fivephoton TMPER-200说明书
TRANSMEMBRANE PROTEIN EXTRACTION REAGENT (TMPER-200; PLASMA PROTEIN ISOLATION)
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跨膜蛋白提取试剂
（质膜蛋白分离）
零件 tmper-200。100 毫升体积。
适用于300个10cm的汇合细胞培养皿。根据培养皿的表面积，体积可扩展到其他尺寸的培养皿。
跨膜蛋白提取
FIVEphoton Biochemicals 跨膜蛋白提取试剂 (tmPER-200 TM ) 是一种细胞裂解蛋白提取缓冲液，含有专有成分，有助于提取和分离高分子量跨膜蛋白，否则由于聚集趋势、脂筏结合或其他不溶性问题，这些蛋白在标准细胞裂解缓冲液中很难分离。Transmembrane Protein Extraction Reagent 旨在提取具有 4 个或更多跨膜结构域的蛋白质，同时也能有效分离不太复杂的跨膜蛋白质。FIVEphoton Biochemicals 跨膜蛋白提取试剂的适用性示例包括在蛋白质印迹下游应用中提高 ABC 转运蛋白、离子通道、离子交换器和 GPCR 的分辨率。
跨膜蛋白提取试剂：通用方案
研究人员首先采用协议手册中描述的技术来限制内吞作用和溶酶体靶向，否则可能导致多膜跨越蛋白的细胞质域的蛋白水解切割。在第二步中，加入添加了蛋白酶抑制剂的跨膜蛋白提取试剂以从细胞培养皿中去除细胞并溶解细胞膜。膜溶解后，使用短暂离心从含有提取的跨膜蛋白的上清液中去除细胞碎片。在 SDS-PAGE 凝胶中拆分之前，将上清液加入 Laemmli 样品缓冲液中，加热但未煮沸。对于蛋白质印迹，转移发生在添加了 SDS 和少量甲醇的转移缓冲液中。
图例。野生型 (WT) 和 deltaF508 CFTR，一种 12 TM 结构域蛋白，由 MDCK 细胞中的腺病毒感染表达，并用跨膜蛋白提取试剂提取。WT CFTR 揭示了一个 170 kD 的上带，反映了复杂的糖基化，以及一个核心糖基化带。相比之下，deltaF508 CFTR 的运输受损，保留在内质网中，因此仅与核心糖基化带合成。运输障碍是囊性纤维化的根本原因。
图标图像： CFTR 在 HEK293 细胞中稳定表达并用跨膜蛋白提取试剂提取。捕获核心和复杂糖基化的野生型变体的蛋白质印迹。
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