Fast Pfu DNA 聚合酶


Fast Pfu DNA 聚合酶

简要描述:Fast Pfu DNA 聚合酶

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E031-01A 250U 含dNTP 360元
E031-01B A包装×5 含dNTP 1620元
E031-02A 250U 不含dNTP  310元
E031-02B A包装×5 不含dNTP  1395元

 

· 制品内容 (250 U)

Fast Pfu DNA聚合酶(5 U/μl) 50 μl
dNTP 混合液 (各10 mM) 250 μl
5 × Fast Pfu Buffer with Mg2+ 2000 μl

 

· 制品说明
Pfu DNA聚合酶为zui常用的高保真DNA聚合酶,在需高保真的PCR反应中广范使用,然而Pfu酶扩增灵敏度不高,延伸速度缓慢(0.5kb/分钟)给众多的使用者带来了不便。针对普通Pfu酶的以上缺点,SinoBio采用分子进化技术对普通Pfu酶进行改造,制备的新型聚合酶Fast Pfu酶具有快速、高灵敏度、抗干扰能力强等特点,是新一代的高保真DNA聚合酶。使用Fast Pfu能获得更理想的扩增结果,并大幅度缩短扩增反应时间。

· 用 途
用于要求保真度比较高的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等(参见 SinoBio 实验方案)。

· 产品特点
高保真:具有同Pfu酶相同的保真度,为普通Taq酶的10倍。
快速:Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍,72℃保温30秒可延伸1kb以上。
高效:以λDNA为模板,扩增长度可达12kb,能高效扩增≤6kb片段;对于人基因组DNA等复杂模板,能有效扩增出3kb特定基因片段。
*配方的5×Buffer:使PCR扩增反应更加稳定、灵敏、高效。

· 质量保证
经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。

· 使用建议

Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端,无3’端”A”突出, 其PCR产物的克隆有两种方案:
1.PCR前引物进行5’端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中(参见 Sinobio 实验方案)。
2.将产物3’末端加A后再与T-Vector连接(参见 SinoBio 实验方案)。

*由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3′端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为 20-30碱基。另外为了减少由3′-5′外切酶活性引起的引物降解, 尽量在冰上配置反应体系,并zui后加入Fast Pfu酶。。

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· 其他说明

 

Pfu DNA 聚合酶


Pfu DNA 聚合酶

简要描述:Pfu DNA 聚合酶

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目录号 规格 备注 价格 说明书下载
E002-01A 250U 含dNTP 230元
E002-01B A包装×5 含dNTP 1035元
E002-02A 250U 不含dNTP  180元
E002-02B A包装×5 不含dNTP  810元
 

· Pfu DNA 聚合酶内容 (250 U)

Pfu DNA聚合酶(5 U/μl) 50 μl
dNTP 混合液 (各10 mM) 250 μl
10 × Pfu Buffer with Mg2+ 1 ml

 

· Pfu DNA 聚合酶说明
本酶为Pyrococcus furiosus中分离的pfu DNA pol 基因在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Pfu DNA聚合酶具有3’-5’外切酶(校正)活性,当聚合反应发生碱基错配时,聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。Pfu DNA聚合酶为使用范围zui广的高保真DNA聚合酶,其错误率仅为1.3×10-6,推荐Pfu DNA聚合酶用于需高保真的PCR反应。

· 用途
用于要求保真度比较高的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等(参见 Sinobio 实验方案)。

· 产品特点
高保真:Pfu DNA聚合酶是使用zui广泛的高保真酶,其保真度为普通Taq酶的10倍。
灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段(图例一)。
快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配置。
便利:10μl, 25μl 或50μl体系全部适用。

· 质量保证
经多次柱纯化,SDS-PAGE检测纯度大于95%;
PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。

· 使用建议

Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端,无3’端”A”突出,其PCR产物的克隆有两种方案。
1. PCR前引物进行5’端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中(参见 Sinobio实验方案)。
2. 将产物3’末端加A后再与T-Vector连接(参见 Sinobio 实验方案)。
3. 由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3′端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20-30碱基。另外为了减少由3′-5′外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配置反应体系,并zui后加入Pfu酶。

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· 其他说明

2×Pfu MasterMix(Dye),货号-规格:CW0686M-5ml

2×Pfu MasterMix(Dye),货号-规格:CW0686M-5ml

市场价: 358.0
价格:
358.00
品牌: 康为世纪
规格: 5ml
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参考文献


2×Pfu MasterMix(Dye)

产品货号:CW0686M

产品规格:5ml

2×Pfu MasterMix(Dye)

  本品为Pfu DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系,浓度为2×。Pfu DNA Polymerase具有5′-3′ DNA聚合酶活性和3′-5′外切酶活性,因此在DNA扩增过程中具备纠错能力。与Taq DNA Polymerase相比具有高保真性(Taq酶的6-8倍)和更好的热稳定性。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷,可最大限度地减少人为误差和污染。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定,重复性好。本产品已加入染料(蓝色),反应结束后可直接进行电泳检测。本产品所含的Pfu DNA聚合酶具有错配率低,耐高温的特点,适用于基因克隆、基因定点突变、SNP和末端补平等反应。


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2×Pfu PCR MasterMix(含染料)

2×Pfu PCR MasterMix(含染料)

¥65.00

货号:BL111A

规格:1ml

品牌:Jinpan

2× pfu PCR Master Mix含染料

产品简介:

本产品包含pfu DNA聚合酶、dNTPsMg2+、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂,浓度为。使用时,只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应,可最大限度的减少人为误差,具有快速简便、稳定性好等优点。用于高保真的DNA片段的扩增。使用该产品得到的PCR扩增产物为平滑末端,不可以直接用于TA克隆,要通过平滑末端克隆法进行克隆。

质量保证:

λ DNA为模板,可以很好扩增5kbDNA片段;以水稻基因组为模板,可以很好扩增3.2kbDNA片段。


注意事项:

1、 需要溶解完全后使用,防止离子浓度不均匀。

2、 应根据实验目的选择合适循环数,循环数过少会造成扩增量不足;循环数过多,扩增量增加,但突变率也会增加,并造成非特异性扩增。

3、 根据引物 Tm 值设置合适退火温度 ,退火温度过低,会造成非特异性扩增;过高可能扩增不到。

4、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件:

-20℃保存一年有效4℃稳定贮存3个月。经常使用时,一旦融化后请4℃贮存,尽量避免反复冻融。

货号 BL111A
规格 1ml
品牌 Jinpan
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