synvolux SP-3004-01使用方法
SAINT – PROTEIN
P R O T E I N D E L I V E R Y S Y S T E M
SAINT蛋白
为使用 SAINT-蛋白（目录号：编号SP-3004-01、SP-3004-02、SP-3004-04）。本方案中的量适用于 24 孔板的单个孔。其他格式请参见本页底部的表 1。P RO TE IN DE LI VE RY SY SS TE M
一般转染方案
1. 准备细胞进行转染。
- 贴壁细胞：转染前 1 天，将细胞接种于 0.5 mL 生长培养基中，使细胞在转染时达到 80% 融合。转染前，立即用不含血清的相同培养基（无血清培养基）替换生长培养基。
- 悬浮细胞：转染当天，在 0.5 mL 无血清培养基中以其大密度的约 80% 铺板细胞。
2. 使 SAINT-蛋白小瓶达到室温。
3. 充分涡旋 SAINT-蛋白约 30 秒。
4. 使用 1:10 的蛋白 (µg) 与 SAINT-蛋白 (µl) 比例制备复合物。对于每份转染样品，按照以下方法制备复合物：
a. 在 50µl PBS 中稀释 2µg 蛋白。
b. 向蛋白/PBS 溶液中加入 20µl SAINT-蛋白，并轻轻重悬。
5. 在室温下孵育混合物 5-10 min（溶液可能出现浑浊）。
6. 向细胞中加入复合物 (70µl)。
7. 在 CO2 培养箱中于 37 ℃ 下孵育 4 小时。
8. 如果需要更长时间的孵育，加入 50µl 血清，将血清浓度调整至 8%。
9. 进行检测。
表 1. 常用多孔板的每孔推荐量
|
格式 |
生长培养基 (µl) |
蛋白 (µg) |
PBS (µl) |
SAINT-蛋白 (µl) |
|
96 孔 |
100-200 |
0.4 |
10 |
4 |
|
48 孔 |
200-350 |
1 |
25 |
10 |
|
24 孔 |
400-750 |
2 |
50 |
20 |
|
12 孔 |
750-1500 |
4 |
100 |
40 |
|
6 孔 |
2000-3000 |
8 |
200 |
80 |
注：SAINT-蛋白试剂在 4 ℃ 下可稳定储存至少 1 年。请勿冷冻！