曲线中插入试样中的白蛋白量，并对样品稀释进行校正。

图1.

1.固相结合抗白蛋白抗体

2.添加校准器和样品

3.形成白蛋白*抗白蛋白复合物

4.去除未结合的样本蛋白质

5.添加抗alb-hrp共轭物

5.抗ALB HRP*ALB*抗ALB形成的复合物

6.去除未结合的抗ALB HRP

7.添加TMB基板

8.测定结合酶活性

组件
1。稀释浓缩液
一瓶含有50毫升5倍浓缩稀释剂的缓冲液。
2。浓缩洗涤液
一瓶含有50毫升20倍浓缩洗涤液。
三。酶抗体结合浓缩物
一小瓶含有150微升100倍浓缩亲和力纯化的抗大鼠白蛋白抗体，该抗体与HRP在A中结合。
稳定缓冲器。
4。TMB基质溶液
一瓶含有12毫升TMB和过氧化氢的柠檬酸缓冲液，pH3.3。
5。停止解决方案
一瓶含有12毫升0.3米硫酸。
警告：避免接触皮肤。
6。微量滴定板
12个可拆卸的8个井条，位于井架框架内。用亲和力纯化的抗鼠白蛋白包被。
7。大鼠微量白蛋白校准器
一瓶含有冻干大鼠微量白蛋白校准器。
8。阳性对照
一瓶含有50升血清和0.1%Sodium azide。浓度见控制证书。
所需但未提供的材料
•用于制造和分配稀释液的精密移液管（2μl至200μl）
•试管
•微孔板清洗机/吸气机
•蒸馏水或去离子水
•微型板阅读器
•用于制备试剂和缓冲溶液的各种玻璃器皿
•计时器

注意事项
1。开始分析前仔细阅读说明。
2。此套件仅供研究使用。
三。为保证本产品的质量和可靠性，我们付出了很大的努力。但是，有可能
在这种情况下，由于干扰因素的高水平，可能会得到不寻常的结果。
4。防腐剂
阳性对照品含有0.1%Sodium azide。
5。不需要添加剂或防腐剂来保持样品的完整性。避免叠氮污染。
6。浓度高于0.1%的叠氮化物和硫柳汞抑制酶反应。
7。其他注意事项：
不要交换不同批次的套件组件。
请勿在到期日后使用套件组件。
防止试剂受到阳光直射。
不要用嘴吸液。
不要在使用试剂的地方吃、喝、吸烟或使用化妆品。
使用手套避免接触试剂。
停止溶液含有稀硫酸。可能刺激眼睛和皮肤。之后用水冲洗
联系。
试剂制备
1。稀释浓缩液
提供的稀释液是5倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水按1:5稀释。

2。浓缩洗涤液
提供的洗涤液是20倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水稀释1:20。水晶
当储存温度较低时，浓缩物中的形成并不少见。将浓缩液加热至
稀释前30-35°C可溶解晶体。
三。酶抗体结合浓缩物
通过添加10微升计算每一个滴定板试纸所需的工作共轭溶液量。
酶抗体与990微升1X稀释剂的结合物，用于测试每条测试条。混合均匀，但
轻轻地。避免起泡。
4。TMB基质溶液
可随时使用。
5。停止解决方案
可随时使用。
6。微量滴定板
可随时使用。打开微量滴定袋并从袋中取出盘子。移除所有
不用于分析，放回袋中，与干燥剂一起重新密封。
7。大鼠微量白蛋白校准器
向冻干大鼠微量白蛋白校准器中加入1.0毫升蒸馏水或去离子水，轻轻搅拌至
溶解。校准器现在的浓度为200.0μg/ml（重组校准器应为
如果打算将来使用，则应重新报价并冻结）。需要立即制备大鼠微量白蛋白校准器。
使用前（见下表）。在每一步之间充分混合。避免起泡。

8。阳性对照
浓度和推荐稀释度见控制证书。使用前，对阳性对照品进行短暂离心，使所有液体收集在小瓶底部。
储存和稳定性
1。成套工具
套件的到期日期在外标签上注明。建议的储存温度为4°C。注：大鼠微量白蛋白校准器和阳性对照品的长期储存建议见下文。
2。稀释剂
5x稀释液浓缩液在有效期内保持稳定。1X工作溶液自制备之日起至少稳定一周。两种溶液均应在4°C下储存。
三。洗涤液
20倍洗涤液浓缩液在到期前保持稳定。1X工作溶液自制备之日起至少稳定一周。两种溶液都可以在室温（RT，16-25°C）或4°C下储存。
4。酶抗体结合物
未稀释的抗-alb-hrp结合物应在4°C下储存，并在使用前立即稀释。工作共轭溶液在黑暗中储存时可稳定1小时。

5。TMB基质溶液
TMB基质溶液应在4°C下储存，并在到期前保持稳定。
6。停止解决方案
停止溶液应在4°C下储存，并在到期前保持稳定。
7。微量滴定板
抗鼠白蛋白涂层井在到期日前保持稳定，并应在4°C温度下储存在带干燥剂包装的密封箔袋中。
8。大鼠微量白蛋白校准器
冻干大鼠微量白蛋白校准器应在4°C下储存或冷冻，直到重组。重组校准器应重新标定并冷冻保存。避免多次冻融循环。工作校准液应在使用前立即制备，并稳定8小时。
9。阳性对照
对于超过7天的储存，应将其冷冻至到期日。在4°C温度下储存少于7天。避免多次冷冻/解冻循环。
不稳定迹象
如果测试正确，用校准溶液观察到的结果应在预期值的20%以内。
样本收集和处理
通过静脉穿刺和血分离后的血液，通过离心分离收集血液。
对于血浆样品，应将血液收集到装有抗凝剂的容器中，然后离心分离。应注意尽量减少溶血，过度溶血会影响您的结果。立即化验或等分样品，并将样品储存在-20°C。避免重复冷冻/解冻。
对于任何可能含有病原体的样本，必须注意防止接触开放性伤口。不需要添加剂或防腐剂来保持样品的完整性。避免叠氮污染。
分析方案
样品稀释
由于分析的高敏感性质，每个样品在用于正常分析前应稀释。1:500稀释适合于大多数尿样，而血清或血浆样品可能需要稀释1∶100万。对于在校准曲线范围之外产生结果的样品的定量，可能需要更小或更大的稀释度。如果不确定样品水平，则应使用一个或两个代表性样品进行连续稀释。
强烈建议运行整个板。
准备1:500稀释的样品，将2微升样品转移到998微升1X稀释剂中。这样可以稀释1:500。
对于血清或血浆样品，将血清或血浆中的2 L L转化为1X稀释液的1998 L。现在稀释度为1:1000。接下来，将2微升1:1000稀释液与1998微升1X稀释液混合。现在稀释1:1000000。在每个阶段*混合。

程序
1。使用前将所有试剂置于室温。
2。移液管100微升
校准器0（0.0 ng/ml）一式两份
校准器1（6.25 ng/ml）一式两份
校准器2（12.5 ng/ml）一式两份
校准器3（25 ng/ml）一式两份
校准器4（50 ng/ml）一式两份
校准器5（100 ng/ml）一式两份
校准器6（200 ng/ml）一式两份
校准器7（400 ng/ml）一式两份
三。用移液管将100微升稀释阳性对照品（一式两份）移入预先的孔中。

4。用移液管将100微升稀释样品（一式两份）移到预先的孔中。
5。将微量滴定板在22°C（RT）下培养30（30±2）分钟。孵育期间，将培养皿盖好并保持水平。
6。孵育后，吸入井内的物质。
7。用适当稀释的洗涤液将每口井注满并抽吸。重复三次，总共洗四次。如果是手动清洗：将稀释的清洗液*注入井内，倒置板，并将内容物倒入/摇出废物容器。然后，在吸水纸上用力打井，去除残留的洗涤液。重复三次，共洗四次。
8。用移液管将100微升适当稀释的酶抗体结合物移到每个孔中。在22°C（RT）下培养30（30）
±2）分钟。培养过程中，将培养皿盖在黑暗中并保持水平。
9。按照步骤6和7中所述清洗和吸干井。
10。用移液管将100微升TMB基质溶液移到每个孔中。
11。在室温下在黑暗中孵育10分钟。
12。10分钟后，向每个孔中添加100μl的停止溶液。
13。测定每孔含量450 nm时的吸光度。按照制造商的规格校准板读卡器。
终反应混合物的吸光度可在添加停止溶液后2小时内测量。然而，良好的实验室实践要求尽快进行测量。
结果
1。从每个样本的测试值中减去平均背景值。
2。利用为校准器观察到的结果构建校准曲线。虽然也可以使用二阶多项式（二次）或其他曲线拟合，但合适的曲线拟合是四参数物流曲线的拟合。
三。从校准曲线中插入测试样品值。校正样品稀释系数，使其达到原样品中微量白蛋白的浓度。
性能特点
根据良好的实验室实践，特定微量白蛋白的检测需要精心的质量控制。各实验室应采用常规的质量控制程序，以确定化验间和化验内的精密度和性能特征。
程序的限制
1。在*理解信息的情况下进行分析程序，将获得可靠和可重复的结果。
包含在包装说明书中，并遵守良好的实验室惯例。
2。影响分析性能的因素包括仪器功能、玻璃器皿的清洁度、蒸馏水或去离子水的质量、试剂和样品管的准确度、清洗技术、培养时间或温度。