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聚乙烯亚PEI-Pro(GMP)说明书

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Jinpan Polyethyleneimine PEI Pro (GMP)聚乙烯亚PEI-Pro(GMP)说明书

产品详情

货号

规格

价格

78EF10003-1L

1L

￥70,000.00

78EF10003-5ml

5ml

￥1,000.00

基本信息

    Jinpan Polyethyleneimine PEI PRO(GMP)是GMP级别转染试剂，本制品利用Jinpan公司生产的线性阳离子聚合物,按照符合GMP认证管理体系下，采用药用规格原辅料生产，所用起始材料及所需化学品和配制过程均在无菌环境中操作进行，以确保制造过程中每个步骤的特性、效力、纯度和安全性的一致性 。并严格控制重金属残留、细菌内毒素残留等，生产工艺符合 GMP 规范的产品生产与质量管理规程，保障生产过程及所有原辅料可追溯。

 

· PH值检测通过中国药典 2020 版第四部 pH 值测定法(通则 0631)

· 检测遵循《人用基因治疗总论-中国药典 2020》国家药典委。

· 检测遵循USP Chapter<1043>, Ancillary Materials for Cell, Gene, and Tissue-Engineered Products 用于细胞治疗，基因治疗和组织工程产品中的辅料。

· 细菌内毒素检测符合中国药典2015版四部通则（1143）方法2光度测试法（动态浊度法）

· 重金属残留检测符合国药典 2020 版第四部重金属检查法(通则 0821)

· 支原体检测 使用支原体检测试剂盒

质量信息表

产品特点

     Jinpan-PRO GMP在 HEK293和CHO大多数表达系统中,Jinpan-PRO GMP 都能提供稳定的高表 达（96 孔板至 100L 生物反应器）。现在每年有更多的研究人员和公司选择使用 Jinpan-PRO GMP 进行细胞转染.。

· GMP级别定制监管，支持并满足合规要求。

· 不含动物源性成分。

· 严格遵循以下规范生产 1. ISO 9001:2015, certified facility。

· 严格按照《GMP 附录-细胞治疗产品》国家药品监督管理局。

· 从工艺开发到临床试验和商业化的无缝过渡生产细胞系（HEK-293 和衍生物、VERO 等的最高病毒产量。

操作方法参考

一、贴壁细胞转染 以 6 孔板转染 293T 细胞为例：

（一）转染前准备

1) 转染前一天：用胶原酶 I型（78CL10002)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。 按照每孔2×10 6的细胞量接种293T 至 6 孔板(每孔加入 2ml 新鲜的 DMEM:F12+5%FBS Complete medium 和 1ml 的细胞悬液)置于 37°C,5%CO2培养 箱培养 24h。

2) 24h 后,移除之前培养基，每孔加入 2ml 新鲜的 DMEM:F12+5%FBS。

注意：确保 293T 细胞生长状态良好传代 不超过 15 代。

（二）转染过程

3) 第一天：显微镜下检查细胞汇合度， 当细胞达到 70%到 80%的汇合度时，开始准备转染。

4) 对于每孔细胞，用 100µl 无血清培养基（如 OPTI-MEMⅠ培养基）稀释 DNA 使 DNA 终浓 度为 1ug/ml（DNA/总培养体积）。

5) 对于每孔细胞，用 100μL 无血清培养基（如 OPTI-MEMⅠ培养基）稀释适当比例的适量 Jinpan-PRO GMP 。DNA:Jinpan-PRO GMP 的比例要依据自己实验摸索最适比例。

6) 将稀释的 Jinpan-PRO  GMP转染试剂加入到稀释的质粒中（总体积 200µL）轻轻混匀， 室温孵育 30 分钟。

7) 小心地将 Jinpan-PRO  GMP复合物滴加到细胞培养板每个孔中，轻轻摇动培养板混匀。注 意加入混合液时轻轻沿着孔板边缘滴入，而不是在细胞的顶部以免破坏细胞的粘附性。

8) 将培养板放入 37°C，5%CO2培养箱培养中培养 24h。

（三）观察转染结果 9) 第二天：在荧光显微镜下观察细胞转染效率，通常超过 80%的 293T 细胞在转染后的 24h 可以观察到绿色荧光。 小贴士 :建议进行不同基因转染时应对 Jinpan-PRO GMP 和 DNA 的比例进行优化，以达到最适比例， 通常筛选范围在 1:1 到 1:3 之间。如果之前用过进口品牌的 PEI，用Jinpan-PRO  GMP时应适当 降低使用浓度。

    通常情况下，分别准备Jinpan-PRO GMP GMP和 DNA 转染溶液时其体积一般是转染前每孔细胞培 养液体积总量的 1/10-1/20，如细胞培养液体积为 3ml，则稀释Jinpan-PRO  GMPI及 DNA 的体积为150ul。质粒 DNA 的浓度通常为 1ug/ml（DNA 质量/细胞培养总体积）[1][4]。 不同质粒种类以及大小会影响转染效率，如较大片段插入质粒可能转染效率低，可根据 实际实验需要调整，如适当增加转染质粒总量等。 ØHEK293 GnTI 细胞重悬浮可用枪头或移液管反复吹打，但 CHO-S 细胞的粘附性比较强 重悬浮时需要借助细胞刮刀。 一般建议用胶原酶消化细胞，如果表达的是膜蛋白，胰酶消化细胞可能会降低蛋白表达， 建议用胶原酶消化细胞，我们推荐用(78CL10002)的胶原酶。 对于贴壁性低的细胞系，可用明胶或鼠尾胶铺板，增加细胞与培养皿之间的粘附性。 一旦确定了细胞类型、培养基和78BioPEI GMP与 DNA 的最佳比例，就可以在转染后 24 至 96 小时内多次观察转染效率，以优化最大表达量时间点。

二、悬浮细胞转染 离心对数期生长的细胞用新鲜的培养基重悬浮使细胞密度达到 1×10 6cells/mL 小规模转 染时，如需大规模转染细胞密度要到达 2-3×10 6cellsml/mL。以 293F 细胞 于 100mL 培养瓶（溶液体积占瓶体积的 1/5）操作体系举例如下：

（一）转染前准备

1) HEK293F 细胞传代接种于 20mL 悬浮细胞生长培养基中(36.5℃，120rpm，5%CO2 )的条 件下培养。当细胞密度到 1X10 6cells/mL，然后旋紧瓶口放入摇床继续培养，2~4 小时 后可以进行转染。

（二）转染过程

2) 用 1mlOptiPRO™SFM(无血清培养基)稀释适量的 DNA，使 DNA 终浓度为 1ug/ml（DNA/总 培养体积）。混匀并静置 5min。

3) 用1mlOptiPRO™SFM(无血清培养基)稀释适当比例的Jinpan-PRO  GMP，混匀并静置 10min。

（78BioPEI：DNA 参考比例范围，可参考上述贴壁细胞Jinpan-PRO  GMP和 DNA 优化方案优化）。

4) 将Jinpan-PRO  GMP转染试剂加入到稀释的质粒中轻轻混匀，室温孵育 30 分钟。

5) 将Jinpan-PRO  GMP转染复合物逐滴加入到细胞培养液中，摇匀后旋紧瓶口放回摇床 （36.5℃，5%CO2，120rpm）。

6) 基因表达可在 24-72 小时后检测，具体时间取决于细胞系和转基因.

小贴士:在悬浮培养中，单个细胞的转染效率要高于聚集在一起的细胞，需要优化适合单细胞的 生长条件。 方形瓶应经过两个连续的干燥循环高压灭菌（每个 45 分钟，干燥 15 分钟） 盖子应尽可能松，不得脱落。应该让它们冷却拧紧盖子前，将其全部放入层流罩中。如 果瓶子向内塌陷，细胞将无法正常生长。 如果要获得更多的蛋白产量，有参考文献表明转染后 24 小时，可以适当稀释细胞，稀 释比例参考范围（1:2—1:5）之间，可以增加蛋白产量，稀释效应与最佳稀释比率应根 据经验确定, 可以把 DNA 和Jinpan-PRO  GMP 转染试剂直接加入到细胞悬液中进行转染，但必须经过上述 特定流程的 DNA 和转染试剂的比例和用量的相应优化。

注意事项

1. 不同质粒种类以及大小会影响转染效率，可如较大片段插入质粒可能转染效率低，可根据实际实验需要调整，如适当增加转染质粒总量等。

2. 细胞状态及代数会较大程度影响转染。刚复苏细胞需传代2-3次以上，待细胞生长稳定后做转染实验。为保证实验稳定性，转染细胞尽量选择20代以内进行实验。

3. 对于贴壁性低的细胞系，可用明胶或鼠尾胶铺板，增加细胞与培养皿之间的粘附性。

4. 初次使用应优化DNA浓度和 Jinpan-PRO GMP试剂量以得到最大的转染效率。 DNA 和转染试剂的比例， 通常推荐是1:2-1:3，通过调整DNA/Jinpan-PRO  GMP转染试剂比例优化转染效率，调整范围DNA（μg）:Jinpan-PRO  GMP（μL） 比值在1：0.5-1：5。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


线性聚乙烯亚胺PEI MW40000 说明书

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线性聚乙烯亚胺PEI MW40000说明书

 

 

产品描述

Jinpan 线性聚乙烯亚胺PEI MW40000 转染试剂系列是基于聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）的产品，因其较高的转染效果，已广泛应用于AAV，LV和重组蛋白等工业化生产。

聚乙烯亚胺是一种具有较高阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔两个碳原子，即每第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”体(proton sponge)，因此，非常容易结合带负电荷的核酸分子，形成带正电荷的复合物颗粒，该颗粒与细胞表面阴离子结合，很容易通过内吞作用进入细胞；并且可抵御溶酶体的降解作用，从而提高核酸分子的表达水平。

相关货号：

货号 规格 价格
78PEI40000-100mg 100mg ￥700.00
78PEI40000-1g 1g ￥3,000.00
78PEI40000-5g 5g ￥11,000.00

 

基本信息

CAS 49553-93-7

分子式 (C2H5N)n . xHCl

分子量 40,000 (~22,000 free base)

熔点 73-75℃

溶解性 溶于冷水

不溶于 常用有机溶剂（乙醇、丙酮、四氢呋喃）

形式 白色固体粉末

生物毒性 未知

安全防护 手套，护目镜，口罩

存储 粉末至少可以保存一年， PEI内含自由氨基，建议开封后4℃干燥保存，减缓氧化过程。

运输 常温运输

特点 大量实验数据反馈，细胞通用性好，有非常好的转染效果，尤其对293，CHO细胞系有特别显著的转染效果。

配置方法

转染操作流程：(贴壁细胞转染方法)

1. 接种细胞： 转染前一天，用胶原酶（Jinpan Cat#78CL10002)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔加入的细胞量参考下图表1，一般18-24小时（sf9细胞为3-4小时）后转染。转染时细胞汇合度应至少达到 70~80%以上。转染前更换为含5%血清的生长培养基。

2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。用 Opti-MEM ITM或其他适合的无血清培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。 （稀释PEI和DNA的体积为培养体积的1/10-1/20, DNA浓度为1ug/ml）

3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。转染4-6小时（sf9细胞为2小时 )后，更换为生长培养基。

4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后最快 7 h 即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合的检测时间。

5. 转染 24 h 后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释 10 倍 以上），在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可 筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

转染操作流程：(悬浮细胞转染方法)

1. 转染前准备：悬浮细胞传代接种于适量含悬浮细胞生长培养基中，合适条件下培养。根据培养瓶大小调整细胞密度（例100mL培养瓶，1X10 6 cells/mL），然后旋紧瓶口放入摇床继续培养，2~4小时后可以进行转染。

2. 准备 DNA-PEI 复合物：DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他适合的无血清培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。

3. 转染细胞：将PEI-DNA转染复合物逐滴加入到细胞培养液中，摇匀后旋紧瓶口放回摇床合适培养条件下培养至可以分析检测。

4. 孵育细胞和分析结果：转染后一般24-72h即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合的检测时间。

5. 如果要获得更多的蛋白产量，有文献表明转染后24小时，可以适当稀释细胞，稀释比例参考范围（1:2—1:5）之间，可以增加蛋白产量，稀释效应与最佳稀释比率应根据经验确定。

 

 

产品背景

        Jinpan 生产的78Bio PEI是一种优化的线性阳离子聚合物转染试剂,分子量分别为 25000 和 40000，78BioPEI40000 相比 25000 转染效率高，但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表达系统中，相比于市面上的脂质体 78BioPEI 都表现出高的蛋白表达量（无 论是 96 孔板还是 100L 的细胞反应器），以及更小的细胞毒性、更高的转染效和更高的可 重复性，并且十分经济的高性价比转染试剂。产品具有以下特点：

1.转染效率高，细胞毒性低；  蛋白表达量高；

2.节约成本：Jinpan 78 PEI转染试剂 ，进口品质，亲民价格，至少能够降 40% 的转染试剂总成本；

3.适用于 HEK293 等真核细胞的转染；

4.适用于贴壁细胞和悬浮细胞的转染；

5.适用于有血清和无血清的转染条件；

6. 无机试剂，无动物源成分；

7. 产品稳定，质控严格；

8. 工艺流程适用范围广，容易优化 适合小规模培养板，培养瓶到大规模的生物反应器。

产品反馈

 

注意事项

  1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

  2. 本产品主要用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

  3.加热或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。当然酸可能不用加那么多，详细用量可试加一点 ,搅拌看看，足够溶解就行，不一定需要加到 pH 那么低。 

  4.一定要溶解充分，溶解不充分会影响后续的转染效率.

  5.冷冻后可能会影响其后续转染效果。

 

  特别提醒：初次使用 78PEI 进行不同基因转染时应先做预试，优化出适合自己实验的， 最佳 PEI 和 DNA 的比例，通常筛选范围在 1:1 到 5:1 之间，如果之前用过Polysciences品牌的 PEI，用 78BioPEI 时应适当降低使用浓度。

 

线性聚乙烯亚胺PEI MW40000说明书

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线性聚乙烯亚胺PEI MW40000说明书


产品描述：

Jinpan 线性聚乙烯亚胺PEI MW25000 转染试剂系列是基于聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）的产品，因其较高的转染效果，已广泛应用于AAV，LV和重组蛋白等工业化生产。

聚乙烯亚胺是一种具有较高阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔两个碳原子，即每第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”体(proton sponge)，因此，非常容易结合带负电荷的核酸分子，形成带正电荷的复合物颗粒，该颗粒与细胞表面阴离子结合，很容易通过内吞作用进入细胞；并且可抵御溶酶体的降解作用，从而提高核酸分子的表达水平。


基本信息：

CAS： 9002-98-6

分子式： (CH2CH2NH)n

分子量： 25,000

熔点： 73-75℃

溶解性： 溶于热水，低pH值的冷水，甲醇和乙醇；

形式： 白色固体

生物毒性： 未知

安全防护 手套及口罩

存储 PEI 内含自由氨基，建议开封后 4℃干燥保存，减缓氧化过程。

效期：3年 

运输： 常温

特点：大量实验数据反馈，细胞通用性好，有非常好的转染效果，尤其对293，CHO细胞系有特别显著的转染效果。


配置方法：

转染操作流程：(贴壁细胞转染方法)

    1. 接种细胞： 转染前一天，用胶原酶（Jinpan Cat#78CL10002)消化细 胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置 入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。

    2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升 至室温。依据表 1 所示，用 Opti-MEM ITM或其他适合的无蛋白培 养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线 性 PEI 转染试剂(这个需要客户自行摸索配比，每一批转染试剂和每一批 DNA 比例可 能会稍有不同）。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的线性 PEI 转染 试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI 复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。

    3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI 复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在 无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴 DNA-PEI 复合 物。转染 3 h 后，添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。

    4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2 培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染 后最快 7 h 即可检测到转入基因的表达。

    5. 转染 24 h 后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释 10 倍 以上），在 CO2 培养箱中 37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可 筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

转染操作流程：(悬浮细胞转染方法)

    1. 转染前准备：悬浮细胞传代接种于适量含悬浮细胞生长培养基中，合适条件下培养。根据培养瓶大小调整细胞密度（例100mL培养瓶，1X10 6 cells/mL），然后旋紧瓶口放入摇床继续培养，2~4小时后可以进行转染。

    2. 准备 DNA-PEI 复合物：DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他适合的无血清培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。

    3. 转染细胞：将PEI-DNA转染复合物逐滴加入到细胞培养液中，摇匀后旋紧瓶口放回摇床合适培养条件下培养至可以分析检测。

    4. 孵育细胞和分析结果：转染后一般24-72h即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合检测时间。

    5. 如果要获得更多的蛋白产量，有文献表明转染后24小时，可以适当稀释细胞，稀释比例参考范围（1:1—1:5）之间，可以增加蛋白产量，稀释效应与最佳稀释比率应根据经验确定。

 


产品背景：

Jinpan 生产的78Bio PEI是一种优化的线性阳离子聚合物转染试剂,分子量分别为 25000 和 40000，78BioPEI40000 相比 25000 转染效率高，但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表达系统中，相比于市面上的脂质体 78BioPEI 都表现出高的蛋白表达量（无 论是 96 孔板还是 100L 的细胞反应器），以及更小的细胞毒性、更高的转染效和更高的可 重复性，并且十分经济的高性价比转染试剂。产品具有以下特点：

1.转染效率高，细胞毒性低；  蛋白表达量高；

2.节约成本：Jinpan 78 PEI转染试剂 ，进口品质，亲民价格，至少能够降 40% 的转染试剂总成本；

3.适用于 HEK293 等真核细胞的转染；

4.适用于贴壁细胞和悬浮细胞的转染；

5.适用于有血清和无血清的转染条件；

6. 无机试剂，无动物源成分；

7. 产品稳定，质控严格；

8. 工艺流程适用范围广，容易优化 适合小规模培养板，培养瓶到大规模的生物反应器。

产品反馈：

注意事项：

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 本产品主要用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

3.加热或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。当然酸可能不用加那么多，详细用量可试加一点 ,搅拌看看，足够溶解就行，不一定需要加到 pH 那么低。 

4.一定要溶解充分，溶解不充分会影响后续的转染效率.

5.冷冻后可能会影响其后续转染效果。


特别提醒：初次使用 78PEI 进行不同基因转染时应先做预试，优化出适合自己实验的， 最佳 PEI 和 DNA 的比例，通常筛选范围在 1:1 到 5:1 之间，如果之前用过Polysciences品牌的 PEI，我们的活性是其1.5倍左右，用 78BioPEI 时应适当降低使用浓度。

GMP级PEI 大量现货

发表于由

 

GMP级PEI 大量现货

Jinpan Polyethyleneimine PEI PRO(GMP)

订购信息

货号

产品名称

规格

78EF10003–5Ml

78EF10003-1L

Jinpan Polyethyleneimine PEI PRO(GMP)

5Ml

1L

 


储存温度：2-4℃保存⼀年。（避免冷冻）

产品描述

Jinpan Polyethyleneimine PEI PRO(GMP)是GMP级别转染试剂，本制品利BIOHUB公司生产的线性阳离子聚合物,按照符合GMP认证管理体系下，采用药用规格原辅料生产，所用起始材料及所需化学品和配制过程均在无菌环境中操作进行，以确保制造过程中每个步骤的特性、效力、纯度和安全性的一致性 。并严格控制重金属残留、细菌内毒素残留等，生产工艺符合 GMP 规范的产品生产与质量管理规程，保障生产过程及所有原辅料可追溯。

 

1.PH值检测通过中国药典 2020版第四部 pH 值测定法(通则 0631)

2.检测遵循《人用基因治疗总论–中国药典 2020》国家药典委。

3.检测遵循USP Chapter <1043>, Ancillary Materials for Cell, Gene, and Tissue-Engineered 4.Products 用于细胞治疗，基因治疗和组织工程产品中的辅料。

5.细菌内毒素检测符合中国药典2015版四部通则（1143）方法2光度测试法（动态浊度法）

6.重金属残留检测符合国药典 2020版第四部重金属检查法(通则 0821)

7.支原体检测 使用支原体检测试剂盒

产品特点

    Jinpan-PRO GMP在 HEK293和CHO大多数表达系统中,Jinpan-PRO GMP 都能提供稳定的高表 达（96 孔板至 100L 生物反应器）。现在每年有更多的研究人员和公司选择使用 Jinpan-PRO GMP 进行细胞转染.。

1.GMP级别定制监管，支持并满足合规要求。

2.不含动物源性成分。

3.严格遵循以下规范生产 1. ISO 9001:2015, certified facility。

4.严格按照《GMP 附录–细胞治疗产品》国家药品监督管理局。

5.从工艺开发到临床试验和商业化的无缝过渡生产细胞系（HEK-293 和衍生物、VERO 等的*高病毒产量。

6.超高的性价比

 

 

质量信息表

 

操作方法参考

 

一、贴壁细胞转染 以 6 孔板转染 293T 细胞为例：

（一）转染前准备

1) 转染前一天：用胶原酶 （WORTHINGTONG 公司 LS004196)消 化细胞并计数（不建议用胰酶）。 按照每孔2×10 6的细胞量接种293T至6孔板(每孔加入2ml新鲜DMEM:F12+5%FBS *培养基和 1ml 的细胞悬液)置于 37°C,5%CO2培养箱培24h。

2) 24h 后,移除之前培养基，每孔加入 2ml 新鲜的 DMEM:F12+5%FBS。

注意：确保 293T 细胞生长状态良好传代 不超过15代。

（二）转染过程

3) 第一天：显微镜下检查细胞汇合度，当细胞达到 70%到 80%的汇合度时，开始准备转染。

4) 对于每孔细胞，用 100µl 无血清培养基（如 OPTI-MEMⅠ培养基）稀释 DNA 使 DNA 终浓 度为 1ug/ml（DNA/总培养体积）。

5) 对于每孔细胞，用100μ无血清培养基（如 OPTI-MEMⅠ培养基）稀释适当比例的适量 Jinpan-PRO GMP 。DNA:Jinpan-PRO GMP  的比例要依据自己实验摸索最适比例。

6) 将稀释的 Jinpan-PRO  GMP转染试剂加入到稀释的质粒中（总体积 200µL）轻轻混匀， 室温孵育30分钟。

7) 小心地将 Jinpan-PRO  GMP复合物滴加到细胞培养板每个孔中，轻轻摇动培养板混匀。注 意加入混合液时轻轻沿着孔板边缘滴入，而不是在细胞的顶部以免破坏细胞的粘附性。

8) 将培养板放入 37°C，5%CO2培养箱培养中培养 24h。

（三）观察转染结果 9) 第二天：在荧光显微镜下观察细胞转染效率，通常超过 80%的 293T 细胞在转染后的 24h 可以观察到绿色荧光。 小贴士 :建议进行不同基因转染时应对 Jinpan-PRO GMP 和 DNA 的比例进行优化，以达到最适比例， 通常筛选范围在 1:1 到 1:3 之间。如果之前用过进口品牌的 PEI，用Jinpan-PRO  GMP时应适当 降低使用浓度。

通常情况下，分别准备Jinpan-PRO GMP 和DNA转染溶液时其体积一般是转染前每孔细胞培 养液体积总量的 1/10-1/20，如细胞培养液体积为 3ml，则稀释Jinpan-PRO  GMPI及 DNA 的体积为150ul。质粒 DNA 的浓度通常为 1ug/ml（DNA 质量/细胞培养总体积）[1][4]。 不同质粒种类以及大小会影响转染效率，如较大片段插入质粒可能转染效率低，可根据 实际实验需要调整，如适当增加转染质粒总量等。 ØHEK293 GnTI 细胞重悬浮可用枪头或移液管反复吹打，但 CHO-S 细胞的粘附性比较强 重悬浮时需要借助细胞刮刀。 一般建议用胶原酶消化细胞，如果表达的是膜蛋白，胰酶消化细胞可能会降低蛋白表达， 建议用胶原酶消化细胞，我们推荐(LS004196WORTHINGTONG)的胶原酶。 对于贴壁性低的细胞系，可用明胶或鼠尾胶铺板，增加细胞与培养皿之间的粘附性。 一旦确定了细胞类型、培养基和78BioPEI GMP与 DNA 的最佳比例，就可以在转染后 24 至 96 小时内多次观察转染效率，以优化最大表达量时间点。

二、悬浮细胞转染 离心对数期生长的细胞用新鲜的培养基重悬浮使细胞密度达到 1×10 6cells/mL 小规模转 染时，如需大规模转染细胞密度要到达 2-3×10 6cellsml/mL，可参考文献[4]。以 293F 细胞 于 100mL 培养瓶（溶液体积占瓶体积的 1/5）操作体系举例如下：

（一）转染前准备

 1) HEK293F 细胞传代接种于 20mL 悬浮细胞生长培养基中(36.5℃，120rpm，5%CO2 )的条 件下培养。当细胞密度到 1X10 6cells/mL，然后旋紧瓶口放入摇床继续培养，2~4 小时 后可以进行转染。

（二）转染过程

 2) 用 1mlOptiPRO™SFM(无血清培养基)稀释适量的 DNA，使 DNA 终浓度为 1ug/ml（DNA/总 培养体积）。混匀并静置 5min。

 3) 用1mlOptiPRO™SFM(无血清培养基)稀释适当比例的Jinpan-PRO GMP，混匀并静置 10min。

（78BioPEI：DNA 参考比例范围，可参考上述贴壁细胞Jinpan-PRO GMP和 DNA 优化方案优化）。

 4) 将Jinpan-PRO GMP转染试剂加入到稀释的质粒中轻轻混匀，室温孵育 30 分钟。

 5) 将Jinpan-PRO GMP转染复合物逐滴加入到细胞培养液中，摇匀后旋紧瓶口放回摇床 （36.5℃，5%CO2,120rpm）。

 6) 基因表达可在 24-72 小时后检测，具体时间取决于细胞系和转基因.

 

小贴士

在悬浮培养中，单个细胞的转染效率要高于聚集在一起的细胞，需要优化适合单细胞的 生长条件。 方形瓶应经过两个连续的干燥循环高压灭菌（每个 45 分钟，干燥 15 分钟） 盖子应尽可能松，不得脱落。应该让它们冷却拧紧盖子前，将其*放入层流罩中。如果瓶子向内塌陷，细胞将无法正常生长。 如果要获得更多的蛋白产量，有参考文献表明转染后 24 小时，可以适当稀释细胞，稀释比例参考范围（1:2—1:5）之间，可以增加蛋白产量，稀释效应与最佳稀释比率应根 据经验确定, 可以把 DNA 和Jinpan-PRO  GMP 转染试剂直接加入到细胞悬液中进行转染，但必须经过上述 特定流程的 DNA 和转染试剂的比例和用量的相应优化。

注意事项

1.不同质粒种类以及大小会影响转染效率，可如较大片段插入质粒可能转染效率低，可根据实际实验需要调整，如适当增加转染质粒总量等。

2.细胞状态及代数会较大程度影响转染。刚复苏细胞需传代2-3次以上，待细胞生长稳定后做转染实验。为保证实验稳定性，转染细胞尽量选择20代以内进行实验。

3.对于贴壁性低的细胞系，可用明胶或鼠尾胶铺板，增加细胞与培养皿之间的粘附性。

初次使用应优化DNA浓度和 Jinpan-PRO GMP试剂量以得到最大的转染效率。

4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

 

PEI Transfection

发表于由

PEI Transfection

 

 

Transfection:

 

  1. Split 293T cells one day before transfection in DMEM/10% FBS medium:
    1. 6 well dish: 0.5×106 cells
    2. 10cm dish: 4.0×106 cells
    3. 15cm dish: 9.0×106 cells

 

  1. Prior to transfection bring all reagents to room temperature.

 

  1. In a sterile tube dilute total plasmid DNA (ug) in serum-free DMEM w/o phenol red (volume of media is 10% of final volume in culture vessel). Use transgene: viral packaging (psPAX2):viral envelope (pMD2G) constructs at 4:2:1 DNA ratio

 

  1. 6 well dish: 200ul + 3 ug of total DNA
  2. 10cm dish: 1mL + 7-8 ug of total DNA
  3. 15cm dish: 2mL +  11-12 ug of total DNA

 

  1. Add PEI (1ug/uL) to the diluted DNA. Mix immediay by vortexing or pipeting. The volume of PEI used is based on a 3:1 ratio of PEI (ug):total DNA (ug).

 

  1. 6 well dish: 9ul of PEI(1ug/ul) = 9ug
  2. 10cm dish: 21ul of PEI (1ug/ul) = 21ug
  3. 15cm dish: 33ul of PEI(1ug/ul) = 33ug

 

  1. Incubate 15 minutes at RT
  2. Add DNA/PEI mixture to cells

 

  1. Harvest transfected cells and/or viral supernatant at 48 hours post-transfection

 

 

Reagents:

 

PEI (1ug/ul) – PEI is Polyethylenimine 25kD linear from Polysciences (cat# 23966-2). To make a stock solution:

  • Dissolve PEI in endotoxin-free dH2O that has been heated to ~80°C.
  • Let cool to room temperature.
  • Neutralize to pH 7.0, filter sterilize (0.22um), aliquot and store at -20°C; a working stock can be kept at 4°C.
  • 货号 品名 价格￥ 规格 品牌 备注
    23966-2 POLYETHYLENIMINE LINEAR 2864 2 g polysciences 大量现货
    24765-2 POLYETHYLENEIMINE 'MAX' 3184 2 g polysciences 转染效率高30% 更好溶解
    78002qf01 线性PEI转染液 200 1ml jinpanbio 23966配制
    78002qf02 线性PEI转染液 600 50ml jinpanbio 23966配制
    78002qf03 线性PEI转染液 1800 500ml jinpanbio 23966配制
    78003qf01 线性PEI转染液 200 1ml jinpanbio 24765配制
    78003qf02 线性PEI转染液 700 50ml jinpanbio 24765配制
    78003qf03 线性PEI转染液 2200 500ml jinpanbio 24765配制
    78004qf01 POLYETHYLENIMINE LINEAR 1432 1g jinpanbio 23966分装
    78005qf01 POLYETHYLENEIMINE 'MAX'(40 000M.W.* 1592 1g jinpanbio 24765分装