Cytoskeleton PHDG1-A说明书

 

Cytoskeleton,Inc。很高兴为药物筛选,信号转导和细胞骨架研究提供广泛的试剂盒和产品。我们专注于生产纯化蛋白质和易于使用的试剂盒,以研究生物化学和细胞过程。我们的试剂盒可用于少量样品,用于基础研究或小屏幕(Biochem Kits™),也可用于大屏幕的高通量样品CytoDYNAMIX Screens™)。

除了我们现有的产品,我们还在产品线中为微管,微管蛋白,运动蛋白,小G蛋白效应物,GAP,GEF和其他几种蛋白提供药物筛选服务。

Acti-stain 488 phalloidin  Acti-stain 488鬼笔环肽

 

(Cat. # PHDG1-A)   300 Slides

产品用途包括

· 固定组织切片和组织培养细胞制剂中肌动蛋白丝的荧光染色。  注意:与许多肌动蛋白抗体不同,Acti-stain™488鬼笔环肽仅与F-肌动蛋白结合,导致低背景荧光。此外,通过Acti染色结合F-肌动蛋白在物种之间没有明显差异。

· 体外稳定荧光肌动蛋白丝的制备。

 

肌动蛋白染色在确定活细胞和固定细胞中细胞骨架的结构和功能方面非常有用。肌动蛋白细胞骨架在活细胞中是非常动态和不稳定的结构,但是在探测或染色肌动蛋白结构之前可以用多聚甲醛固定。 

 

材料

鬼笔环肽是来自蘑菇伞形毒蕈的七氨基酸肽毒素,其特异性地并且以高亲和力(Kd 20nM)结合至肌动蛋白的聚合形式(F-肌动蛋白)。鬼笔环肽将肌动蛋白聚合的临界浓度降低至小于1μg/ ml,从而充当聚合增强剂。鬼笔环肽已经用专有的绿色荧光染料标记,使其可用于染色组织培养细胞和组织切片中的肌动蛋白丝(1,参见图1)和无细胞制剂。Acti-stain™488鬼笔环肽标记的肌动蛋白丝保留了未标记肌动蛋白的许多功能特征,包括它们与肌球蛋白相互作用的能力。Actin-stain TM 488鬼笔环肽以橙色固体形式提供。 

注意:鬼笔环肽是有毒的,必须小心处理(LD50人= 2mg / Kg)。

 

 

示例结果和规格

 

 

图1.在瑞士3T3细胞中用Acti-stain TM 488染色的肌动蛋白应力纤维。

 

图2. Acti-stain™鬼笔环肽的发射和激发扫描

 

 

 

 

 

 

 

用抗 – 纽蛋白(红色),Dapi(蓝色细胞核)和F-肌动蛋白染色的Swiss 3T3细胞用Acti-stain TM 488(绿色F-肌动蛋白,Cat。#PHDG1)染色。

 

Acti-stain TM 488的吸光度和荧光扫描。将标记的鬼笔环肽稀释到甲醇中,并分别在350-750和500-750nm之间扫描其吸光度和激发光谱。吸光度峰值在500nm处,荧光在550nm处。

 

Acti-stain鬼笔环肽是可用的明显的鬼笔环肽。表1描述了它们对F-肌动蛋白的亮度,光稳定性,背景和亲和力常数。将这些性能特征与其他荧光鬼笔环肽进行比较,您将看到使用Acti-stain™来满足肌动蛋白染色要求的优势。

表1.荧光鬼笔环肽的生物化学特征

共轭

货号

波长(Ex / Em)

亮度(AFU *)

光漂白的稳定性(以秒为单位的半衰期**)

背景 (总AFU在100nM时的百分比**)

亲和力(Kd,纳摩尔)

荧光毒伞素

na

485/535 FITC滤波器组

432

6

22

72 +/- 12

Acti-stain™488

PHDG1

485/535 FITC滤波器组

832

57

55 +/- 8

Acti-stain™535

PHDR1

535/585 TRITC滤波器组

430

27

12

36 +/- 7

Acti-stain™555

PHDH1

535/585 TRITC滤波器组

551

46

16

63 +/- 8

Acti-stain™670

PHDN1

640/680 Cy5滤光片组

332

8

18

50 +/- 12

* = AFU通过定量细胞成像测量。** =在没有抗褪色的情况下在染色的Swiss 3T3细胞中测量。

 

引用:

oitbak等,2011。微小RNA在神经干细胞支持内皮形态发生中的作用。血管细胞v 3,p 25。

 

Yuan et al。,2012。使用同量异位标签对胺代谢物进行亚秒级绝dui定量,以发现哺乳动物细胞中的通路活化。肛门。化学第84页,第2892-2899页。

 

问题1:我可以使用荧光标记的鬼笔环肽染色活细胞中的F-肌动蛋白吗?

答案1:  不幸的是,不,鬼笔环肽不能用于在活细胞中染色F-肌动蛋白。鬼笔环肽用于在固定细胞中染色F-肌动蛋白。荧光鬼笔环肽仅与F-肌动蛋白的天然四级结构结合,提供低背景。鬼笔环肽结合的正确固定条件是在PBS中的3.7%(v / v)多聚甲醛10分钟,因为它保留了鬼笔环肽的高亲和力结合所必需的季铵蛋白结构。甲醇固定破坏天然构象,因此不适合用鬼笔环肽染色F-肌动蛋白。为了监测活细胞中的肌动蛋白动力学,建议微量注射罗丹明标记的肌动蛋白(Cat。#APHR或AR05)。有关更多信息,请参阅这些数据表。

 

问题2:哪种荧光标记的鬼笔环肽稳定/亮?

答案2:  Acti-stains中亮和稳定的是Acti-stain 488(绿色荧光; Cat。#PHDG1)。有关我们所有Acti-stains的更多信息,请参阅下表。 

共轭

猫。#

波长(Ex / EM)

亮度(AFU)

光漂白的稳定性*(1/2秒寿命)

背景(总AFU在100 nM时的百分比)

Acti-stain™488

PHDG1

535分之485

832

57

Acti-stain™535

PHDR1

585分之535

430

27

12

Acti-stain™555

PHDH1

585分之535

551

46

16

Acti-stain™670

PHDN1

六百八十零分之六百四十

332

8

18

* =在没有抗褪色的情况下测量。

 

 

货号

品名

规格

品牌

BK165-S

Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK165

Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

BK163-S

Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK163

Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

BK160-S

Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK160

Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

BK162-S

Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK162

Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

BK161-S

Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK161

Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

AAC04-Beads

Acetyl-Lysine Affinity Beads

ea

cytoskeleton

APY03-Beads

Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads

ea

cytoskeleton

ASM11-Beads

SUMOylation 1 Affinity Beads

ea

cytoskeleton

ASM24-Beads

SUMOylation 2/3 Affinity Beads

ea

cytoskeleton

UBA01-Beads

Ubiquitination Affinity Beads

ea

cytoskeleton

CIG02-Beads

Acetyl-Lysine Control Beads

ea

cytoskeleton

CIG03-Beads

SUMO1 IP Control Beads

ea

cytoskeleton

CIG01-Beads

IgG Control Beads

ea

cytoskeleton

CUB02-Beads

Ubiquitination Control Beads

ea

cytoskeleton

BLR01

BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit

ea

cytoskeleton

BLR02

BlastR™ Rapid Filtration Kit

ea

cytoskeleton

AAC02

Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1)

ea

cytoskeleton

AAC03

Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

ea

cytoskeleton

AAC03-HRP

Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

ea

cytoskeleton

AAC01

Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20)

ea

cytoskeleton

APY03

Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

ea

cytoskeleton

APY03-HRP

Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

ea

cytoskeleton

ASM01

SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16)

ea

cytoskeleton

ASM24

SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2)

ea

cytoskeleton

ASM23

SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

ea

cytoskeleton

ASM23-HRP

SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

ea

cytoskeleton

AUB01

Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal

ea

cytoskeleton

AUB01-HRP

Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal

ea

cytoskeleton

PHDG1

Acti-stain 488 phalloidin

ea

cytoskeleton

PHDH1

Acti-stain 555 phalloidin

ea

cytoskeleton

PHDN1

Acti-stain 670 phalloidin

ea

cytoskeleton

BK001

Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

ea

cytoskeleton

BK003

Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

ea

cytoskeleton

AKL95

Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AD99

Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle

ea

cytoskeleton

AS99

Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle

ea

cytoskeleton

AKL99

Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AKF99

Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AP05

Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

APHR

Actin protein (rhodamine): human platelet

ea

cytoskeleton

AR05

Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AT01

Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

RP01P

Arp2/3 protein complex: porcine brain

ea

cytoskeleton

CS-TFC01

Cardiac Thin Filament Complex (CTFC)

ea

cytoskeleton

CF01

Cofilin 1 protein: human recombinant

ea

cytoskeleton

HPG6

Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant

ea

cytoskeleton

MH01

Heavy meromyosin protein

ea

cytoskeleton

CS-MH03

Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment)

ea

cytoskeleton

CS-MYS03

Myosin – cardiac S1 fragment

ea

cytoskeleton

CS-MYS04

Myosin – skeletal muscle S1 fragment

ea

cytoskeleton

CS-MYS05

Myosin – smooth muscle S1 fragment

ea

cytoskeleton

MY02

Myosin II protein: rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

MY03

Myosin protein: bovine cardiac muscle

ea

cytoskeleton

PR02

Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant

ea

cytoskeleton

PHDR1

Rhodamine Phalloidin

ea

cytoskeleton

CY-SC001

SiR-Actin Kit

ea

cytoskeleton

CY-SC013

SiR700-Actin Kit

ea

cytoskeleton

VCG03

WASP protein VCA domain: GST tagged: human

ea

cytoskeleton

 

 

 

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