PureBind 血液基因组 DNA 分离试剂盒说明书

 

 

oceannanotech PureBind 血液基因组 DNA 分离试剂盒说明书

PureBind Blood gDNA Isolation Kit 专门设计用于从全血中以高产量和纯度分离基因组 DNA。特殊包被的磁珠可实现高 DNA 结合能力并将来自各种样品的污染降至该试剂盒具有适用于不同检测形式(试管、96 孔形式、自动化)以及各种血样体积(10 μL-10 mL)的灵活性。从全血中获得的 DNA 纯度高(A260/280 ≥ 1.8,A260/230 ≥ 1.4),适用于各种下游应用。该套件与各种商业血液稳定剂管和抗凝剂兼容。

 

oceannanotech B0711

 
 

高分子量基因组 DNA:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 试剂盒从全血中分离出高分子量的高分子量基因组 DNA。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理,并以 100 µL 洗脱。500 纳克纯化的 DNA 在 1% 琼脂糖凝胶/TAE 上与 GeneRuler™1kb Plus 阶梯(Thermo Scientific)一起电泳;最上面的 DNA 梯带是 20,000 bp。

来自全血的高纯度基因组 DNA,不含 RNase:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 试剂盒从全血中分离的高纯度基因组 DNA。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理,并以 100 µL 洗脱。通过分光光度法分析洗脱的DNA以确定纯度比和DNA浓度。

来自全血的无抑制剂基因组 DNA:分离的基因组 DNA 的 SPUD 分析表明不存在共纯化的抑制剂。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理,并以 100 µL 洗脱。如 Analytical Biochemistry, 2006 Apr 15;351(2):308-10 中详述的,对 100 ng 洗脱的 DNA 进行了抑制 SPUD 扩增子扩增的能力分析。观察到的 Cq 与分离的 DNA 模板相对于 SPUD 阳性对照的均匀性表明分离的 DNA 不含 PCR/qPCR 抑制剂。

 

基因组靶标的成功qPCR扩增:对分离的基因组DNA的qPCR分析表明,基因组靶标的成功扩增和检测。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理,并以 100 µL 洗脱。使用 ABI TaqMan™ β-肌动蛋白 qPCR 测定法测定标称 20 ng 洗脱的 DNA(基于 Nanodrop 分析)。标准曲线跨越了 100 – 0.032 ng(27,600 – 8.8 个基因组当量)的人类 DNA。测定效率计算为 102%。

分离的基因组 DNA 的酶促修饰:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 试剂盒对从全血中分离的基因组 DNA 进行限制性消化。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理,并以 100 µL 洗脱。1 µg 纯化的 DNA 在 37°C 下用 BamHI、BglII 和 BamHI+BglII 消化 30 分钟。此后限制性产物在1%琼脂糖凝胶/TAE上电泳1小时。

 

从分离的基因组和线粒体 DNA 进行长距离 PCR 使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 试剂盒对从全血中分离的基因组 DNA 进行长距离 PCR。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理,并以 100 µL 洗脱。使用 TaKaRa LA Taq® 和 (A) 7.3 kb 人葡糖脑苷脂酶片段和 (B) 8.2 kb 线粒体 NADH-泛醌氧化还原酶链 1 (MT-ND1) 片段的引物,通过 PCR 扩增 20 ng 纯化 DNA。 PCR 产物在 1% 琼脂糖凝胶/TAE 上电泳 1 小时。这些高分子量目标的成功 PCR 扩增突出了分离 DNA 的结构完整性和我们的试剂盒分离线粒体 DNA 的能力。

与商业血液稳定剂管的兼容性: 血液基因组 DNA 试剂盒可用于从商业血液稳定剂管中分离不含抑制剂的 gDNA。将捐献者血液抽取到 3 种市售血液稳定产品中,并在室温下储存 4 天。使用标准方案通过 Ocean NanoTech 试剂盒处理来自试管的 350 µL 等分试样。作为稳定过程的一部分,DNA/RNA Shield™ 管也没有使用 Ocean NanoTech 裂解缓冲液进行处理,因为 DNA/RNA Shield™ 裂解细胞。如分析生物化学,2006 年 4 月 15 日;351(2):308-10 中详述的,测定了从每次分离中洗脱的 100 ng DNA 抑制 SPUD 扩增子扩增的能力。观察到的 Cq 与分离的 DNA 模板相对于 SPUD 阳性对照的均匀性表明分离的 DNA 不含 PCR/qPCR 抑制剂。

性能与其他商用产品的对比: Ocean NanoTech的Blood gDNA试剂盒大大优于其他基于磁珠的血液gDNA分离试剂盒。来自同一供体的血液被吸入 K2-EDTA 管中,并使用试剂盒所需的输入血量通过每个试剂盒处理。分离的 DNA 以 100 µL 洗脱,并通过 NanoDrop 分析和 Qubit 分析评估纯度。计算每个试剂盒的总产量(基于 Qubit 测量)和作为血液输入量函数的产量。所有值均来自三个生物学重复。

 

    特征:

    • 无RNA污染。
    • 来自全血的高分子量 gDNA,不需要 RBC 和 WBC 的差异裂解。
    • 分离 > 9 微克 DNA/350μL 输入血样。
    • 与商业稳定剂管(例如 PAXgene Blood DNA 管、BioMatrica DNAgard Blood)兼容。
    • 自动化友好的 KingFisher(Duo、Duo Primer 和 Flex)脚本可用。

目录# 产品 单元尺寸 单价
B0711-096 PureBind血液基因组DNA分离试剂盒 1微米 199.00 美元
B0711-384 PureBind血液基因组DNA分离试剂盒 10纳米 $ 677.00
产品描述 PureBind血液基因组DNA分离试剂盒
应用 从全血中分离核酸